程卫
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 供职机构：广州医学院第一附属医院更多>>
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- 预输注经5-FU处理的同种异基因淋巴细胞诱导大鼠肝移植免疫耐受的初步研究被引量：1
- 2010年
- 目的探讨预输注5-FU处理的同种异基因淋巴细胞对大鼠肝移植免疫耐受的影响。方法实验分4组,均行Wistar大鼠至SD大鼠的肝移植。对照组:仅行肝移植;单纯淋巴细胞组:受体术前第7天与第4天各输注Wistar大鼠淋巴细胞(5×106个/ml)悬液1ml;低浓度5-FU+淋巴细胞组:受体术前第7天与第4天各输注经7.5μg 5-FU诱导过的Wistar大鼠淋巴细胞(5×106个/ml)悬液1ml;高浓度5-FU+淋巴细胞组:受体术前第7天与第4天各输注经15μg 5-FU诱导过的Wistar大鼠淋巴细胞(5×106个/ml)悬液1ml。术后第7天处死SD大鼠观察移植肝的病理改变。结果低浓度5-FU+淋巴细胞组受体大鼠的肝组织病理改变呈急性轻度排斥反应,肝细胞条索状排列基本整齐,肝小叶结构存在;中央静脉血管周围少量炎性细胞浸润;汇管区少量淋巴细胞浸润。对照组肝组织呈急性重度排斥反应。单纯淋巴细胞组和高浓度5-FU+淋巴细胞组肝组织呈急性中度排斥反应。结论 预输注经低浓度5-FU处理的同种异基因淋巴细胞可以较好地诱导大鼠肝移植免疫耐受。
- 程卫王炜丘昶儒沈浩元
- 关键词：肝移植免疫耐受淋巴细胞
- 靶向性反向半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3重组腺病毒诱导肝癌细胞凋亡的实验研究被引量：1
- 2010年
- 目的观察靶向性反向半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（r—caspase-3）重组腺病毒体外诱导肝癌细胞凋亡的效果和特异性。方法构建甲胎蛋白（AFP）增强子和白蛋白（ALB）启动子腺病毒载体（pAdTrack．EATP．PALB），亚克隆r—caspase-3至载体pAdTrack—EAFP-PALB,PmeI线性化pAdTrack—EAFP．PALB／r—easpase．3，电转化至BJ／AdEasy菌，获得重组腺病毒骨架pAdeasy—EnrP-PALB／r．caspase一3。PacI酶切后脂质体转染AD293细胞进行包装、扩增、获得病毒。绿色荧光蛋白（GFP）监测病毒滴度和感染效率；RT-PCR和Western印迹法检测r-caspase．3在HepG2细胞中的表达；流式细胞术检测其特异性诱导肝癌细胞凋亡的作用。结果穿梭载体pAdTrack．EAFP-PALB／r—caspase-3酶切、测序正确。穿梭载体、pAdeasy-1载体同源重组后PCR及PacI酶切鉴定结果表明pAdeasy．E＆FP-PALB／r—caspase-3重组成功。转染AD293细胞后可观察到GFP的表达。病毒感染HepG2细胞总DNA经RT—PCR和Western印迹均可检测到目的基因的表达，证实Ad-E—FP-PAL／dr—caspase-3病毒颗粒包装成功；靶向性r—easpase-3重组腺病毒感染各组细胞24h后，各组凋亡指数分别为：HepG细胞48．2％、7721细胞17．7％、L-02细胞7．3％、MDA—MB-231细胞0％。结论成功构建了靶向性Ad．EAFP-PALB／r—caspase-3重组腺病毒，体外实验表明其具有凋亡诱导靶向性，为进一步研究靶向性r—caspase-3基因治疗肝细胞肝癌及其生物学功能提供了依据。
- 王炜沈浩元丘昶儒林浩铭程卫
- 关键词：腺病毒半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3肝肿瘤靶向性
- 预实验中大鼠原位肝移植常见失败原因及对策被引量：3
- 2010年
- 目的分析预实验中大鼠原位肝移植常见的失败原因,并提出相应对策。方法回顾性分析2008年3月至2009年3月期间预实验中采用改良Kamada"二袖套"法行大鼠原位肝移植手术120例的资料。结果 120例大鼠原位肝移植预实验中失败原因有:无肝期延长66例,肝上下腔静脉吻合失败61例,肝下下腔静脉吻合失败17例,门静脉吻合失败12例,麻醉不满意8例。成功21例(17.50%)。结论加强显微外科技术的操作训练,特别是肝上下腔静脉的吻合,可提高大鼠原位肝移植手术成功率。
- 丘昶儒王炜程卫沈浩元
- 关键词：原位肝移植
- 肝细胞肝癌靶向性r-Caspase-3重组腺病毒的构建与表达被引量：2
- 2008年
- 目的构建肝细胞肝癌特异性表达反向半胱氨酸蛋白酶3(r-Caspase-3)重组腺病毒,为肝细胞肝癌的基因治疗提供新策略。方法构建甲胎蛋白(AFP)增强子和白蛋白(ALB)启动子腺病毒载体(pAdTrack-EAFP-PALB),然后将目的基因r-Caspase-3亚克隆到载体pAdTrack-EAFP-PALB上,获得重组腺病毒穿梭载体pAdTrack-EAFP-PALB/r-Caspase-3,经PmeⅠ酶切线性化后与pAdEasy-1同源重组,获得重组腺病毒骨架pAdEasy-EAFP-PALB/r-Caspase-3;鉴定正确的pAdEasy-EAFP-PALB/r-Caspase-3经PacⅠ酶切线性化后脂质体转染AD293细胞进行包装、扩增,获得病毒。绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)监测病毒滴度和感染效率;RT-PCR和West-ernblot法检测r-Caspase-3在HepG2细胞中的表达;SRB染色法评估重组腺病毒对HepG2细胞的抑制作用,初步观察HepG2细胞凋亡状况。结果穿梭载体pAdTrack-EAFP-PALB/r-Caspase-3酶切、测序正确。穿梭载体、pAdEasy-1载体同源重组后PCR及PacⅠ酶切鉴定结果表明pAdEasy-EAFP-PALB/r-Caspase-3重组成功;经PacⅠ酶切线性化后,pAdEasy-EAFP-PALB/r-Caspase-3转染AD293细胞即可观察到GFP的表达;回收病毒可重复感染AD293细胞,RT-PCR和Western blot均可检测到r-Caspase-3的表达,证实Ad-EAFP-PALB/r-Caspase-3病毒颗粒包装成功;SRB染色检测发现Ad-EAFP-PALB/r-Caspase-3具有凋亡诱导特异性。结论靶向性Ad-EAFP-PALB/r-Caspase-3重组腺病毒构建成功,并具有凋亡诱导靶向性,为进一步研究靶向性r-Caspase-3基因治疗肝细胞肝癌及其生物学功能奠定了基础。
- 王炜程卫丘昶儒
- 关键词：腺病毒靶向性肝细胞肝癌
