田平阁
- 作品数:6 被引量:7H指数:1
- 供职机构:南方医科大学更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域:医药卫生生物学更多>>
- 靶向肿瘤干细胞标记CD133特异性结合肽的筛选和初步鉴定被引量:5
- 2011年
- 目的筛选可与人肿瘤干细胞表面标记物CD133特异性结合的短肽并进行初步鉴定。方法首先合成人肿瘤干细胞表面标记物CD133细胞外片段的生物素化蛋白,以此为靶,利用噬菌体肽库技术,高通量液相淘选CD133的特异性短肽。应用夹心ELISA选择出结合较强的克隆。提取DNA测序,通过竞争性阻断实验验证其特异性,根据噬菌体基因序列推导出多肽序列。通过免疫荧光技术初步验证合成多肽和人大肠癌细胞的结合情况。结果 4轮液相筛选后,与CD133特异性结合的噬菌体得到有效富集,第4轮与第1轮相比,富集了388倍。经ELISA鉴定的20个噬菌体单克隆中,有13个与CD133有较高亲和力,具有阳性意义。经比对得到11条完全一致的氨基酸序列TISWPPR,2条完全一致的氨基酸序列STTKLAL,竞争性阻断ELISA实验表明第一条特异性较强。结论成功利用噬菌体肽库技术,淘选出1条可和人CD133特异性结合的高亲和力短肽,为后续CD133的研究奠定了基础,表明从噬菌体肽库中液相淘选生物素化小分子的高亲和力多肽的方法切实可行。
- 田平阁周春平张超杨慧吴小金陆滟霞刘国炳李学农
- 关键词:CD133噬菌体展示肽库
- 肿瘤干细胞表面标记CD133高亲和结合肽的筛选与初步鉴定
- 肿瘤干细胞具有无限增殖和分化潜能,与肿瘤生长、侵袭、转移密切相关。CD133是最为公认的肿瘤干细胞标记之一,但到目前为止还没有发现CD133的天然配体,且尚未见CD133的特异性结合肽的报道。因此筛选CD133的特异性结...
- 李学农孙晋敏张超田平阁周春平
- 关键词:肿瘤干细胞CD133
- 文献传递
- 降落和重叠延伸PCR构建靶向肿瘤干细胞腺病毒载体及感染实验被引量:1
- 2011年
- 目的应用降落和重叠延伸PCR法构建对肿瘤干细胞有特异靶向性的高效载体-复制缺陷型腺病毒载体,观察其对CD133+人大肠癌细胞株SW480的感染效率。方法利用重叠延伸PCR技术扩增5型腺病毒纤毛球端HI环两端的基因序列,定向插入真核表达质粒pEGFP-N1中,构建重组质粒pEGFP-N1.KNOB△HI,同时在缺失HI环部位引入EcoRV限制性酶切位点。在此基础上,用降落PCR克隆纤毛基因全长编码区序列,构建出腺病毒穿梭质粒pNEB-F5。利用凝胶图像分析和基因测序验证所构建质粒的正确性。再与pAdEasy-1,pShuttle-GFP在E.coli BJ5183中同源重组,得腺病毒载体Ad5FHI-GFP和Ad5-GFP。用Ad5FHI-GFP和Ad5-GFP分别感染CD133+人大肠癌细胞株SW480,通过荧光显微镜观察感染效率。结果降落PCR和重叠延伸PCR都扩增出特异性条带,测序结果与预期相符。与Ad5-GFP相比,Ad5FHI-GFP对CD133+人大肠癌细胞株SW480有显著提高。结论利用降落和重叠延伸PCR成功构建新型靶向肿瘤干细胞的腺病毒载体,利用降落和重叠延伸PCR成功构建新型靶向肿瘤干细胞的腺病毒载体,其对CD133+人大肠癌细胞株SW480实验显示Ad5FHI-GFP组感染效率明显强于Ad5-GFP组。
- 张超刘国炳田平阁周春平李学农
- 关键词:降落PCR重叠延伸PCR复制缺陷型腺病毒穿梭质粒
- 改良的降落PCR和重叠延伸PCR法构建靶向肿瘤干细胞的腺病毒穿梭质粒和骨架质粒
- 目的优化PCR程序,应用降落PCR(TouchdownPCR,TD-PCR)和重叠延伸PCR(overlapextension PCR)法构建对肿瘤干细胞有特异靶向性的高效载体-复制缺陷型腺病毒的穿梭质粒pNEB-F5X...
- 张超李学农田平阁陆滟霞
- 文献传递
- 靶向人肿瘤干细胞标记CD133特异性结合肽的筛选和初步鉴定
- 背景和目的:类似于正常干细胞,肿瘤干细胞能通过自我更新,产生同样的子代肿瘤干细胞以维持肿瘤持续生长。肿瘤干细胞还能分化产生不同子代瘤细胞,来维持肿瘤细胞的数量。肿瘤干细胞还具有致瘤性、耐药性、高转移性、异质性等特点。 ...
- 田平阁
- 关键词:肿瘤干细胞特异性结合肽肿瘤复发抗肿瘤转移免疫荧光
- 文献传递
- XBP1 mRNA Splicing通过和Beclin-1的相互作用促进了巨噬细胞的存活和自噬
- 目的: 本实验研究发现XBP1m RNA的剪接体通过转录激活Beclin-1参与了巨噬细胞的增殖、凋亡、和自噬,进而影响动脉粥样硬化的发生、发展。在长期的应有中靶向XBP1对于治疗动脉粥样硬化以及对研究动脉粥样硬化中巨...
- 田平阁
- 关键词:巨噬细胞信使核糖核酸选择性剪接细胞存活细胞自噬