林董
- 作品数：15 被引量：45H指数：4
- 供职机构：福建师范大学福清分校生物与化学工程系更多>>
- 发文基金：福建省自然科学基金福建省教育厅A类人文社科/科技研究项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- MTT法测定8种中草药体外抗肝癌细胞SMMC-7721活性(摘要)(英文)
- 2009年
- [目的]建立一套适合于实验室的高效、快速的体外抗肝癌活性物质筛选模型。[方法]首先,选用乙醇为溶剂对芸香草、半边莲、蜜蒙花、甘草、地榆、柴胡、旱芹和莪术8种中草药植物材料进行浸提。然后通过MTT法对8种中草药体外抗肝癌细胞SMMC-7721的活性进行初测。试验采用二甲基亚砜(DMSO)与甘氨酸-NaOH缓冲液作为溶剂,消除剩余培养基对吸光值的影响。为确保细胞株最大吸收峰位置不变,酶标仪采用570 nm波长测定OD值。为验证筛选出的3种物质对癌细胞的抑制作用,以活性物质浓度为横坐标,细胞生长抑制率为纵坐标,描绘肿瘤细胞生长曲线,倒置显微镜观察细胞不同阶段的生长状况。[结果]倒置显微镜下观察3种细胞阶段的形态:正常状态下,细胞的透明度大、折光性强、轮廓不清;当细胞受污染时,折光性变弱,胞质中常出现空泡、脂滴、颗粒样物质,细胞之间空隙加大,细胞变得不规则,失去原有特点;而受活性物质作用细胞尽管仍然贴壁,但其萎缩,边缘清晰化;三者之间存在一定区别。MTT法培养板定性检测显示,柴胡、莪术、甘草细胞培养孔内的液体颜色都较浅且比较均匀,可见,它们对细胞生长具有明显的抑制作用。而半边莲培养孔内液体颜色深浅不一。还有一些培养孔内液体颜色较深,如卤地菌、蜜蒙花、地榆和旱芹,表明它们对细胞生长没有明显的抑制作用。进一步定量计算表明,浓度为1.0～1.5 mg/ml的甘草乙醇浸提液(ESCG)、莪术乙醇浸提液(ESCC)和柴胡乙醇浸提液(ESCB)对体外培养的肝癌细胞SMMC-7721有较强的抑制增殖作用,抑制率分别为51.6%、48.5%和52.9%。甘草、柴胡和莪术3种物质的抑制作用曲线结果也验证了它们对细胞生长有明显的抑制作用,并且抑制程度与浓度呈正相关。[结论]MTT法筛选可作为重要抗肿瘤的1个基本筛选模型。
- 林董何爱明吴丽萍吴祖建
- 关键词：MTT法肝癌细胞SMMC-7721抑制率
- 缺氧诱导因子-1α与碳酸酐酶Ⅸ在鼻息肉组织中的表达及相关性分析被引量：4
- 2010年
- 目的:研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、碳酸酐酶Ⅸ(CAⅨ)在鼻息肉组织中的表达及其相关性,探讨HIF-1α、CAⅨ在鼻息肉发病过程中的作用。方法:收集28例鼻息肉组织(鼻息肉组)和12例正常下鼻甲组织(对照组),用免疫组织化学法检测鼻息肉组与对照组中HIF-1α与CAⅨ的表达,观察比较2组之间表达的差异。结果:免疫组织化学染色显示鼻息肉组HIF-1α、CAⅨ免疫阳性细胞数及着色强度均明显高于对照组。图像分析显示,鼻息肉组HIF-1α、CAⅨ的积分吸收度值(103/HP)分别为21.76±3.52、26.87±4.60,与对照组3.37±1.65、3.25±1.20相比差异有统计学意义(P<0.05);Spearman等级相关分析显示,鼻息肉组中HIF-1α表达与CAⅨ表达密切相关(r=0.820,P<0.01)。结论:鼻息肉组中HIF-1α、CAⅨ表达均上调,且二者有协同表达关系,说明鼻息肉组织中存在缺氧现象,再加上感染、炎症等作用使氧耗增多,能量代谢失调,加重局部缺氧,HIF-1α表达升高,并且能够激活、上调CAⅨ的表达,从而在缺氧状况下维持细胞的正常pH值,使细胞适应缺氧微环境,从而保证缺氧区域细胞的持续生长和增殖,最终形成恶性循环,导致鼻息肉的形成。
- 林海林董陈贤明张贤
- 关键词：鼻息肉缺氧诱导因子-1Α
- PI3K/Akt/mTOR信号转导通路在鼻息肉中的表达被引量：2
- 2012年
- 目的:研究磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在鼻息肉中的表达及相关性,探讨PI3K/Akt/mTOR信号转导通路在鼻息肉发病过程中的作用。方法:鼻息肉组织28例和正常下鼻甲组织12例,用免疫组化Elivison二步法及Western blot检测鼻息肉组与对照组组织中PI3K、Akt与mTOR的表达,比较两组之间的表达差异。结果:鼻息肉组PI3K、Akt与mTOR免疫阳性细胞数及着色强度均明显高于对照组,图像分析显示鼻息肉组PI3K、Akt、mTOR的积分光密度(IOD,103/HP)分别为30.36±3.78、32.70±2.30、35.67±1.26,与对照组3.63±1.55、2.38±1.36、2.79±0.78相比有显著性差异(P值均<0.01);Spearman等级相关分析显示,鼻息肉组PI3K、Akt、mTOR表达密切相关(P<0.01);Western blot检测发现PI3K、Akt与mTOR在鼻息肉组织中特异性表达强度高于对照组(P<0.01)。结论:鼻息肉组织中PI3K、Akt和mTOR表达均上调,三者有协同表达关系,提示可能是通过PI3K/Akt/mTOR信号转导通路使炎性细胞凋亡受到抑制,导致慢性炎症反应,最终形成鼻息肉。
