袁成福
- 作品数：84 被引量：256H指数：9
- 供职机构：三峡大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- 硒茶和非硒茶对D-半乳糖致衰老小鼠总抗氧化能力的对照研究被引量：14
- 2004年
- 目的 对照研究硒茶及非硒茶对D -半乳糖致衰老小鼠总抗氧化能力的影响。方法 4 0只小鼠分为 4组(正常对照组、衰老模型组、非硒茶组、硒茶组 ) ,除正常对照组腹腔注射生理盐水外 ,其余各组腹腔注射D -半乳糖(1 5 0mg/kg·d-1 )造模。硒茶组及非硒茶组分别以其茶叶提取物以 0 3g/kg·d-1 的剂量灌胃 ,正常对照组及衰老模型组以蒸馏水灌胃。 4 2d后处死动物 ,用氧化还原法测血清、肝、脑组织中T -AOC。结果 非硒茶组与衰老模型组比较 ,可提高血清T -AOC(P <0 0 5 ) ,而提高肝、脑组织的T -AOC作用不明显 (P >0 0 5 )。硒茶组与衰老模型组比较可提高血清、肝、脑组织的T -AOC(P <0 0 1 )。结论 非硒茶组可提高血清T -AOC ,硒茶组可提高血清、肝、脑组织T -AOC 。
- 袁成福
- 关键词：总抗氧化能力
- MKRN1基因siRNA重组腺病毒载体构建及功能鉴定
- 2009年
- 目的构建MKRN1的siRNA重组腺病毒载体，并在表达MKRN1的HeLa细胞中鉴定其干扰作用和对端粒酶活性的影响，为探讨MKRN1功能及其与肿瘤关系提供有效工具。方法人工合成靶向MKRN1的siRNA干扰序列，用分子克隆的方法克隆到穿梭载体pSES-HUS上得到pSES-HUS-MKRN1 siRNA，并与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组得到pAdeasy-SES-HUS-MKRN1 siRNA；在HEK293细胞中包装成重组腺病毒，感染表达MKRN1的HeLa细胞株，用RT-PCR法及Western印迹技术检测腺病毒对细胞MKRN1表达的影响，用PCR-TRAP法检测细胞中端粒酶活性的变化。结果成功构建了MKRN1的siR-NA重组腺病毒载体；MKRN1的siRNA重组腺病毒能显著抑制HeLa细胞中MKRN1的表达，并显著上调细胞中端粒酶的活性。结论构建的Adeasy-MKRN1 siRNA腺病毒能有效地抑制HeLa细胞中MKRN1的表达并上调细胞端粒酶活性，从而为进一步研究MKRN1的功能及其与肿瘤的关系提供了有效的新工具。
- 石艳艳刘涛张琴袁成福卜友泉易发平刘革力宋方洲
- 关键词：腺病毒载体RNA干扰端粒酶HELA细胞
- GC7在炎症及缺氧缺血性相关疾病中的作用被引量：1
- 2021年
- 临床上,炎症和缺氧缺血与大多数疾病的病情严重程度及预后等密切相关。真核翻译起始因子5A(eukaryotic translation initiation factor 5A, EIF5A)在线粒体代谢功能的调节及促炎因子的释放中发挥重要作用,影响炎症及缺氧缺血的发生发展。N1-甲眯基-1,7-二氨基庚烷GC7(N1-guany1-1,7-diaminohep-tane)是EIF5A活化中的关键酶[脱氧羧腐胺赖氨酸合酶DHS(deoxyhypusinesynthase)]的抑制剂,可以通过抑制EIF5A的活性,进一步稳定线粒体功能,预防有毒活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成,减少炎症因子的释放,从而改善脑卒中、肾移植、肾缺血等缺氧缺血相关疾病和炎症相关疾病的症状。所以,GC7有望成为临床上治疗炎症和缺氧缺血相关疾病的不错选择。本文对GC7在炎症和缺氧缺血相关疾病中的作用及机制进行综述。
- 王啟华周婺曹礼理吴晓晗袁成福王俊杰
- 关键词：缺氧缺血炎症
- 顺铂体外诱导的人肝癌耐药细胞株(QGY/DDP)的建立被引量：2
- 2007年
