裴静娴 作品数:29 被引量:66 H指数:5 供职机构: 广州医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广东省自然科学基金 广州市医药卫生科技项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 文化科学 更多>>
腺病毒介导的人低氧诱导因子–1α治疗兔后肢缺血的安全性研究 被引量:2 2010年 目的:对腺病毒介导的人低氧诱导因子-1α(Ad-HIF-1α)治疗兔急性后肢缺血的安全性进行探讨。方法:(1)Ad-HIF-1α及腺病毒空载体(Ad-Blank)扩增、滴度测定。(2)建立兔急性后肢缺血模型,随机分为3组,每组6只,分别以Ad-HIF-1α(2.0×1010PFU)、Ad-Blank(2.0×1010PFU)和NS(0.5mL)肌注离断股动脉肌群,观察兔一般反应,术前及术后7、28d检查心电图和血常规、肝肾功能,术后28d处死动物行病理学检查。结果:(1)Ad-HIF-1α及Ad-Blank滴度分别达2.0×1013、1.5×1013Pfu/mL。(2)受试期兔一般情况好;3组兔血常规、肝肾功能指标在正常值范围,组间对比无显著差异(P>0.05);心电图正常;病理学检查未见癌细胞。结论:兔急性后肢缺血模型局部一次性转染2.0×1010PFU的Ad-HIF-1α,未见明显毒副反应;Ad-HIF-1α应用于兔是相对安全的。 陈建威 李明琰 陈冬冬 裴静娴 王月刚 吴平生关键词:缺血 基因治疗 腺病毒载体 低氧诱导因子-1Α HIF-1α基因转录活性位点在人骨髓间充质干细胞分化成心肌细胞中的作用 2013年 目的研究HIF-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)基因转录活性位点—Asn803位点在人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)分化成心肌细胞中的作用。方法重组腺病毒Ad-LacZ、Ad-HIF-1αnative、Ad-HIF-1α564、Ad-HIF-1α564/402及Ad-HIF-1α564/803分别以最佳转染复数转染体外5-氮胞苷(5-azacyti-dine,5-aza)诱导的hMSCs,于诱导培养后第6周:(1)提取细胞浆蛋白,应用酶联免疫分析检测心肌肌钙蛋白I(cT-nI)含量,Western blot测定HIF-1α及VEGF蛋白表达水平;(2)更换含有120μmol/L姜黄素的心肌细胞诱导液培养1h,后用心肌细胞诱导液继续培养11h,接着用RT-PCR检测细胞中VEGF mRNA表达水平的变化。结果经5-aza诱导hMSC s第6周后,与Ad-LacZ组、Ad-HIF-1αnative组、Ad-HIF-1α564组及Ad-HIF-1α564/402组相比,Ad-HIF-1α564/803组cTnI、VEGF表达水平最高,与前述其它各组相比差异有显著性(P值均<0.05)。经120μmol/L姜黄素抑制后VEGF mRNA表达水平较未抑制组平均减少了(50.9±4.6)%。然而,在CBP/p300活性受同等抑制条件下,Pro564Asn803双突变型HIF-1α基因组VEGF mRNA表达水平虽然较未抑制组减少了约40%,但仍显著高于Pro564单突变型HIF-1α基因组(P<0.05)。结论 HIF-1α基因转录活性位点(Asn803)在HIF-1α促进hMSCs向心肌细胞分化中起关键作用。 刘城 吴平生 王月刚 裴静娴 赖艳娴关键词:低氧诱导因子1Α 人骨髓间充质干细胞 心肌细胞 不同HIF-1α基因诱导人骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的效能差异 2013年 目的研究腺病毒介导的野生型及突变型低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)基因诱导人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)向心肌细胞(cardiomyocyte)分化过程中的效能差异。方法重组腺病毒Ad-LacZ、Ad-HIF-1αnative、Ad-HIF-1α564、Ad-HIF-1α564/402及Ad-HIF-1α564/803分别以最佳转染复数转染体外5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导的hMSCs,于诱导培养后第6周提取细胞浆蛋白,应用酶联免疫分析检测法或Western blot检测法分别测定其中的心肌肌钙蛋白I(cTnI)、HIF-1α、VEGF及Nkx2.5蛋白表达水平。