- 林董林海戴雄雄林婷
- 关键词：鼻息肉PI3KAKTMTOR
- MTT法测定八种中草药体外抗肺癌细胞SPC-A1活性被引量：4
- 2011年
- [目的]建立一套高效、快速的体外中草药抗肺癌活性物质筛选模型。[方法]采用MTT法,对芸香草、地榆、甘草、柴胡、莪术、蜜蒙花、半边莲和旱芹等8种中草药体外抗肺癌细胞SPC-A1的活性进行检测。分析肿瘤细胞生长曲线,观察倒置显微镜下肺癌细胞在不同阶段的生长状况。[结果]在中草药活性物质作用下细胞尽管仍然贴壁,但出现萎缩及边缘清晰化,与生长状况良好的细胞形态区别明显。浓度为1.5mg/ml的莪术乙醇浸提液(ESCC)和甘草乙醇浸提液(ESCG)对体外培养的肺癌细胞SPC-A1有较强的抑制增殖作用,抑制率分别为:52.9%和51.6%,且抑制作用随着浓度的加大而加强。[结论]MTT法筛选可作为8种中草药抗肺癌细胞的一个基本筛选模型。
- 林董何爱明吴祖建
- 关键词：MTT法抑制率
- MTT法测定8种中草药体外抗肝癌细胞SMMC-7721活性被引量：11
- 2009年
- [目的]建立一套适合于实验室高效、快速的体外抗肝癌活性物质筛选模型。[方法]通过MTT法,对芸香草、半边莲、蜜蒙花、甘草、地榆、柴胡、旱芹和莪术等8种中草药体外抗肝癌细胞SMMC-7721的活性进行初测;描绘肿瘤细胞生长曲线,倒置显微镜观察细胞不同阶段的生长状况。[结果]受活性物质作用细胞尽管仍然贴壁,但萎缩,边缘清晰化,与生长状况良好的细胞形态有明显区别;浓度为1.0～1.5mg/ml的甘草乙醇浸提液(ESCG)、莪术乙醇浸提液(ESCC)和柴胡乙醇浸提液(ESCB)对体外培养的肝癌细胞SMMC-7721有较强的抑制增殖作用,抑制率分别为51.6%、48.5%和52.9%,且抑制作用随着浓度的增加而加强。[结论]MTT法筛选可作为重要抗肿瘤的1个基本筛选模型。
- 林董何爱明吴丽萍吴祖建
- 关键词：MTT法肝癌细胞SMMC-7721抑制率
- RSV编码的4种蛋白在“AcMNPV-sf9昆虫细胞”体系中的重组表达
- 2008年
- 应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)获得水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)的4个基因NS2、NS3、CP和SP,并将它们克隆至pMD-18-T载体上.得到的重组质粒pMD-18-T-NS2、pMD-18-T-NS3、pMD-18-T-CP和pMD-18-T-SP经XbaⅠ/HindⅢ双酶切,分别与经相同方法酶切的苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa california nuclear polyhedrosis virus,AcM-NPV)转移载体pFastBacHTb相连接,构建重组转移质粒pFastBacHTb-X(pFastBacHTb-NS2、pFastBacHTb-NS3、pFastBacHTb-CP和pFastBacHTb-SP).序列测定表明,目的基因准确地插入到表达载体中.重组质粒pFastBacHTb-X通过转化包含有穿梭载体的大肠杆菌(Escherichia coli)感受态细胞DH10Bac,得到重组穿梭质粒rb-X(rb-NS2、rb-NS3、rb-CP和rb-SP).rb-X侵染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)离体细胞(sf9)24-72 h后,在荧光倒置显微镜可见光200倍视野下观察到细胞增大、培养液和细胞内出现颗粒状物质、部分细胞破裂甚至裂解等一系列与正常sf9细胞形态有明显区别的现象.rb-X侵染细胞72h后,从细胞提取蛋白,电泳分析得到4个条带,大小分别为28.2、29.2、40.2和25.2 ku,与预测的4种融合蛋白大小一致.Western blotting分析分别得到4条单一条带,证明了RSV NS2、NS3、CP和SP基因在"AcMNPV-sf9昆虫细胞"真核表达体系中成功表达.