- 目的建立顺铂(DDP)诱导的人肝癌耐药细胞株(QGY/DDP),研究其生物学特性和耐药机制。方法采用间歇诱导法,逐步递增DDP浓度,获得耐药细胞株QGY/DDP;MTT法测定药物敏感性;细胞计数法计算倍增时间,流式细胞术检测细胞周期;原子吸收光谱法测定细胞内铂离子蓄积量,流式细胞仪测定P-糖蛋白(P-gp)和谷胱甘肽S-转移酶-π(GST-π)的表达水平。结果成功建立了顺铂诱导的人肝癌耐药细胞株QGY/DDP,耐药指数为10.81,与5-氟尿嘧啶、长春新碱等抗癌药有明显的交叉耐药;与QGY细胞相比,QGY/DDP细胞增殖减慢、倍增时间延长,G0/G1期细胞增多、S期与G2/M期细胞减少,细胞内Pt含量降低,GST-π的表达升高,而P-gp无明显变化。结论QGY/DDP细胞具有耐药表型及耐药细胞的生物学特性;其耐药机制与细胞内Pt含量降低和GST-π过表达有关,而与P-gp无关。
- 杨俊霞袁成福罗映邱红梅汤为学
- 关键词：顺铂药物耐受性
- 稳定表达人MCHR2的SH-SY5Y细胞系的建立
- 2009年
- 目的:构建黑色素浓集激素受体2(MCHR2)/增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白真核表达载体pEGFPN1-MCHR2,转染人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y,建立稳定表达人MCHR2的SH-SY5Y细胞系MCHR2-SH-SY5Y。方法:采用聚合酶链反应(PCR)法从人胎脑cDNA文库扩增MCHR2全长cDNA片段。用基因重组方法将其克隆到质粒pEGFPN1,构建真核表达载体pEGFPN1-MCHR2,并用LipofectamineTM转染到SH-SY5Y细胞,通过G418筛选,建立稳定表达MCHR2的MCHR2-SH-SY5Y细胞系,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blotting检测MCHR2的表达并用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白亚细胞定位。结果:扩增出人MCHR2全长cDNA;成功构建真核表达载体pEGFPN1-MCHR2;RT-PCR、Western blotting检测到MCHR2-SH-SY5Y细胞MCHR2的表达,激光共聚焦显微镜观察转染pEGFPN1-MCHR2的MCHR2-SH-SY5Y细胞融合蛋白定位于细胞膜,而转染空质粒pEGFPN1的SH-SY5Y细胞EGFP定位于细胞质。结论:成功建立稳定表达人MCHR2的MCHR2-SH-SY5Y细胞株。
- 张琴卜友泉易发平袁成福秦琴宋方洲
- 关键词：真核表达载体基因表达
- 可诱导型PLK1 shRNA的乳腺癌MDA-MB-231细胞系的建立及PLK1敲低对细胞增殖的影响被引量：1
- 2017年
- 目的:建立稳定表达可诱导型polo样激酶1(polo-like kinase 1,PLK1)小发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)的乳腺癌MDA-MB-231细胞系并研究PLK1敲低对MDA-MB-231细胞增殖、细胞周期的影响并探讨其可能的机制。方法:根据si RNA的原理设计2对靶向PLK1的shRNA序列,构建慢病毒表达质粒(PLK1 shRNA重组质粒);先用p LV-t TR/KRAB-Red空载体制备慢病毒并感染MDA-MB-231细胞;在此基础上再用PLK1 shRNA重组质粒制备慢病毒并感染上述MDA-MB-231细胞;对上述2次慢病毒感染的MDA-MB-231细胞用强力霉素(doxycycline,DOX)处理96 h后,用q RT-PCR及Western blot检测PLK1m RNA及蛋白的表达;用MTT法检测细胞增殖;用流式细胞术及碘化吡啶(PI)染色检测细胞周期。结果:成功构建靶向PLK1的shRNA慢病毒表达质粒,包装出慢病毒并感染MDA-MB-231细胞;成功建立稳定表达可诱导型PLK1 shRNA的MDA-MB-231细胞系,通过DOX诱导,可明显抑制该细胞系中PLK1在m RNA及蛋白水平的表达(P<0.01);PLK1敲低可明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖(P<0.05);流式细胞术检测发现PLK1敲低可阻滞MDA-MB-231细胞于G2/M期(P<0.05)。结论:DOX诱导的PLK1敲低可明显抑制MDA-MB-231细胞增殖并阻滞细胞于G2/M期;经PLK1介导的肿瘤生物学行为变化,其机制可能涉及ERK1/2/Fra1/ZEB1信号通路。
- 薛慧郭欣李娜李志红彭帆肖方祥袁成福
- 关键词：POLO样激酶1乳腺癌
