曹凯
- 作品数：64 被引量：131H指数：6
- 供职机构：南昌大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江西省自然科学基金江西省教育厅科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程文化科学更多>>
- 人LMP-1基因腺病毒重组体的构建及其在骨肉瘤细胞U2OS中的表达
- 2012年
- 目的:构建表达人LIM矿化蛋白-1(LIM mineralization protein-1,LMP-1)基因的腺病毒重组体,体外感染骨肉瘤(Osteosarcoma,OS)细胞系U2OS,并鉴定LMP-1基因在U2OS中的表达。方法:以K562细胞的cDNA为文库,采用PCR方法对LMP-1进行扩增,通过TA克隆与pGEM-T载体连接并DNA测序。双酶切后并将目的基因插入至腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV,对腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV-LMP-1行双酶切和DNA测序鉴定,并通过荧光显微镜、RT-qPCR和Western blot检测pAdtrack-CMV-LMP-1在HEK-293T细胞中的表达。线性化pAdtrack-CMV-LMP-1,在BJ5183菌内完成与骨架质粒pAdeasy-1的同源重组,构建重组腺病毒质粒Ad-LMP-1。通过脂质体介导,在HEK-293A细胞内包装出复制缺陷的重组腺病毒Ad-LMP-1,大量扩增、纯化并测定滴度。用Ad-LMP-1感染OS细胞系U2OS,通过荧光显微镜、RT-qPCR和Western blot检测LMP-1在U2OS细胞中的表达。结果:双酶切和DNA测序鉴定穿梭质粒pAdtrack-CMV-LMP-1构建成功,荧光显微镜证实转染了pAdtrack-CMV-LMP-1质粒的HEK-293T细胞内有绿色荧光蛋白表达,RT-qPCR和Western blot验证了LMP-1基因的表达量明显高于对照组。通过扩增、纯化,Ad-LMP-1滴度达到1.5×109pfu/ml。荧光显微镜下观察重组腺病毒感染的U2OS内有绿色荧光蛋白表达,RT-qPCR和Western blot检测发现重组腺病毒感染U2OS后,LMP-1的mRNA和蛋白表达量明显高于对照组。结论:成功构建了人LMP-1基因腺病毒重组体,为进一步的实验研究奠定了基础。
- 刘会文黄路韩智敏罗嘉全杨东詹平戴闽曹凯
- 关键词：LIM矿化蛋白-1重组腺病毒载体表达载体构建骨肉瘤细胞
- 椎板切除术后预防硬膜外瘢痕材料的研究概况被引量：1
- 2002年
- 腰椎板切除术后硬膜外瘢痕的形成是下腰椎手术失败综合征的重要原因之一 ,同时给再次手术带来困难。目前 ,预防椎板切除术后硬膜外粘连的材料众多 ,动物、临床实验研究结果也不尽相同。
- 曹凯蒋电明
- 关键词：椎板切除术瘢痕形成
- RNA干扰组蛋白去乙酰化酶4诱导骨肉瘤细胞凋亡
- 2016年
- 目的探讨沉默组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)对骨肉瘤细胞HOS,U2OS生物学行为的影响。方法用脂质体瞬时转染法将化学合成HDAC4-siRNA转染至骨肉瘤HOS及U2OS细胞中,实时荧光定量PCR(q-PCR)法检测细胞中HDAC4 mRNA的表达;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测细胞HDAC4及其下游基因HIF-1α的蛋白表达;CCK-8法检测细胞的增殖能力;流式细胞仪检测细胞凋亡;Transwell小室法检测细胞的侵袭能力。结果转染后HOS及U2OS细胞中HDAC4 mRNA表达明显降低(P<0.01)。沉默HDAC4后HOS细胞早期凋亡率为(16.8±2.1)%,较si-control组(10.2±2.5)%明显增加(P<0.05);U2OS细胞早期凋亡率为(21.4±3.1)%,较si-control组(12.5±2.3)%明显增加(P<0.05);HOS细胞si-con组及si-HDAC4组细胞的穿膜细胞数分别为(146±34)个、(45±20)个,U2OS细胞为(207±35)个、(121±23)个,分别显著低于si-con组(P<0.05)。si-HDAC4能够明显降低HDAC4以及下游基因HIF-1α的表达。结论针对HDAC4基因的特异性RNA小干扰片段能够下调HDAC4mRNA及蛋白的表达,并抑制骨肉瘤细胞的增殖和侵袭,诱导细胞凋亡。
- 肖前仁黄路张中卒张战民陈少卿舒勇曹凯
- 关键词：骨肉瘤RNAI
- 一种脊柱矫正的导轨系统
- 本申请涉及医疗器械技术领域，尤其是涉及一种脊柱矫正的导轨系统，包括：导向构件以及至少两个矫正组件；其中，任一矫正组件均包括矫正构件、连接构件以及夹持构件；连接构件与矫正构件通过第一万向调节构件相连接，且连接构件与导向构件...
- 曹凯张秦璥
- 经第二骶椎髂骨螺钉(S2AI)徒手置钉的精准性研究
- 背景：经第二骶椎髂骨螺钉(S2AI)技术是一种可靠的骶骨骨盆固定技术,常应用于成人脊柱畸形矫形术、下腰椎翻修术中. 目的：评价临床应用S2AI技术置入髂骨螺钉的精准性. 方法：纳入2014年8月-2016年6月在我院脊柱...
