李跃辉
- 作品数：4 被引量：15H指数：3
- 供职机构：湖南医科大学肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 用EBV转化的大肠癌患者B细胞构建噬菌体抗体库
- 目的:构建全人源化的噬菌体抗体库。方法:采用 EBV 转化技术,ELISA 技术,PCR 技术,噬菌体表面呈现技术。结果:EBV 转化8例大肠癌患者 PBMC,其中七例有抗大肠癌抗体产生,多次 PCR 扩增出5种 VH（...
- 朱建高李跃辉胡锦跃李官成周国华李小玲孙去病
- 关键词：EB病毒转化噬菌体抗体库
- 文献传递
- 抗大肠癌噬菌体单链抗体的筛选及初步鉴定被引量：8
- 2001年
- 应用 3种方法 (肿瘤细胞膜表面和胞内、裸鼠体内和组织切片 ) ,从全人源化的抗大肠癌噬菌体初级抗体库中筛选肿瘤特异性的噬菌体单链抗体 (Sc Fv) .在肿瘤细胞经过 3轮亲和选择 ,回收结合胞膜和内化进入胞内的噬菌体 ,得到抗肿瘤噬菌体单链抗体的富集倍数为 430倍 ;荷瘤裸鼠体内注入初级抗体库后 ,在不同时刻点处死裸鼠 ,回收肿瘤组织内的噬菌体 ,其回收率在 2 4 h时最高 ;初级抗体库与大肠癌组织切片亲和选择后 ,从冰冻组织切片上比从石蜡组织切片上回收得到的噬菌体高出约 1 .6倍 .从上述方法挑选单克隆 ,经 ELISA筛选抗大肠癌阳性噬菌体克隆株 ,分离得到 5个对大肠癌细胞反应较好的单克隆噬菌体单链抗体 .进一步用细胞 ELISA检测对各种肿瘤细胞的特异性反应 ,其中 4个对大肠癌细胞有很好的特异性 ,1个克隆对所有肿瘤细胞均有反应 .因此 ,3种方法用于筛选抗大肠癌噬菌体初级抗体库是有效的 ,具有推广和应用价值 .
- 朱建高胡锦跃李官成李跃辉周国华李小玲孙去病
- 关键词：噬菌体呈现技术大肠癌单链抗体噬菌体抗体
- 用EBV转化的大肠癌患者B细胞构建噬菌体抗体库被引量：4
- 2000年
- 目的 构建全人源化的噬菌体抗体库。方法 采用ＥＢＶ转化技术，ELISA技术，PCR技术，噬菌体表面呈现技术。结果 EBV转化8例大肠癌患者PBMC，其中七例有抗大肠癌抗体产生，多次PCR扩增出VH（γμ）和9种VL（κ，λ）基因，经简并组合成15种ScFv基因。在体外与表达载体fUSE5连接，电导入大肠杆菌MC1061，经四环素抗性筛选，得到库容为1．1×10^7的初级噬菌体抗库。全长ＳvFv基因的插入库为７０％。结论 应用ＥＢＶ转化技术联菌体抗体库技术，制备全人源化的抗肿瘤单链抗体（SvFv)，这一策略是完全可行的。
- 朱建高李跃辉等
- 关键词：EB病毒转化噬菌体抗体库大肠癌B细胞
- 全人源化抗结肠癌单链抗体基因的克隆和表达被引量：6
- 2001年
- 分离大肠癌患者外周血单个核细胞 (PBMC) ,在体外用灭活的大肠癌细胞再次致敏后 ,经EBV转化 ,然后用有限稀释法克隆分泌抗大肠癌细胞抗体的B细胞 ;多次PCR扩增和克隆其抗体可变区基因 (VH VLcDNA) ,并用编码 (Gly4Ser) 3 的互补序列连接成ScFvcDNA(VH linker VL) ,经酶切克隆入载体fUSE 5RF ,使之呈现于噬菌体表面。通过用 3轮肿瘤细胞和正常人PBMC淘选后 ,ELISA检测 80 %的单克隆噬菌体抗体显示了很强的阳性反应。以上结果初步说明 :联合应用体外致敏、EBV转化。
- 朱建高李官成李跃辉胡锦跃周国华胡志伟孙去病李小玲
- 关键词：噬菌体呈现聚合酶链反应