- 人Makorin环指蛋白1基因沉默对HEK293细胞的影响
- 2010年
- 目的探讨特异性抑制人Makorin环指蛋白1(MKRN1)基因的表达对HEK293细胞的影响。方法用脂质体将前期筛选出的含最有效干扰序列的人MKRN1基因shRNA真核表达质粒,转染至HEK293细胞中,观察其对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因mRNA转录水平、蛋白表达水平及细胞增殖的影响。结果人MKRN1基因shRNA真核表达质粒转染HEK293细胞后,在mRNA和蛋白水平均能明显上调细胞hTERT基因的表达,且细胞明显增殖。结论抑制HEK293细胞中人MKRN1基因的表达,可导致hTERT基因mRNA转录水平和蛋白表达水平上调,并促进细胞增殖。
- 刘涛石艳艳袁成福张琴卜友泉易发平刘革力宋方洲
- 关键词：短发夹RNA真核表达质粒人端粒酶逆转录酶HEK293细胞
- 人MCHR2基因shRNA真核表达载体体外转染
- 2008年
- 目的构建针对人黑色素浓集激素受体2(MCHR2)的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体,并观察其转染效率。方法根据MCHR2基因序列,设计并合成特异性的小干扰片段,将其定向克隆到真核表达载体pGenesil-1中,酶切和测序后,用脂质体转染到HEK293细胞中,用荧光显微镜和流式细胞仪观察荧光表达,鉴定转染效率。结果与结论成功构建4条表达shRNA的质粒及其阴性对照质粒,并成功转染到HEK293细胞系中,转染效率达50%以上。
- 袁成福刘革力卜友泉易发平马永平宋方洲
- 关键词：短发夹RNA真核表达载体细胞转染
- 人CD147基因siRNA真核表达质粒的构建及其对HeLa细胞中CD147基因表达的影响被引量：2
- 2009年
- 目的构建针对人CD147基因的siRNA真核表达质粒,并观察其对HeLa细胞中CD147基因表达的影响。方法根据GenBank中登录的人CD147基因序列,设计并合成针对CD147基因的特异性小干扰片段,并将其定向克隆至带有卡那霉素抗性和增强型绿色荧光蛋白的真核表达载体pGenesil-1中,对重组质粒进行酶切分析和DNA序列测定。用脂质体将重组质粒转染至HeLa细胞中,观察其对HeLa细胞CD147基因mRNA及蛋白表达水平的影响。结果酶切鉴定和测序结果表明,3个表达短发夹RNA的质粒及其阴性对照质粒构建正确。3个siRNA真核表达质粒对HeLa细胞CD147基因mRNA转录水平的抑制率分别为32.5%、66.8%和59.1%;对CD147蛋白表达水平的抑制率分别为28.3%、63.5%和56.2%。结论已成功构建针对人CD147基因的siRNA真核表达质粒,其对HeLa细胞CD147基因的表达具有明显的抑制作用,为进一步研究CD147基因的功能奠定了基础。
- 吕金星袁成福刘涛易发平卜友泉刘革力刘智敏宋方洲
- 关键词：小干扰RNA真核表达质粒HELA细胞
- 人白介素24cDNA克隆、突变纠正和原核表达被引量：3
- 2007年
- 目的获取人白介素24(IL-24)cDNA,构建原核表达载体以表达含有谷胱甘肽S转移酶(GST)的融合蛋白GST-IL-24。方法以人外周血单核细胞(PBMC)总RNA为模板,RT-PCR扩增IL-24 cDNA,克隆入原核表达载体pGEX-4T-2,测序结果显示在IL-24 cDNA第223位G→A,370位T→C,从而导致其编码蛋白的氨基酸发生改变:A75T,H124Y,通过二次PCR将其纠正,重组载体pGEX-IL-24转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基--βD-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE,Western blot检测显示有融合蛋白GST-IL-24表达。结果通过RT-PCR及二次PCR得到人IL-24 cDNA,构建其原核表达载体,经IPTG诱导在相对分子量约为50 000处有融合蛋白表达。结论IL-24的重组载体在大肠杆菌BL21(DE3)可以表达GST-IL-24融合蛋白。
- 魏丽丽李成华袁成福陈济丁嵩涛刘革力易发平宋方洲
- 关键词：白介素24二次PCR融合蛋白克隆原核表达