结果经5-aza诱导hMSCs第6周cTnI值为:对照组(0.700±0.013)、Ad-LacZ组(0.702±0.006)、Ad-HIF-1αnative组(0.729±0.004)、Ad-HIF-1α564组(0.741±0.008)、Ad-HIF-1α564/402组(0.764±0.009)及Ad-HIF-1α564/803组(0.804±0.021),各实验组cTnI表达差异有统计学意义(P<0.05),其中尤以Ad-HIF-1α564/803组cTnI表达水平最高,与前述其它各组相比差异有统计学意义(P值均<0.05)。Western blot结果显示:与Ad-LacZ组相比,Ad-HIF-1αnative组、Ad-HIF-1α564组、Ad-HIF-1α564/402组、Ad-HIF-1α564/803组HIF-1α、VEGF及Nkx2.5蛋白均升高(P<0.05),其中以Ad-HIF-1α564/402组HIF-1α蛋白表达水平最高(P值均<0.05),以Ad-HIF-1α564/803组VEGF及Nkx2.5蛋白表达水平最高(P<0.05)。结论野生型及不同突变型HIF-1α基因均可促进hMSCs向心肌细胞分化,尤以Pro564 Asn803双突变型HIF-1α基因(HIF-1α564/803)作用最强。 刘城 王月刚 吴平生 裴静娴 赖艳娴关键词:低氧诱导因子1Α 骨髓间充质干细胞 分化 野生型低氧诱导因子1α对人微血管内皮细胞增殖、迁移及成管的影响 被引量:3 2013年 目的研究野生型低氧诱导因子1a(HIF.1et)对人微血管内皮细胞(HMVEC.L)增殖、迁移、成管的影响,并初步探讨其作用机制。方法实验分正常对照组、物理低氧组及野生型HIF.1a基因组,分别用MTS法、划痕法、成管法检测前述3组HMVEC.L增殖、迁移、成管的能力,并用Westem印迹测定HIF-1a及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平。结果MTS法结果显示,野生型HIF—1a基因转染HMVEC—L后明显促进HMVEC—L增殖,与正常对照组、物理低氧组差异有统计学意义(P〈0.05)。划痕结果显示,正常对照组、物理低氧组、野生型HIF—1a基因组HMVEC.L迁移率分别为(1.09±0.25)%、(8.65±1.03)%及(17.12±1.97)%,其中野生型HIF.1a基因组迁移率最大(P〈0.05)。成管法结果显示,正常对照组、物理低氧组、野生型HIF-1a基因组成管长度分别为(0.34±0.07)、(0.90±0.16)、(1.76±0.09)mm/视野,其中野生型HIF—1a基因组成管长度最长(P〈0.05)。Western印迹结果显示,与正常对照组相比,物理低氧组、野生型HIF.1et基因组HIF.1a、VEGF蛋白表达均明显升高(P〈0.05),其中野生型HIF—1a基因组HIF—1a、VEGF蛋白表达水平最高(均为P〈O.05)。结论野生型HIF.1a基因能在体外促进HMVEC-L增殖、迁移、管样形成,是一种具有临床应用前景的血管新生基因。 刘城 吴平生 王月刚 裴静娴 赖艳娴关键词:微血管 新生血管化 生理性 重组腺病毒三突变型低氧诱导因子-1α对血管新生的影响 被引量:5 2010年 目的研究重组腺病毒三突变型低氧诱导因子-1α(Ad-HIF-1α-Ala564-Ala402-Ala803,简称Ad-HIF-1α-564/402/803)对体外血管新生的影响。方法将前期构建的Ad-HIF-1α-564/402/803在HEK293A细胞中进行扩增,用氯化铯浓度梯度离心法进行腺病毒纯化,终点稀释法测定病毒滴度,提取病毒DNA,进行PCR及PCR产物测序鉴定三突变型HIF-1α基因;X-Gal染色法测定重组腺病毒转染效率;Ad-HIF-1α-564/402/803、Ad-HIF-1αnature、Ad-Null分别转染hMVECs后,观察hMVECs在Matrigel上毛细血管管腔样结构的形成情况;Ad-HIF-1α-564/402/803、Ad-HIF-1αnature、Ad-Null和PBS分别转染鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型后,利用Image Pro Plus6.0软件收集数据并计算各组CAM血管面积比。