胡晓燕
- 作品数：72 被引量：239H指数：8
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- miRNA let-7a1真核表达载体的构建及对肺癌细胞增殖的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:构建miRNA let-7a1真核表达载体,研究其在肺癌A549细胞株的表达及对A549细胞增殖的影响。方法:以人肺癌细胞A549的总RNA为模板,RT-PCR扩增miRNApre-let-7a1基因序列,将miRNApre-let-7a1基因克隆到真核表达载体pSilencerTM4.1-CMVneo中,构建成pSilencerTM4.1-let-7a1重组体。将pSilencerTM4.1-let-7a1表达载体瞬时转染肺癌A549细胞,RT-PCR法检测miRNAlet-7a1在转录水平的表达。根据miRBaseTargets数据库,查hsa-let-7a1靶序列,构建let-7a1靶序列-报道基因融合质粒pMIR-report-let-7a1T,与pSilencerTM4.1-let-7a1表达载体共转染A549细胞,通过荧光素酶活性检测pSilencerTM4.1-let-7a1质粒对其靶序列的作用。MTT法检测pSilencerTM4.1-let-7a1转染A549细胞后,对细胞增殖的影响。结果:pSilencerTM4.1-let-7a1真核表达栽体和let-7a1靶序列-报道基因融合质粒经酶切及测序鉴定正确。pSilen-cerTM4.1-let-7a1转染A549细胞后,经RT-PCR证明能有效表达miRNAlet-7a1。pSilencerTM4.1-let-7a1质粒和pMIR-report-let-7a1T质粒共转染A549细胞后,通过报告基因检测,相对荧光素酶活性明显降低,表明pSilencerTM4.1-let-7a1转染A549细胞后,可表达let-7a1并具有生物学活性。MTT检测结果显示:pSilencerTM4.1-let-7a1转染后的A549活细胞数目明显减少。结论:成功构建了真核表达载体pSilencerTM4.1-let-7a1,转染肺腺癌A549细胞后能有效表达,miRNAlet-7a1基因过表达抑制A549细胞的增殖。
- 张菊关恒云张鹏举陈蔚文刘闻闻赵健胡晓燕姜安丽
- 关键词：MIRNA真核表达载体A549细胞细胞增殖
- PSA启动子介导的TAT-p21^(WAF1/CIP1)融合蛋白在前列腺癌细胞中的特异表达及活性初探被引量：1
- 2008年
- 目的:设计并构建含有前列腺组织特异性抗原(PSA)启动子的TAT-p21WAF1/CIP1融合蛋白真核表达载体(pPSA-TAT-p21),使由TAT蛋白转导结构域(TAT)介导的抑癌基因蛋白p21WAF1/CIP1(p21)能够在前列腺癌细胞中实现特异性的跨膜转运,增强p21对前列腺癌的抑制作用。方法:利用PCR技术构建含有PSA启动子、TAT蛋白转导序列和p21读码框架的真核表达载体pPSA-TAT-p21,并进行酶切、测序鉴定。脂质体法在前列腺癌LNCaP细胞和大肠癌HT-29细胞中转染上述表达载体及对照质粒后进行反转录PCR(RT-PCR),检测p21的mRNA以及蛋白在不同细胞中的表达情况。MTT法检测转染pPSA-TAT-p21后LNCaP细胞的增殖情况。