薛丽琰
- 作品数：14 被引量：22H指数：4
- 供职机构：西南大学农学与生物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 利用酵母双杂交系统检测SCR蛋白不同区段与SRK蛋白胞外域高变区的相互作用
- 薛丽琰罗兵张贺翠杨永军杨红彭一波朱利泉
- 甘蓝SCR、THL与SRK交替相互作用的酵母双杂交检测被引量：2
- 2012年
- eSRK(S位点受体激酶胞外域)、SCR/SP11(S位点富含半胱氨酸蛋白-S位点蛋白11)和THL1(类硫氧还蛋白)是甘蓝自交不亲和性信号传导过程重要的3个元件。利用PCR技术获得两种甘蓝SCR2(class-Ⅱ)、eSRK2(class-Ⅱ)、THL1、SRKJ(class-Ⅰ,SRK6激酶域)和eSRK28(class-Ⅰ)的编码序列,并分别构建以pGBKT7为载体的SCR2、THL1的重组诱饵质粒和以pGADT7为载体的eSRK2、eSRK28、SRKJ的重组猎物质粒。利用酵母双杂交系统验证eSRK2-SCR2、eSRK28-SCR2、SRKJ-THL1的相互作用。重组质粒在宿主细胞中未产生毒性及自激活作用,表明重组表达载体构建成功;组合Y2HGold〔pGBKT7-SCR2〕×Y187〔pGADT7-eSRK2〕在三缺平板(SD/-Trp-Leu-His/x-α-gal/AbA,TDO/x/A)上生长出蓝色克隆,激活了报告基因AUR1-C、MEL1、HIS3;组合Y2HGold〔pGBKT7-SCR2〕×Y187〔pGADT7-eSRK28〕能够在二缺平板(SD/-Trp-Leu)上生长,但在三缺平板上不生长,表明不同单倍型SRK-SCR可能不发生相互作用;组合Y187〔pGADT7-SRKJ〕×Y2HGold〔pGBKT7-THL1〕能够在四缺平板上生长,激活了4种报告基因(AUR1-C、MEL1、HIS3、ADE2)。相同的单倍型SRK与SCR之间能够相互作用,不同的单倍型之间不会发生相互作用;酵母中报告基因表达的数目和类型的差异反映了class-Ⅱ型内部的SCR-SRK和class-Ⅰ的SCR-SRK互作强度,Ⅰ型高于Ⅱ型;THL与SRK之间存在较高的互作强度。这为Ⅰ型和Ⅱ型不同的自交不亲和性表型所依赖的3个起始信号传导元件之间的识别程度差异提供了直接证据和新内容。
- 杨永军张贺翠杨昆薛丽琰常登龙朱利泉
- 关键词：甘蓝
- 甘蓝自交不亲和信号转导元件ARC1与EXO70A1的相互作用被引量：3
- 2011年
- 从甘蓝型油菜与羽衣甘蓝柱头中克隆出ARC1与EXO70A1基因的编码区,序列分析显示推导的甘蓝型油菜ARC1比羽衣甘蓝ARC1少编码2个氨基酸,ARC1蛋白在羽衣甘蓝与甘蓝型油菜中存在45个氨基酸的差异,其序列相似度与一致性分别达到95.9%和93.9%;推导的EXO70A1在2种植物中仅有6个氨基酸的差异,其序列相似度与一致性分别达到99.4%和98.9%;EXO70A1蛋白在种内和物种间都保持着高度的保守性,其保守的程度高于ARC1。