王艺芳
- 作品数：3 被引量：13H指数：2
- 供职机构：大连医科大学检验医学院更多>>
- 发文基金：辽宁省自然科学基金辽宁省科技厅自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Bmi-1-siRNA对肺腺癌A549细胞体内外增殖能力的影响被引量：6
- 2013年
- 背景与目的:原癌基因Bmi-1是多梳基因家族中的一员,能调节正常干细胞和肿瘤干细胞的自我更新能力。近年来发现其在多种恶性肿瘤中表达上调。本文旨在观察Bmi-1基因沉默对肺腺癌A549细胞体内外增殖的影响,并初步探讨其机制。方法:根据本实验室设计的4条针对Bmi-1的小干扰RNA(siRNA)序列,选择一条已经证实最有效的序列作为靶序列和一条随机序列作为阴性对照,构建重组逆转录病毒siRNA表达载体并将其转染入A549细胞中;应用RT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测对Bmi-1基因的沉默效果;应用MTT比色法、台盼蓝拒染法及平板克隆形成实验检测Bmi-1-siRNA对A549细胞体外增殖的影响;利用流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期;通过裸鼠腋窝皮下接种各组细胞,观察Bmi-1-siRNA对A549细胞在裸鼠体内的致瘤能力的影响;Western blot检测PTEN、p-AKT、cyclin D1、P21、P27蛋白表达。结果:Bmi-1-siRNA有效地沉默了Bmi-1基因mRNA和蛋白的表达;沉默Bmi-1基因的表达能够抑制A549细胞的体内外增殖能力,使干扰组细胞的细胞周期阻滞于G1期;沉默Bmi-1基因的表达后,干扰组细胞中PTEN、P21、P27蛋白增加,p-AKT、cyclin D1蛋白表达降低。结论:Bmi-1-siRNA通过使细胞周期阻滞于G1期来抑制肺腺癌A549的体内外增殖能力,这种抑制作用涉及cyclin D1和p-AKT表达下降以及P21/P27和PTEN的表达上调。
- 郑翔宇朱杰王艺芳刘纯青刘奔杨春辉刘丹丹孟秀香
- 关键词：肺腺癌小干扰RNABMI-1基因
- siRNA沉默Bmi-1表达对肺腺癌A549细胞侵袭能力的影响被引量：1
- 2015年
- 目的观察Bmi-1基因沉默对A549细胞增殖和侵袭影响并初步探讨其机制。方法根据四条针对Bmi-1的小干扰RNA(siRNA)序列,将其瞬时转染到A549细胞中,选择最有效的一条链并构建到逆转录病毒真核表达载体p SUPERretro-Neo中,形成重组载体,然后将其稳定转染至A549细胞中,构建了稳定转染Bmi-1-shRNA的A549细胞。应用MTT实验检测Bmi-1-siRNA对A549细胞体外增殖的影响;Transwell小室观察其对A549侵袭能力的影响;RT-PCR和明胶酶谱法分别观察siRNA对A549细胞MMP-2/MMP-9表达及活性的影响。结果 Bmi-1 siRNA能够抑制A549细胞的增殖能力和侵袭能力,Bmi-1 siRNA能够抑制A549细胞MMP-2/MMP-9的表达和活性。结论 Bmi-1 siRNA对A549细胞侵袭能力的抑制和MMP-2/MMP-9的活性降低有关。
- 刘丹丹郑翔宇刘奔刘纯青王艺芳赵宝霞孟秀香
- 关键词：肺腺癌SIRNABMI-1基因
- Bmi-1-siRNA抑制肺腺癌SPC-A1细胞的增殖及其机制被引量：7
- 2014年
- 背景与目的:Bmi-1(B-cell specific moloneymurine leukemiavirus insertion site 1)基因是多梳基因家族的重要成员之一,主要通过调控INK4a/ARF位点来调节细胞的增殖和衰老。本研究旨在探讨Bmi-1-siRNA对具有INK4a/ARF位点的肺腺癌SPC-A1细胞生长和增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:①本实验选用已确定有效的siRNA序列进行病毒包装,构建反转录病毒si-Bmi-1 pSUPERretro-neo,然后感染到SPC-A1细胞中,建立稳定表达Bmi-1-siRNA的肺癌细胞株。②利用RT-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)技术分析Bmi-1基因在Bmi-1-siRNA转染后SPC-A1细胞中表达情况。③利用台盼蓝拒染法、MTT法、平板克隆形成实验和裸鼠实验,分析Bmi-1-siRNA对SPC-A1细胞体内外增殖能力的影响。④利用流式细胞术分析SPC-A1各组细胞的周期分布。⑤利用Western blot法分析增殖通路相关分子:p16INK4a、p53、Cyclin D1、PTEN和Ser473p-Akt等蛋白表达情况。结果:反转录病毒介导的Bmi-1-siRNA被转染后,有效抑制了SPC-A1细胞中Bmi-1基因的转录和表达,抑制了SPC-A1细胞的体内外增殖能力(P<0.01),并使转染组细胞阻滞在G1期[(64.6±1.2)%,P<0.05]。沉默Bmi-1基因后,与对照组细胞相比,p16INK4a、p53和Akt蛋白表达水平无明显变化(P>0.05),Cyclin D1和Ser473p-Akt表达水平下降(P<0.01),PTEN表达水平上调(P<0.01)。用PTEN抑制剂处理转染组细胞后,Bmi-1和Ser473p-Akt蛋白表达得以重塑。结论:Bmi-1-siRNA通过将肺腺癌SPC-A1细胞周期阻滞于G1期来抑制肿瘤细胞增殖,这种抑制作用可能不依赖于p16INK4a来调控Cyclin D1的表达,进而参与调控肿瘤细胞增殖。
- 王艺芳刘奔刘纯青郑翔宇刘丹丹朱杰杨春辉孟秀香
- 关键词：BMI-1基因肺腺癌细胞增殖