结果:成功构建pPSA-TAT-p21真核表达载体。RT-PCR和Western blotting结果显示PSA-TAT-p21在前列腺癌细胞中有明显表达,在大肠癌细胞中基本不表达,呈现特异性的表达,而由CMV启动子介导的p21(pCMV-21)对照组在两个细胞株中均有表达。细胞增殖实验结果显示,含有TAT蛋白转导结构域的PSA-TAT-p21的融合蛋白对前列腺癌细胞增殖的抑制作用明显高于不含TAT的PSA-p21蛋白。结论:pPSA-TAT-p21能够在前列腺癌细胞中特异性地高效表达,为前列腺癌基因的靶向治疗提供了实验依据。
- 蔡捷苑辉卿孔峰任凯王小玲吉恺胡晓燕张建业
- 关键词：LNCAP细胞HT-29细胞
- LDL-ACM复合物对裸鼠皮下移植瘤靶向抑制作用的初步研究被引量：2
- 2003年
- 目的 :通过观察比较LDL -ACM复合物和游离ACM对胃癌SGC - 790 1 ,NKM - 4 5细胞株裸鼠皮下移植的抑制效应 ,从而了解LDL作为抗癌药物靶向载体的应用价值。方法 :首先采用温育交换法制备LDL -ACM复合物 ,然后建立人胃癌细胞株裸鼠皮下移植瘤模型 ,以瘤重、肿瘤体积、白细胞计数、抑瘤率、生命延长率等指标观察LDL -ACM对移植瘤的抑制作用。结果 :LDL -ACM组的移植瘤生长速度明显慢于生理盐水组及游离ACM组 ,抑瘤率和生命延长率明显高于生理盐水组及游离ACM组 ,外周白细胞计数无明显变化 ,尤其对SGC - 790 1瘤更为明显。结论 :LDL -ACM复合物与游离ACM相比有更强的抑癌效应。LDL
- 姜安丽康鲁东赵春华毕文祥胡晓燕孔峰徐松德
- 关键词：皮下移植瘤脂蛋白类胃肿瘤细胞株
- 人同源盒基因NKX3·1对前列腺癌细胞的诱导凋亡作用被引量：7
- 2006年
- 构建人同源盒基因NKX3·1cDNA真核表达载体,研究其在前列腺癌细胞PC-3、LNCaP中的表达及对细胞的促凋亡作用.以人前列腺癌细胞LNCaP细胞中的总RNA为模板,RT-PCR扩增NKX3·1基因全长编码片段,将NKX3·1cDNA重组到真核表达载体pcDNA3·1(+)中;将pcDNA3·1-NKX3·1表达载体瞬时转染前列腺癌细胞PC-3和LNCaP细胞,用RT-PCR和Western印迹检测NKX3·1cDNA在转录水平和蛋白水平的表达;绘制细胞生长曲线,观察NKX3·1对前列腺癌细胞增殖的抑制作用;用DNA/ladder和流式细胞术检测NKX3·1对前列腺癌细胞凋亡的影响,进一步用RT-PCR检测凋亡相关基因caspase3、caspase8、caspase9、Apaf1、survivin和Bcl2表达的变化.人同源盒基因NKX3·1cDNA真核表达载体pcDNA3·1-NKX3·1经酶切及测序鉴定正确.pcDNA3·1-NKX3·1转染PC-3和LNCaP细胞后,经RT-PCR和Western印迹证明能有效表达NKX3·1.生长曲线显示,前列腺癌细胞转染NKX3·1cDNA后细胞增殖受到抑制;前列腺癌细胞转染NKX3·1cDNA48h后,DNA电泳呈现具有凋亡特征的DNAladder;流式细胞术检测出现明显凋亡峰;RT-PCR检测凋亡相关基因.结果显示,caspase3、caspase8、caspase9基因表达明显增加,Bcl2基因表达明显减少.本研究成功构建了真核表达载体pcDNA3·1-NKX3·1,转染PC-3和LNCaP细胞后能有效表达,并对细胞具有诱导凋亡作用.