应用酵母双杂交系统检测2种蛋白质的相互作用,发现在二倍体酵母细胞中,全长的ARC1与EXO70A1之间存在较强的相互作用,能激活4个报告基因(ADE2、HIS3、AUR1-C和MEL1)的表达;去除C-端(包括臂重复区)316个氨基酸残基后的ARC1N与EXO70A1之间表现出较弱的相互作用,只能激活3个报告基因(ADE2、AUR1-C和MEL1)的表达,表明ARC1的臂重复区可能并不位于ARC1与EXO70A1的互作界面的核心区段,ARC1的N-端结构域对ARC1与EXO70A1互作起关键作用;同时发现不同ARC1-EXO70A1组合的互作强度相当,其可能原因是ARC1和EXO70A1在甘蓝与甘蓝型油菜中存在的这些序列差异并未影响ARC1-EXO70A1互作界面的构象。
- 杨昆张贺翠Richard CONVERSE朱利泉杨永军薛丽琰罗兵常登龙高启国王小佳
- 关键词：自交不亲和蛋白质相互作用酵母双杂交
- 利用酵母双杂交系统鉴定甘蓝SCR与SRK胞外域片段间的相互作用被引量：8
- 2011年
- 【目的】利用酵母双杂交系统鉴定甘蓝自交不亲和决定因子S位点富含半胱氨酸蛋白/S位点蛋白11(SCR/SP11)与S位点受体激酶(SRK)胞外域(eSRK)片段间可能的相互作用区域。【方法】以结球甘蓝B3为材料,利用分子克隆技术,分别构建以pGBKT7为载体的全长SCRB3、SCRB3-1、SCRB3-2的重组诱饵质粒;以pGADT7为载体的全长eSRKB3、eSRKB3-1、eSRKB3-2的重组激活域(AD)质粒。用PEG/LiAc法将上述重组诱饵质粒转化感受态酵母菌Y2HGold,重组AD质粒转化感受态酵母菌Y187;Y2HGold[pGBKT7-SCRB3-s]、Y187[pGADT7-eSRKB3-s]两两融合培养,观察交配菌在SD/-Trp-Leu/x-α-gal/AbA(DDO/x/A)、SD/-Trp-Leu-Ade-His/x-α-gal/AbA(QDO/x/A)平板上的生长情况。【结果】酵母双杂交重组表达载体构建成功,且无毒性和自激活作用产生;9个试验组中只有SCRB3-1、SCRB3-2与eSRKB3-1、eSRKB3-2重组表达质粒转化子两两组合的4个融合株在QDO/x/A平板上出现蓝色克隆,激活了报告基因AUR1-C、MEL1、HIS3、ADE2。【结论】酵母双杂交系统适用于SCR与SRK蛋白相互作用的研究,初步确定了SCR与eSRK存在相互作用,SRK跨膜域的存在与否对其相互作用的研究没有影响。
- 杨红朱利泉张贺翠杨永军薛丽琰杨昆余浩彭一波罗兵吴志刚黄丹高启国王小佳
- 关键词：结球甘蓝自交不亲和酵母双杂交
- 甘蓝SCR识别结合SRK胞外域核心区的酵母双杂交检测及SCR相应编码区DNA序列的确定
- 结球甘蓝(BrassicaoleraceaL.var.capitataL.)是白花菜目、十字花科、芸薹属植物,属于甘蓝(BrassicaoleraceaL.)的一个变种,其种植栽培地区已遍及全国各地,是我国主要的种植蔬菜...
