目的克隆并分析籽鹅卵巢产蛋性能相关基因EST1的全长cDNA序列。方法利用实时荧光定量PCR技术对EST1基因在籽鹅产蛋前期与产蛋期卵巢中mRNA表达水平进行检测,并采用RACE(Rapid amplification of cDNAends,RACE)技术对该基因全长cDNA序列进行克隆,应用生物信息学预测方法对其编码的蛋白质进行分析。结果籽鹅产蛋期卵巢组织中EST1基因mRNA的表达水平显著高于产蛋前期(P<0.05)。经RACE技术获得EST1基因全长cDNA序列长1715bp,具有单一的完整开放阅读框(ORF,14～1318bp),推测编码蛋白含434个氨基酸残基,相对分子质量为107100,等电点为5.00。该蛋白为细胞质内蛋白,含3个跨膜螺旋,蛋白序列中含1个信号肽切割位点。结论经分子生物学软件进行蛋白质功能预测,初步确定EST1基因为籽鹅α-烯醇化酶蛋白基因,推测该基因可能参与籽鹅产蛋性能的分子调控。
为分离籽鹅垂体组织特异性表达的功能基因,以籽鹅(Anser anser)垂体组织为试验材料,以λTriplEx2为载体,用SMART(Switching mechanism at 5′end of RNA transcript)方法构建了籽鹅垂体组织的全长cDNA文库。结果表明,该文库初始滴度为6×105pfu/mL,重组率为95%,插入片段长度集中在0.5～2kb。随机挑取143个克隆测序,所获得的unigene比率为87%,与NCBI GenBank中BLAST进行比对,其中74个EST序列在鸡类或其他物种中已经具有同源序列,34个EST是新基因。