- 刘闻闻于春晓崔福爱张鹏举陈蔚文胡晓燕姜安丽张建业
- 关键词：真核表达载体前列腺癌细胞细胞凋亡
- 人NKX3.1基因启动子的克隆及在不同肿瘤细胞系中启动子活性的测定(英文)
- 2006年
- 目的:克隆NKX3.1基因启动子并检测其启动子活性,为研究NKX3.1基因转录调控的基本机制奠定基础。方法:采用PCR方法从人基因组中扩增NKX3.1基因上游1.04 kb启动子片段并分别克隆到报道基因载体pGL3-basic和pEGFP-1中,通过转染细胞、荧光素酶活性测定及荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,检测其启动子活性。结果:DNA测序结果证实克隆的1.04 kb启动子片段序列正确;pGL3-1.04 kb启动子转染LNCaP细胞后,双荧光素酶活性测定M1/M2=2.7,为pGL3-control活性的1.5倍,为pGL3-basic活性的50倍。表明克隆的人NKX3.1基因上游1.04 kb片段具有较强的启动子活性。为检测此1.04 kb启动子在不同组织细胞中的活性,分别将pGL3-1.04 kb启动子和pEGFP-1.04 kb启动子转染入不同的肿瘤细胞系,检测荧光素酶和绿色荧光蛋白的表达。结果显示1.04 kb启动子在前列腺癌细胞LNCaP中活性最高。采用TRANSFAC数据库分析,发现在1 040 bp片段内含有多种顺式作用元件,它们的功能性将需要进一步实验证明。结论:克隆的人NKX3.1基因上游1.04 kb片段具有较强的启动子活性,并且在前列腺癌细胞LNCaP中活性最高。
- 姜安丽张鹏举胡晓燕陈蔚文贺美兰孔峰张建业
- 关键词：启动子细胞系
- 乳腺癌细胞株MCF-7中锌和锌转运体表达的关系被引量：6
- 2008年
- 目的:通过ZnCl2和TPEN处理培养人乳腺癌细胞株MCF-7,观察高锌和低锌两种状态下锌转运体mRNA的表达情况。方法:0、50、100、150和200μmol/L的ZnCl2以及0、5、10和15μmol/L的TPEN分别处理培养MCF-7细胞12h,细胞存活率用噻唑蓝(MTT)方法检测;荧光锌离子探针Zinquin检测细胞内锌离子含量;RT-PCR方法检测锌转运体(ZnT)mRNA的表达。结果:ZnCl2(浓度为150μmol/L和200μmol/L时)以及TPEN对MCF-7细胞均有生长抑制作用。ZnCl2处理后的MCF-7细胞内锌离子含量显著升高,TPEN处理后的MCF-7细胞内锌离子含量显著降低。与对照细胞相比,ZnCl2处理的细胞ZnT-1mRNA的表达水平随着ZnCl2浓度增加而依次升高;TPEN处理的细胞ZnT-1mRNA表达水平则普遍降低;ZIP2和ZIP10mRNA的表达水平随TPEN浓度的增加而依次升高。结论:高锌促进人乳腺癌MCF-7细胞ZnT-1mRNA的表达;低锌抑制人乳腺癌MCF-7细胞ZnT-1mRNA表达,促进ZIP2和ZIP10mRNA的表达。
- 孙道旭王晓蕾徐同福崔福爱胡晓燕康鲁东张莲英
- 关键词：锌乳腺肿瘤锌转运体基因表达
- 转染过氧化氢酶-过氧化物酶基因对Aβ诱发PC_(12)细胞凋亡的保护作用被引量：2
- 2006年
- 目的观察转染过氧化氢酶-过氧化物酶(CPX)基因对神经毒物质β淀粉样肽(Aβ)诱发细胞凋亡的保护作用。方法转染并筛选稳定高表达CPX基因的PC12细胞系,用神经毒物质Aβ处理细胞,观察其抗逆变致凋亡的能力。通过电镜、DNA片段化的测定、MTT比色微量分析及流式细胞凋亡率分析观察转基因后对Aβ诱发细胞凋亡的保护作用。结果加入神经毒物质Aβ后,未转染CPX基因的PC12细胞出现凋亡的特征性形态学改变,电泳可见断裂的DNA片段,流式细胞仪检测细胞凋亡率较CPX基因转染组明显增加。MTT比色微量分析显示细胞活力下降(P<0.001)。结论Aβ诱导的神经细胞凋亡与活性氧的产生有关,转染CPX基因能对抗Aβ的神经毒性,保护Aβ所致的神经细胞凋亡。