- 薛丽琰
- 关键词：编码区DNA序列蛋白质结构预测
- 文献传递
- 同种接合型酵母菌株Y2HGold的原生质体融合研究被引量：4
- 2012年
- 为避开有性融合的局限性,挖掘同种接合型酵母菌株无性融合的潜在应用价值,利用质粒构建了酵母双杂交工程菌株Y2HGold的亮氨酸缺陷型和色氨酸缺陷型菌株;接着采用酶解法进行四因素三水平正交实验获得原生质体制备方案:酶解温度30℃、处理时间80min、预处理剂含0.1%(w/v)巯基乙醇和0.1%(w/v)EDTA-2Na,酶解液为1.5%(w/v)蜗牛酶和1.5%(w/v)纤维素酶混合,使得原生质体的制备及再生率分别达82%和37%;最后采用PEG诱导融合的方法,经过同样正交实验得到Y2HGold无性融合条件为:PEG浓度35%、温度25℃、时间40min、pH5.8。筛选得到的无性融合子在遗传上稳定。
- 常登龙洪玉杨永军张贺翠薛丽琰杨昆朱利泉王小佳
- 关键词：酵母原生质体
- 甘蓝SRK的S域及SCR酵母表达载体的构建及其相互作用区段的研究被引量：1
- 2011年
- 为了深入研究S位点受体激酶（SRK）和S位点富含半胱氨酸蛋白（SCR）甘蓝自交不亲和（self-incompatibility,SI）信号传导的雌雄决定因子的相互作用机制,以自交不亲和性高的结球甘蓝为材料,采用酵母双杂交体系,构建pGADT7-eSRKs和pGBKT7-SCRs重组载体,并分别转化到Y187和Y2HGold酵母中,通过SD/-Ade-His-Trp-Leu平板上菌落的形成,PCR以及x-α-gal显色反应鉴定转化到酵母中的两个重组质粒相互作用。结果表明,SRK S域的SRK1及SRK4分别与SCR2相互作用,且初步显示其相互作用区域为SRK第1个外显子的第16~421bp的片段和SCR第1876~2068bp的片段。这既为SRK-SCR相互作用提供了具体证据,也为甘蓝自交不亲和性分子机理的深入研究提供了新内容。
- 彭一波朱利泉杨红薛丽琰罗兵吴志刚黄丹杨昆高启国李成琼任雪松王小佳
- 关键词：甘蓝SRK酵母双杂交体系
- 甘蓝SCR识别与结合SRK胞外域核心编码区DNA序列的酵母双杂交检测
- 2012年
- SCR是芸薹属自交不亲和性的雄性决定因子。为研究SCR与SRK之间相互作用的核心区段，通过构建结球甘蓝的包含系列不同长度的SCR的cDNA序列的pGBKT7融合载体，利用酵母双杂交系统检测SCR与SRK之间的相互作用。结果显示，构建的载体均未出现自激活现象，所获得SCR全长与其相对应SRK胞外域具有相互作用，且相互作用核心编码区位于SCR编码基因的第97～186bp处。实验结果还显示，此单倍型的SCR信号肽剪切位点及相邻的几个氨基酸残基对相互作用实验结果有干扰作用。以上结论为包括甘蓝在内的芸薹属自交不亲和机制的研究提供了新的实验依据。
- 薛丽琰罗兵朱利泉杨永军张贺翠常登龙陈松彭一波杨红曾静杨昆高启国李成琼任雪松王小佳
- 关键词：甘蓝自交不亲和
- 利用酵母双杂交系统检测SCR蛋白不同区段与SRK蛋白胞外域高变区的相互作用
- <正>为研究在甘蓝自交不亲和作用中甘蓝S位点富含半胱氨酸蛋白(SCR)与其相对应的S点受体激酶(SRK)胞外域高变区可能的相互作用区域,本实验用具有典型自交不亲和性甘蓝D3为材料,利用多种PCR技术获得结球甘蓝SCR基因...
- 薛丽琰罗兵张贺翠杨永军杨红彭一波朱利泉
- 文献传递
- 同源重组快速构建甘蓝SCR酵母双杂交诱饵载体及其自激活作用的检测
- 2012年
- 采用巢式PCR获得甘蓝SCR的成熟肽编码区,利用同源重组技术首次将其克隆到pGBKT7载体中,构建酵母双杂交系统的诱饵载体pGBKT7-SCR,结果表明:通过巢式PCR获得了正确的甘蓝SCR成熟肽编码区,并成功构建到pGBKT7诱饵载体中,且转化有诱饵载体的Y2HGold在SD/-Trp营养缺陷平板上生长良好,而在SD/-His-Trp和SD/-Trp/X-a-Gal/AbA营养缺陷平板上皆不能生长,说明对报告基因无自激活作用;且毒性实验也表明,SCR蛋白对酵母没有毒害作用.
- 罗兵朱利泉薛丽琰张贺翠彭一波杨红杨昆高启国李成琼王小佳
- 关键词：甘蓝同源重组酵母双杂交诱饵载体自激活