- 曹凯李志云黄忠仁罗嘉全潘志敏钟俊龙陈屹伟韩智敏
- 关键词：髂骨螺钉
- 品管圈对预防颈前路植骨融合内固定术后伤口血肿的效果观察
- 目的：探讨颈前路植骨融合内固定术后伤口血肿的原因，利用品管圈降低术后血肿的发生率。方法：将我院脊柱外科2014年收治的符合纳入标准的所有颈前路植骨融合内固定术后的225例患者作为对照组，统计术后48小时伤口血肿的发生率，...
- 曹凯李志云黄忠仁陈屹伟罗嘉全钟俊龙潘志敏韩智敏
- 关键词：品管圈颈椎病
- 血管内皮生长因子及其对成骨的影响(英文)被引量：2
- 2005年
- 目的:综述有关血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfac-tor,VEGF)的实验结果及其对成骨的影响,明确VEGF是否能促进骨的形成。资料来源:资料来源于http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed和http://www.zglckf.com数据库等相关网站,采取电子数据检索方式获得。资料选择:选择有关VEGF的文章以及VEGF影响成骨的文章近30篇。不考虑文章中是否应用随机设计、盲法。数据提炼:这些研究证实了VEGF和VEGF受体的结构、生物学特性、表达。提示VEGF通过促进新生血管的形成、加快骨转换和阻止软骨细胞凋亡在软骨内成骨中扮演重要角色。膜内成骨中,在无软骨出现的情况下,成骨细胞产生、应答VEGF。VEGF激活、趋化破骨细胞,同时趋化、分化成骨细胞和促进基质的矿化。目前关于局部单纯应用外源性VEGF能否促进成骨仍有争论。但在某些情况如局部缺血环境下,增加局部VEGF可促进成骨。资料综合:与对照组相比,VEGF能通过对软骨内成骨、膜内成骨的影响促进骨的发生、形成和改建。结论:局部VEGF治疗的优势在于其既可刺激血管形成又可促进骨的形成和改建。如果最终能应用VEGF的这些特性治疗缺血性骨坏死、骨缺损、骨不连等疾病,将发现一条新的治疗途径。
- 曹凯安洪蒋电明
- 关键词：血管内皮生长因子骨生成骨骼疾病
- 后路截骨式病灶清除钛笼植骨融合术治疗胸腰椎结核的疗效分析
- 2022年
- 目的探讨后路截骨式病灶清除钛笼植骨融合术治疗胸腰椎结核的临床疗效及安全性。方法回顾性分析2014年3月至2018年11月在南昌大学第一附属医院骨科接受手术治疗的96例胸腰椎结核患者的资料,其中29例接受截骨式病灶清除钛笼植骨融合术(截骨组),67例接受刮除式病灶清除植骨融合术(刮除组)。记录两组患者的手术时间、术中出血量、住院时间、术后并发症;术后随访患者的血沉、C反应蛋白、视觉模拟评分(visual analog scale,VAS)、日本骨科协会(Japanese Orthopaedic Association,JOA)评分与Oswestry功能障碍指数(Oswestry disability index,ODI)评分;影像学评估局部Cobb角和植骨融合情况。结果截骨组手术时间为(186.0±39.6)min,较刮除组[(207.6±75.8)min]缩短(P=0.043);截骨组术中出血量为(903.0±88.9)mL,较刮除组[(1094.1±265.1)mL]减少(P=0.028)。两组患者住院时间[(9.7±1.3)d vs(10.0±1.1)d]和局部Cobb角纠正度[(13.1±5.6)°vs(12.6±4.9)°]差异无统计学意义。截骨组植骨融合时间平均为(7.7±1.3)个月,较刮除组[(8.4±1.8)个月]更短(P=0.047)。两组患者VAS、JOA、ODI评分术后均得到改善,组间差异无统计学意义。截骨组与刮除组分别有2、11例发生术后并发症。截骨组无复发病例,刮除组有5例复发。结论与刮除式病灶清除植骨融合术比较,后路截骨式病灶清除钛笼植骨融合术病灶清除更彻底、术后复发率更低,是治疗胸腰椎结核安全、有效的手术方式。
- 段平国林思俭范荣豪郭润生马胜彪段满生姚浩群张斌戴闽曹凯
- 关键词：胸腰椎结核截骨术脊椎融合
- 尤文肉瘤EWS-FLI1基因原核表达质粒的构建及鉴定被引量：2
- 2010年
- 目的:构建尤文肉瘤EWS-FLI1基因原核表达质粒。方法:从人尤文肉瘤A673细胞中提取总RNA,以RT-PCR法扩增EWS-FLI1基因序列,目的基因两侧引入SacⅠ和HindⅢ酶切位点,克隆至pMD18-T载体中,转化大肠杆菌JM109,筛选阳性克隆作PCR鉴定、酶切鉴定及测序鉴定。再将EWS-FLI1基因亚克隆至原核表达载体pQE30中,构建重组原核表达质粒pQE30-EWS-FLI1,酶切及测序鉴定。所构建的重组质粒转化JM109,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE电泳后转印到NC膜上,进行Western blot鉴定。结果:PCR结果显示扩增片段大小约为1.5kb,双酶切鉴定目的基因片段大小约为1.5kb,阳性克隆测序结果显示目的基因序列与预期相同。所构建重组质粒在大肠杆菌中表达出与预期大小相符的54kD蛋白,经鉴定系EWS-FLI1蛋白。结论:成功构建了pQE30-EWS-FLI1,并进行了原核表达,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。
- 陈文昭黄路黄山虎曹凯舒勇韩智敏安洪
- 关键词：尤文肉瘤原核表达质粒
- 血管内皮生长因子及其对成骨的影响被引量：3
- 2005年
- 曹凯安洪蒋电明
- 关键词：血管内皮生长因子血小板源生长因子成骨胎盘生长因子血管生成作用同源序列
