王成刚
- 作品数：4 被引量：18H指数：2
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- 微小RNA-195靶向调控Delta样配体4抗结直肠癌分子机制研究被引量：2
- 2021年
- 目的观察微小RNA(microRNA,miR)-195调控结直肠癌中Notch通路配体Delta样配体4(Dll4)表达,探讨其作用靶点,明确miR-195通过Notch通路抗结直肠癌的分子机制。方法收集北京大学人民医院胃肠外科2010年11月至2011年2月56例行结直肠癌根治术切除的标本,3、应用芯片技术筛选6例结直肠肿瘤组织和正常肠黏膜组织中micro-RNA的表达差异,用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-195在组织中相对表达量,应用固定化蛋白质印迹法(Western blot)检测56例结直肠癌组织及其邻近正常肠黏膜中Notch通路中Dll4蛋白表达;采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-195与Dll43’端非编码区(3’UTR)区的相互作用及活性,采用基因过表达miR-195(40 pmol/L)处理结肠癌细胞系SW480,运用流式细胞仪观察其对细胞凋亡的影响,Western blot检测通路相关蛋白Dll4、锯齿状蛋白1(Jagged1)、Notch受体胞内段(NICD)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、转录因子发状分裂相关增强子1(HES1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、核因子-κB(NF-κB)的表达。组间比较采用方差分析(ANOVA),独立样本t检验比较蛋白表达量差异,统计学方法分别采用独立样本t检验、配对样本t检验及单因素方差分析。结果结直肠癌组织中miR-195表达水平明显低于正常肠黏膜,而Dll4蛋白表达水平高于正常肠黏膜,分别为正常肠黏膜的0.34倍(0.341±0.008)及1.92倍(1.922±0.003)(t=3.116、2.374,P<0.05),差异均有统计学意义,体外转入miR-195后,Dll4荧光素酶活性低于对照组(0.442±0.010、1.010±0.002,t=4.305,P<0.01),差异有统计学意义,miR-195和γ-分泌酶抑制剂(DAPT)都可阻断Notch1通路,抑制SW480细胞的增殖(3.1%比17.3%,t=4.232,P<0.01),差异有统计学意义,诱导其凋亡(13.7%比48.3%,t=8.355,P<0.01),两者具有协同作用(t=7.474,P<0.01),差异有统计学意义。同时Notch通路相关蛋白NICD、Hes-1随作用时间延长而表达下降。结论结直肠癌中miR-195�
- 张辉王成刚崔志荣叶颖江周静
- 关键词：结直肠癌信号转导通路
- MAGE—A3、MAGE—A4和MAGE—A10蛋白在大肠癌组织中的表达及临床意义
- 2012年
- 目的 探讨MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A10基因在结直肠原发腺癌组织中的蛋白表达及临床意义.方法 采用组织芯片技术、免疫组化方法分析多种MAGE基因在97例结直肠原发腺癌配对癌组织、癌旁组织中的蛋白表达.统计学方法采用x2检验.结果 MAGE-A3,MAGE-A4,MAGE-A10蛋白在97例结直肠原发腺癌组织中的表达率分别为57％（56/97）,63％（61/97）,28％（27/97）.MAGE-A3在低分化腺癌中的表达率明显高于中分化和高分化腺癌中的表达率（x2=9.133,P=0.010）.MAGE-A10在低分化腺癌中的表达率明显高于中分化和高分化腺癌（x2=15.280,P=0.000）；在TNMⅢ＋Ⅳ期中的表达率明显高于Ⅰ＋Ⅱ期（x2=4.227,P=0.040）；在有淋巴结转移原发灶中的表达率明显高于无淋巴结转移原发灶（x2 =5.557,P=0.018）；且随淋巴结转移数目的增多在原发灶表达率显著增高（x2=7.296,P=0.026）.结论 MAGE基因的蛋白表达与结直肠癌的病理组织学分化、TNM分期、癌淋巴结转移有关.MAGE-A3和MAGE-A10可能成为结直肠癌的预后标志物及结直肠癌免疫治疗的候选靶点.
- 刘芳芳沈丹华王杉叶颖江丘辉王成刚张彦斌宋秋静
- MiR-195和DLL4蛋白表达与结直肠癌临床病理特征及预后的关系被引量：16
- 2021年
- 目的分析MiR-195与DLL4蛋白在结直肠癌组织中的表达模式,探讨二者与结直肠癌患者临床病理指标及预后的关系。方法采用实时荧光定量PCR检测miR-195在56例结直肠癌组织中microRNA相对表达量,用Westerm blot和免疫组化检测DLI4蛋白的表达和肿瘤微血管密度,分析二者表达模式与结直肠癌患者临床病理学指标及预后的关系。采用基因过表达miR-195处理结肠癌细胞系SW480,Westem blot检测通路相关蛋白DLL4、Jagged1、Noth受体胞内段、CyclinD1、Hesl、Bcl-2及NF-kB的表达。结果结直肠癌组织中DLL4蛋白表达水平高于正常结直肠组织,平均为正常结直肠组织中的(2.342±0.004)倍(t=5.323,P=0.018);而miR-195表达水平低于正常结直肠组织,平均为正常结直肠组织的(0.277±0.005)倍(t=2.371,P=0.008)。DLL4蛋白表达水平与miR-195表达呈负相关(r=-0.881,P=0.015)。二者表达与结直肠癌的分化程度、淋巴结转移、TNM分期密切相关。DLL4蛋白高表达患者的预后差于DLL4蛋白低表达的患者(P=0.013),miR-195低表达患者的预后差于miR-195高表达患者(P=0.009),差异均有统计学意义。miR-195可阻断Notch通路,其相关蛋白ICN、Hes-1随作用时间延长而表达下降。结论miR-195与Notch拮抗性表.达可能与结直肠癌发生发展密切相关,可作为结直肠癌判定预后的新的指标。
- 张辉王成刚崔志荣叶颖江周静
- 关键词：结直肠肿瘤预后
- PLAC1／CP1蛋白在结直肠癌组织中的表达及其临床意义
- 2010年
- 目的 检测PLAC1/CP1（cancer-placenta 1）基因在结直肠癌肿瘤组织中的表达,探讨其与临床病理因素的关系.方法 免疫组化方法检测PLAC1/CP1基因在125例结直肠癌配对癌组织、癌旁组织芯片中的蛋白表达.统计学采用χ2检验.结果 PLAC1/CP1蛋白在125例结直肠癌组织中的表达率为57.6%（72/125）.在原发腺癌中的表达率为56.7%（55/97）,在低分化腺癌、中分化腺癌和高分化腺癌的表达分别为78.9%（15/19）、55.7%（34/61）、35.3%（6/17）,差异有统计学意义（χ2=7.026,P=0.03）;在TNMⅢ＋Ⅳ期中的表达率为71.2%（37/52）,明显高于Ⅰ＋Ⅱ期的表达（40%,18/45）（χ2=9.537,P=0.002）;在有淋巴结转移的原发灶中的表达率为69.6%（32/46）明显高于无淋巴结转移者的45.1%（23/51）（χ2=5.897,P=0.015）;随淋巴结转移数目的增多,PLAC1/CP1在原发灶的表达显著增高（χ2=13.353,P=0.001）.结论 PLAC1/CP1基因的蛋白表达与结直肠癌的组织学分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关.
- 刘芳芳沈丹华王杉叶颖江王成刚张彦斌宋秋静
- 关键词：结直肠肿瘤
