张萍
- 作品数：11 被引量：30H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：甘肃省自然科学基金甘肃省科技重大专项计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 五种寄生虫基因组研究进展
- 2011年
- 对近年来疟原虫、血吸虫、锥虫、环形泰勒虫和小泰勒虫等几种寄生虫基因组研究进展进行了简单概述,包括基因组测序、遗传图谱和物理图谱的构建、测序后结果的分析及筛选的功能基因与虫体致病的关系,并对基因组测序结果的应用前景进行了展望。以期从基因组水平上了解这几种寄生虫的生物学特性,从而为发现一些与致病性相关的基因及研制相应的抗虫药物奠定理论基础,此外分析克氏锥虫及寄生虫端粒酶测序结果有助于探究癌症的作用机制,从而为抗癌研究提供展新的思路。
- 张萍刘光远田占成罗金谢俊仁
- 关键词：疟原虫血吸虫锥虫环形泰勒虫
- 长角血蜱MESK基因的克隆及其生物学特性分析
- 2013年
- 为进一步了解MESK基因在长角血蜱免疫应答中的作用,克隆了长角血蜱MESK基因全长序列,采用有关生物信息学软件对该基因序列的一级结构进行了分析;构建了真核表达载体pEGFP-C1-MESK,采用脂质体转染法在HEK293细胞及HeLa细胞中对其进行了表达。48h后对细胞进行裂解,用兔抗长角血蜱阳性血清与表达出的重组蛋白进行反应,以检测重组蛋白的免疫活性。结果显示,MESK基因全长为1 426bp,包括1个1 185bp的开放阅读框。该基因含有5个N-糖基化位点、5个豆蔻酰化位点、9个酪氨酸蛋白Ⅱ激酶磷酸化位点、1个酪氨酸蛋白激酶位点、2个cAMP和cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点、1个蛋白磷酸激酶C磷酸化位点。SDS-PAGE分析及Western-blot分析表明,表达出的重组蛋白的分子质量约为71ku,且以与兔抗长角血蜱阳性血清反应,免疫原性良好。结果表明,MESK基因可以作为一种重要的分子标记参与蜱分类的研究,在作为候选抗蜱疫苗的研究中具有重要的开发价值。
- 赵波刘光远罗金张萍田占成谢俊仁田美媛王芳芳袁小松
- 关键词：长角血蜱生物信息学克隆真核表达
- 长角血蜱热休克蛋白HSP70基因的鉴定
- 从长角血蜱卵cDNA表达文库中筛选到了一个长角血蜱热休克蛋白类似物—Hsp70基因。Hsp70基因全长为231lbp,完整阅读框长度为1983bp,编码661个氨基酸,预测分子量为72.5 kDa,等电点为5.2。具有H...
- 田占成刘光远谢俊仁罗金张萍沈辉王芳芳张丽艳
- 文献传递
- 长角血蜱酸性磷酸酶全长cDNA的克隆与原核表达及其表达产物的酶活性分析
- 2011年
- 通过对长角血蜱饥饿雌性成蜱cDNA表达文库中筛选到的未知基因进行5′RACE扩增,得到了长角血蜱酸性磷酸酶全长cDNA序列。利用生物信息学方法对该基因的核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行了分析,同时构建了系统发育树。采用PCR方法扩增目的基因完整的开放阅读框,将其克隆到表达载体pGEX-4T-1中,构建重组质粒,转入BL21(DE3)中,经IPTG进行诱导表达,分别用SDS-PAGE和Wes-tern-blot分析目的蛋白的表达情况和反应原性,同时进行体外酶活性分析。结果表明,成功获得了长角血蜱酸性磷酸酶全长序列,体外高效诱导表达了约67.0 ku的重组蛋白。Western-blot表明该蛋白具有很强的反应原性,且在pH5.0时,该酶水解对硝基苯磷酸二钠的能力最强。
- 张萍刘光远田占成谢俊仁罗金
- 关键词：长角血蜱酸性磷酸酶原核表达酶活性分析
- 几种蜱MLP基因的表达及其表达产物反应原性的分析
- 2012年
