李润乐
- 作品数：40 被引量：38H指数：4
- 供职机构：青海大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金青海省自然科学基金青海省科技厅应用基础研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 肝片吸虫鞘脂激活蛋白样蛋白2(FhSAP-2)的原核表达及分离纯化被引量：2
- 2014年
- 目的建立肝片吸虫鞘脂激活蛋白样蛋白2(FhSAP-2)原核表达系统。方法用生物信息学软件OptimumTMCodon优化密码子适应指数(CAI)、最优密码子频率(FOP)及GC含量以获得适合大肠杆菌BL-21表达的FhSAP-2基因序列,并克隆到原核表达载体pET22b和pET28a中,经IPTG诱导其表达并经亲和层析及离子交换色谱纯化后获得目的蛋白。结果 OptimumTMCodon获得优化后的FhSAP-2序列,经测序及酶切鉴定结果表明重组质粒pET22b-FhSAP-2、pET28a-FhSAP-2构建成功,进一步实验结果表明FhSAP-2在pET28a中包涵体部位表达,可溶部位不表达;在pET22b中可溶部位表达量低,包涵体部位无表达。继而经Ni-NTA柱亲和纯化及离子交换色谱纯化获得电泳纯的FhSAP-2蛋白。结论成功建立FhSAP-2的原核表达系统。
- 李润乐康明汤锋李伟牛亮陈刚
- 关键词：肝片吸虫原核表达系统
- 多房棘球绦虫重组抗原蛋白14-3-3对小鼠继发性泡球蚴病的预防与治疗效果被引量：1
- 2020年
- 目的评价重组抗原蛋白14-3-3的免疫原性和其在多房棘球绦虫原头节继发性感染BALB/c小鼠模型中的预防及治疗效果。方法构建多房棘球绦虫重组抗原蛋白14-3-3的原核表达系统,经IPTG诱导和Ni^2+亲和层析法得到高纯度的14-3-3重组蛋白免疫BALB/c小鼠。用ELISA法检测免疫后小鼠血清中的抗体和细胞因子水平变化;在泡球坳小鼠继发性感染模型中观察囊泡数量和重量。结果成功表达并获取高纯度的多房棘球绦虫重组14-3-3抗原蛋白,免疫原性研究发现重组抗原蛋白14-3-3具有较好的免疫原性并激活小鼠产生Th1/Th2混合型免疫应答;在预防效果评价模型中,经14-3-3抗原免疫后,小鼠囊泡数量减少(59.84±15.09%),P=0.049,囊泡重量减轻(83.28±18.01%),P=0.049;在治疗效果评价模型中,经14-3-3抗原免疫后小鼠囊泡重量减轻(72.28±11.47%),P=0.006。结论多房棘球绦虫重组抗原蛋白14-3-3对继发性小鼠泡球坳病具有预防和治疗作用。
- 魏威王蕾周培张颖李润乐李润乐
- 关键词：多房棘球绦虫原核表达免疫
- 多房棘球蚴抗原亮氨酸氨基肽酶的原核表达纯化及酶活性分析
- 2020年
- 目的构建多房棘球坳抗原亮氨酸氨基肽酶(Leucine aminopeptidase,LAP)原核表达系统,并做纯化及最佳酶活性条件分析,为后续作用机制研究奠定基础。方法利用Optimum^TM Codon软件对LAP编码序列进行优化后合成目的基因,连接入表达载体pCzn1后转化入大肠杆菌BL-21菌株,在发酵过程中加入IPTG诱导目的蛋白表达后,通过Ni柱亲和纯化获得高纯度重组目的蛋白LAP。以亮氨酸对硝基苯胺(Leu-pNA)为底物测定LAP酶活性,观察酶活性的最适pH和温度,以及不同金属离子对其酶活性的影响。结果﹐基因测序和酶切鉴定显示pCzn1-LAP质粒构建成功,通过Ni柱亲和纯化得到一个大小约为57KD的蛋白。当pH为9.0、温度为60℃时LAP酶活性最强;金属离子对LAP酶活性影响的小大顺序为Co^2+>Zn^2+>Ca^2+>Mn^2+>Mg^2+>Ba>K^+。结论本研究成功构建LAP原核表达系统,表达和纯化了LAP蛋白,获得了酶活性最强时的基础条件,为研发抗寄生虫药物及探究LAP在多房棘球坳感染过程的作用机制奠定了基础。
- 王蕾杨宝良魏威周培刘海生李润乐李润乐
- 关键词：多房棘球蚴原核表达酶活性
- 一种多房棘球蚴亚单位疫苗LTB-Emy162的设计、制备方法和应用
- 本发明涉及一种多房棘球蚴亚单位疫苗LTB‑Emy162的设计、制备方法和应用，多房棘球蚴亚单位疫苗LTB‑Emy162的活性成分是一条多肽，主要由多房棘球蚴抗原蛋白Emy162氨基酸序列以及黏膜免疫佐剂大肠杆菌不耐热毒素...
- 汤锋李润乐杨全余格日力樊海宁刘川川冯琳刘文磊杨宝良
- 文献传递
- 基于MGB探针分型检测多房棘球蚴及细粒棘球蚴的实时定量PCR方法及检测试剂盒
- 本发明公开了一种基于MGB探针分型检测多房棘球蚴及细粒棘球蚴的实时定量PCR方法及检测试剂盒，包括设计引物、设计MGB探针和PCR扩增条件的选择，检测试剂盒内含有PCR引物对的外引物对序列及MGB分型检测探针序列。本发明...