- 付振涛崔行杨玲玲郝建荣曾季平胡晓燕孔峰
- 关键词：细胞转染细胞凋亡
- 人同源盒基因NKX3.1cDNA真核表达载体的构建及表达被引量：1
- 2006年
- 目的:构建人同源盒基因NKX3.1 cDNA真核表达载体,研究其在前列腺癌细胞PC-3、LNCaP中的表达情况。方法:以人前列腺癌细胞LNCaP细胞中的总RNA为模板,RT-PCR扩增NKX3.1基因全长编码片段,T/A克隆至pCR2.1载体中。经酶切、测序鉴定后,将NKX3.1cDNA重组到真核表达载体pcDNA3.1(+)中。将pcDNA3.1-NKX3.1表达载体瞬时转染前列腺癌细胞PC-3和LNCaP细胞,RT-PCR和Western blot法检测NKX3.1cDNA在转录水平和蛋白水平的表达。结果:人同源盒基因NKX3.1 cDNA真核表达载体pcD-NA3.1-NKX3.1经酶切及测序鉴定正确。pcDNA3.1-NKX3.1转染PC-3和LNCaP细胞后,经RT-PCR和West-ern blot证明在mRNA和蛋白水平均能有效表达NKX3.1。结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-NKX3.1,转染前列腺癌细胞PC-3和LNCaP后能有效表达。
- 刘闻闻于春晓崔福爱张鹏举胡晓燕陈蔚文张建业姜安丽
- 关键词：真核表达载体基因表达转染
- 活性氧在氯化锰致PC12细胞凋亡中的作用被引量：3
- 2006年
- 目的探讨活性氧(ROS)在氯化锰(MnCl2)诱导PC12细胞凋亡中的作用机制。方法构建MnCl2诱导的PC12细胞模型,MTT法检测细胞存活率,流式细胞分析PC12细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段化程度;分光光度法检测培养基中活性氧(ROS)生成量变化;化学发光法检测细胞三磷酸腺苷(ATP)生成量和Caspase3表达量的变化;RTPCR法检测凋亡相关基因bclxl和bax的表达。结果PC12细胞存活率与MnCl2诱导浓度和诱导时间呈负相关(P<0.01);2mmolLMnCl2诱导PC12细胞36h,细胞凋亡率明显上升(P<0.01);核DNA发生明显片段化;细胞ROS生成量明显增加(P<0.001),细胞ATP生成量受到明显抑制(P<0.01);基因bclxl表达被抑制,bax表达上升(P<0.01);Caspase3在细胞凋亡中被激活(P<0.01)。结论MnCl2诱导的PC12细胞凋亡与ROS升高、线粒体功能破坏和激活Caspase3有关。
- 曾季平王立祥夏文胡晓燕孔峰吴伟芳崔行
- 关键词：氯化锰PC12细胞细胞凋亡活性氧CASPASE-3
- 姜黄素对裸鼠乳腺移植瘤p21及CD44V_6表达的影响被引量：9
- 2007年
- 目的:研究姜黄素对裸鼠乳腺移植瘤p21及CD44V6表达的影响。方法:选用人乳腺癌细胞株MCF-7对裸鼠进行异种移植,成瘤后随机分为2组:(1)阴性对照组;(2)姜黄素组。观测移植瘤的出瘤时间、成瘤率,测量瘤体大小并计算瘤表面积。同时应用RT-PCR,检测2组肿瘤组织中cyclin D1、p21及CD44V6的表达。结果:姜黄素组瘤表面积明显低于阴性对照组;姜黄素组p21表达量高于阴性对照组,CD44V6表达量明显降低,2组的cyclin D1表达差异无显著。结论:姜黄素抑制裸鼠MCF-7乳腺移植瘤CD44V6的表达,增加p21的表达。
- 王晓蕾张莲英孙道旭王永胜崔福爱胡晓燕
- 关键词：姜黄素乳腺肿瘤细胞周期蛋白D1