- 通过对饥饿的长角血蜱雌性成蜱cDNA表达文库中筛选到的未知基因进行5′RACE扩增,以期获得长角血蜱MLP基因全长cDNA序列。设计通用引物,采用PCR方法分别从青海血蜱、麻点璃眼蜱、森林革蜱、微小牛蜱及小亚璃眼蜱中对MLP基因完整的开放阅读框进行了扩增,并将其克隆到表达载体pGEX-4T-1中,构建重组质粒,转入BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,分别用SDS-PAGE和Western-blot分析目的蛋白的表达情况和反应原性。结果表明,成功扩增了长角血蜱的MLP基因全长序列及多个蜱种的MLP基因开放阅读框序列,体外高效诱导表达了约39.2ku的不同蜱的MLP重组蛋白。Western-blot结果表明,长角血蜱的MLP重组蛋白具有很强的反应原性,且不同蜱的重组蛋白间具有很强的交叉反应性。
- 沈辉刘光远柴慧萍田占成谢俊仁罗金张萍田美媛殷宏
- 关键词：MLP原核表达
- 基于18S rRNA基因序列的我国马梨形虫分类学地位分析被引量：17
- 2011年
- 为从分子水平上阐明我国马梨形虫的种属分类特征。根据GenBank中登录的马梨形虫18SrRNA基因序列,在其高变区设计引物。PCR扩增获得大小分别为913bp、451bp的目的片段。将该片段克隆至pMD-18T载体后进行序列测定,并和GenBank上登录的其他地方株梨形虫18SrRNA基因序列进行同一性分析并构建系统发生树。分析显示,之前被称作马巴贝斯虫的虫种和泰勒虫虫种有着更密切的亲缘关系,在进化发育过程中处于同一种系,而与巴贝斯虫为明显的2个分支。我国驽巴贝斯虫肇源株与西班牙分离株(AY534883.1)仅有较小差异,其同源性高达91.8%。马泰勒虫肇源株与西班牙分离株(DQ287951.1,AY150064.2)同源性均高于91.4%。以上分析显示我国马梨形虫地方株和西班牙地方株亲缘关系最近,而与其他地方株差异相对较大。因此我国肇源株马梨形虫和西班牙地方株同属于Atbara8。
- 罗金刘光远田占成谢俊仁张萍
- 关键词：驽巴贝斯虫RRNA分类学
- 内转录间隔区1(ITS-1),用于伊氏锥虫遗传多样性分析的一个争议性标记基因
- 通过对长度为338-342bp的转录间隔区1(ITS-1)进行测序,对7个中国的伊氏锥虫分离株和一株刚果锥虫未定种进行了遗传定性。尽管中国的伊氏锥虫分离株间的转录间隔区1序列差异范围在0.3-3.8%之间,但以邻接法(N...
- 田占成刘光远谢俊仁沈辉张丽艳张萍罗金
- 文献传递
- 长角血蜱4D8基因的克隆与原核表达
- 本文旨在揭示长角血蜱保护性抗原4D8的免疫原性。根据GenBank上登录蜱的4D8基因序列设计引物，用PCR技术从长角血蜱雌蜱研磨组织cDNA中扩增出4D8基因，将其连入pGEM(R)-T Easy载体，构建重组克隆载体...
- 罗金田占成刘光远谢俊仁张丽艳张萍
- 关键词：长角血蜱保护性抗原克隆载体原核表达重组蛋白
- 文献传递
- 基于Hsp70基因的马梨形虫分类学定位分析被引量：7
- 2011年
- 【目的】为了进一步确定马泰勒虫的分类学定位。【方法】根据GenBank上登录的马巴贝斯虫Hsp70基因序列(AB248743.1),设计引物TeHsp70F,TeHsp70R,以马泰勒虫基因组DNA为模板进行扩增,获得全长为1 920 bp的核酸片段。将该基因序列与GenBank中23种已知虫种的相应序列进行分析比较。【结果】该片段编码639个氨基酸,其疏水性氨基酸达到208个,极性氨基酸167个。同一性分析显示,该基因片段与报道的马巴贝斯虫Hsp70基因(B.equi BAF02625.1)亲缘关系最近,其次是小泰勒虫(T.parva XP764717.1)和环形泰勒虫(T.annulata AAA30130.1),而与感染马属动物的另一个虫种驽巴贝斯虫(B.caballi BAF02619.1)亲缘关系较远。【结论】马泰勒虫Hsp70基因的克隆及系统发育分析显示,之前被定名为马巴贝斯虫(B.equi)的虫种隶属于泰勒虫虫种。本试验为马巴贝斯虫正确更名为马泰勒虫(T.equi)的分类地位提供了又一佐证。
- 罗金刘光远田占成谢俊仁张萍沈辉党根生
- 马梨形虫病诊断技术研究现状被引量：14
- 2011年
- 近年来马梨形虫病流行呈上升趋势,对马属动物产业的发展造成了极大的危害。因此,建立一种实时有效的检测方法就显得尤为重要。病原学诊断法、免疫学诊断法、分子生物学诊断方法的相继建立,为马梨形虫病的早期诊断提供了必要的手段。近年来单克隆抗体技术,DNA重组技术的应用,为该病的诊断提供了新的方法。
- 罗金刘光远田占成谢俊仁孙晓林张萍
- 关键词：血液原虫马梨形虫病