- 汤锋格日力樊海宁李润乐刘川川廖瑜冯琳蒋巧燕陈星宇
- 文献传递
- 藏药烈香杜鹃挥发油在体外杀伤多房棘球蚴药效研究被引量：8
- 2018年
- 目的明确烈香杜鹃挥发油在体外对多房棘球蚴的杀伤作用。方法采用水蒸气蒸馏法分离烈香杜鹃叶中的挥发油成分,并以不同的浓度在体外与原头蚴共培养,在光镜下观察原头蚴的死亡率及结构变化。结果浓度为10 mg/mL的烈香杜鹃挥发油体外培养作用0.75 h后原头蚴的死亡率是99.00±1.000%(P<0.001);浓度为5 mg/mL时作用12 h是80.00±2.000%(P<0.001);浓度为1 mg/mL时作用12 h是43.00±2.000%(P<0.001)。扫描电镜观察发现死亡原头蚴体表微绒毛消失,体表受到损伤。结论烈香杜鹃挥发油在体外对多房棘球蚴具有较强的杀伤作用。
- 李润乐李占强廖梦娇李占强杨全余汤锋
- 关键词：烈香杜鹃挥发油多房棘球蚴
- 稳定过表达miR-125b对乳腺癌MCF-7细胞转移能力的影响
- 2014年
- 目的:通过构建稳定表达miR-125b的真核表达载体以探讨miR-125b对乳腺癌MCF-7细胞转移能力的影响。方法:构建重组质粒pSilencer 4.1-miR-125b并转染MCF-7细胞,通过G418筛选得到稳定过表达miR-125b的乳腺癌细胞系MCF-7-miR-125b,并结合二维划痕愈伤实验、三维Transwell侵袭小室实验和集落形成实验考察过表达miR-125b对乳腺癌细胞系转移能力的影响。结果:成功获得了稳定过表达miR-125b的乳腺癌细胞系MCF-7-miR-125b,其在二维和三维水平的迁移能力均明显强于MCF-7细胞,细胞新生克隆数较MCF-7亦有显著提高。结论:miR-125b可使乳腺癌细胞转移能力增强。
- 汤锋杨珏李润乐格日力奚涛
- 关键词：真核表达载体乳腺癌细胞转移
- 一种新型肝片吸虫多表位疫苗的设计、制备方法和应用
- 本发明提供一种新型肝片吸虫多表位疫苗，其活性成分是一条多肽，主要由肝片吸虫鞘脂激活蛋白样蛋白‑2 Th和B细胞抗原表位的多拷贝体以及黏膜免疫佐剂霍乱毒素B亚基构成。本发明主要通过基因合成技术合成一个人工基因，其包含有鞘脂...
- 陈刚汤锋李润乐康明周虎冯琳
- 文献传递
- 一种多房棘球蚴多表位疫苗LTB-AE的设计、制备方法和应用
- 本发明涉及一种多房棘球蚴多表位疫苗LTB‑AE的设计、制备方法和应用，多房棘球蚴多表位疫苗LTB‑AE的活性成分是一条多肽，主要由多房棘球蚴多表位肽AE以及黏膜免疫佐剂大肠杆菌不耐热毒素B亚基(LTB)构成。本发明主要通...
- 格日力汤锋李润乐樊海宁刘川川冯琳刘文磊杨宝良杨全余
- 文献传递
- 多房棘球蚴亮氨酸氨基肽酶优势抗原表位的鉴定被引量：1
- 2021年
- 目的根据预测多房棘球蚴亮氨酸氨基肽酶(Leucine aminopeptidase,LAP)抗原表位的结果,进一步鉴定其优势的T细胞和B细胞抗原表位。方法构建重组质粒pCzn1-LAP后进行蛋白原核表达与纯化,将纯化的LAP蛋白进行动物免疫后,利用脾脏淋巴细胞增殖、流式细胞术、ELISA pot、ELISA等方法鉴定优势抗原表位。最后,利用SWISS-MODEL软件对LAP蛋白3D结构建模,PyMOL软件对鉴定的LAP优势抗原表位分布进行准确定位。结果pCzn1-LAP菌株诱导表达的蛋白约为57 kDa,蛋白经过复性后成功纯化。流式细胞术鉴定的Th1型优势抗原表位为LAP 79-63、LAP 396-410和LAP 106-120;Th2型优势抗原表位为LAP 13-28、LAP 495-510和LAP 396-410。ELISA pot鉴定的Th1型优势抗原表位为LAP 396-410、LAP 504-518和LAP 106-120;Th2型优势抗原表位为LAP 504-518、LAP 313-328和LAP 396-410。BALB/c小鼠血清的抗原表位特异性ELISA筛选出的优势B表位结果为LAP 464-479、LAP 495-510和LAP 313-328。LAP蛋白3D结构建模成功,LAP优势抗原表位分布于表面居多。结论多房棘球蚴LAP蛋白优势T细胞和B细胞抗原表位鉴定成功,使得研制抗多房棘球蚴感染的多价表位疫苗成为可能。
- 王蕾魏威周培刘海生杨宝良李润乐汤锋
- 关键词：多房棘球蚴亮氨酸氨基肽酶抗原表位