- 林董何柳谢荔岩吴祖建林奇英谢联辉
- 关键词：水稻条纹病毒苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒杆状病毒表达系统
- GFP与水稻条纹病毒病害特异蛋白的融合基因在sf9昆虫细胞中的表达
- 2008年
- 用重叠延伸PCR（overlap Polymerase Chain Reaction，overlap-PCR）方法获得了含有绿色荧光蛋白（Green fluorescence protein，GFP）和水稻条纹病毒（Rice stripe virus，RSV）病害特异性蛋白SP（Disease-specific protein）两者的融合基因（GFP-SP），并将其克隆至载体pMD18-T，得到的重组质粒pMD18-T-GFP-SP经Xba Ⅰ／Hind Ⅲ双酶切后与经相同方法处理过的杆状病毒转移载体pFastBacHTb相连接构建成重组转移质粒pFastBacHTb-GFP-SP。酶切和测序鉴定证明了其序列的正确性并且无移码现象发生。将此质粒转化入含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac，得到含有目的基因片段的重组杆状病毒穿梭质粒rb-GFP-SP。以之转染草地贪夜蛾（Spodoptera frugiperda，sf9）细胞，24～48h后在显微镜200倍可见光视野下观察到被感染细胞发生了细胞和细胞核变大、细胞内颗粒物增多、细胞脱落甚至裂解等一系列与正常的st9昆虫细胞形态有明显区别的变化。荧光显微镜下可见部分细胞发出清晰的绿色荧光，且大部分荧光集中在细胞质部分。这些结果表明，GFP-SP融合蛋白在st9昆虫细胞内成功表达。
- 林董郑璐平谢荔岩吴祖建林奇英谢联辉
- 关键词：水稻条纹病毒绿色荧光蛋白
- 毛头鬼伞(Coprinus comatus)中一种抗病毒蛋白y3特性和氨基酸序列分析(英文)被引量：9
- 2008年
- 食用菌中含有多种抗病毒蛋白,可用于植物保护.利用离子交换层析技术和凝胶层析技术,从食用菌毛头鬼伞中提取到抗植物病毒蛋白y3.实验结果表明,y3是一种糖蛋白,利用Western杂交方法可以在发酵菌丝体和子实体中同时检测到,说明可能是组成型表达.根据其N端氨基酸序列,使用RACE-PCR克隆技术,获得了蛋白的氨基酸序列和部分cDNA序列.浓度为2.0μg/ml时,蛋白y3对烟草花叶病毒(TMV,20μg/ml)侵染心叶烟的抑制率为50%,实验同时表明,y3还可抑制病毒在寄主普通烟Nicotiana tabacum var.K326中的复制.
- 吴丽萍吴祖建林董方芳林奇英谢联辉
- 关键词：食用菌毛头鬼伞抗病毒活性克隆
- 八种中草药中抗肿瘤活性物质体外筛选及其机制初探
- 该实验进行了抗肿瘤活性物质体外筛选及其作用机制的研究.首先用MMT法对芸香草、半边莲、蜜蒙花、甘草、地榆、柴胡、旱芹和莪术等8种中草药作用于癌细胞进行筛选.结果表明,浓度为1.0-1-5mg/ml的甘草乙醇浸提液(ESC...
- 林董
- 关键词：抗肿瘤MTT法活性物质凋亡
- 文献传递
- 甘草乙醇浸提液诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的研究
- 2009年
- 探讨甘草乙醇浸提液对肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响。经MTT法测定表明甘草乙醇浸提液对肝癌细胞SMMC-7721的半数致死浓度(IC_(50))为1.246 mg/mL,细胞生长抑制率与甘草乙醇浸提液浓度呈正相关。作用后的癌细胞在Hoechst33342荧光染料作用下呈现草蓝色荧光,在形态上具有明显的细胞凋亡现象。提取其DNA进行琼脂糖凝胶电泳,出现明显的梯状条带。因此,甘草乙醇浸提液对肝癌细胞具有显著的抗增殖作用,它能够诱导肝癌细胞的凋亡。
- 林董连超超肖文艳谢荔岩吴祖建
- 关键词：肝癌细胞SMMC-7721诱导凋亡抗增殖