结果经PCR及基因测序鉴定,扩增纯化后的腺病毒所携带的目的基因信息无丢失或变异,病毒滴度达1011~1012PFU/ml;X-gal染色显示MOI为100pfu/cell时,转染效率趋于稳定;Ad-HIF-1α-564/402/803转染hMVECs后Matrigel上的管腔数目显著多于Ad-HIF-1α-nature组、Ad-Null及对照组;基因转染CAM72h后,Ad-HIF-1α-564/402/803组CAM上微小血管数目较Ad-HIF-1α-nature组、Ad-Null组、PBS组明显增多;Ad-HIF-1α-564/402/803组血管面积比与Ad-HIF-1α-nature组、Ad-Null组、PBS组相比,差异有统计学意义(P值分别为0.01、0.000、0.000)。结论Ad-HIF-1α-564/402/803能明显促进hMVECs毛细血管管腔样结构的形成,同时可以促进CAM模型上微小血管新生,证实了Ad-HIF-1α-564/402/803在常氧情况下对血管新生有一定的促进作用。 魏璇 陶宇 裴静娴 李明琰 陈建威 刘城 吴平生关键词:低氧诱导因子-1Α 重组腺病毒 血管新生 鸡胚绒毛尿囊膜 HIF-1α调控p53RFP基因的转录调控元件鉴定 目的分析具有血管生长调节重要功能的转录因子HIF-1α是否通过调控P53RFP的启动子区域而发挥调节作用,并对其元件进行鉴定。方法 HIF-1α和Lac Z相比,应用荧光定量PCR检测HIF-1α、P53RFP、P53 ... 王月刚 裴静娴 孙祝华 吴平生文献传递 为什么女性易患射血分数保留的心力衰竭 在心力衰竭患者中,大约一半患者收缩功能保留,这类心力衰竭被称为射血分数保留的心力衰竭。目前,射血分数下降的心力衰竭发病率呈下降趋势,但射血分数保留的心力衰竭发病率却在上升。临床研究表明女性比男性更容易发展为射血分数保留的... 吴平生 裴静娴关键词:女性患者 心力衰竭 性别差异 低氧调控p53RFP基因启动子活性的初步研究 2023年 目的观察低氧对p53RFP基因表达及启动子活性的影响,探索低氧反应元件(HRE)是否参与了低氧对p53RFP基因启动子活性的调控。方法将HEK293细胞置于低氧条件下培养,实时定量PCR及Western blot检测p53RFP mRNA及蛋白表达水平;通过定点突变技术构建HRE突变型p53RFP启动子双荧光素酶报告基因载体并转染HEK293细胞,分别置于常氧和低氧条件下培养,双荧光素酶报告基因检测系统检测启动子活性。结果低氧处理不同时间点p53RFP mRNA表达水平均显著增加,差异有统计学意义(F=96.493,P<0.001);低氧组p53RFP及HIF-1α蛋白表达量均呈时间依赖性递增。成功构建了HRE突变型p53RFP启动子双荧光素酶报告基因载体,双荧光素酶报告基因检测显示,与常氧组相比,低氧条件下野生型p53RFP基因启动子活性增加(t=-19.504,P<0.001),HRE单突变或双突变后启动子活性均较野生型降低(F=160.891,P<0.001)。结论低氧可诱导p53RFP基因表达上调;成功构建了HRE突变型p53RFP双荧光素酶报告基因载体,HRE位点可能在低氧调控p53RFP基因启动子活性中发挥关键作用。 裴静娴 莫沛 王月刚关键词:低氧 启动子 低氧反应元件 钙离子拮抗剂和肾素-血管紧张素系统阻断剂对高血压动脉僵硬度作用差异的荟萃分析 被引量:3 2012年 目的系统评价钙离子拮抗剂和肾素-血管紧张素系统阻断剂在高血压治疗中,动脉僵硬度变化的差异。方法按循证医学的要求,制定相应的纳入、排除标准及其检索策略。通过PubMed、EMBASE、OvidEMB Reviews、中国期刊全文数据库、中文科技期刊全文数据库、万方数据库检索相关的随机对照临床研究,计算机检索时间从各数据库建库至2012年1月;同时辅助其他检索,纳入经过钙离子拮抗剂和肾素-血管紧张素系统阻断剂治疗原发性高血压患者的随机对照试验,治疗时间至少12周。采用RevMan5.0软件进行统计分析。结果纳入7篇随机对照研究,共计524例高血压患者。荟萃分析结果显示:肾素-血管紧张素系统阻断剂在改善动脉僵硬度方面优于钙离子拮抗剂(均数差=160.15,95%可信区间57.10~263.21),差异有统计学意义。但是在降低收缩压(均数差=-2.94,95%可信区间-4.59~-1.29)和舒张压(均数差=-6.63,95%可信区间-9.56~-3.70)方面,较钙离子拮抗剂弱,在降低脉压差(均数差=-6.12,95%可信区间-2.3~14.55)方面与钙离子拮抗剂相比无显著性差异。结论肾素-血管紧张素系统阻断剂在改善高血压患者动脉僵硬度方面优于钙离子拮抗剂,该作用与其降压作用无关。 张艺军 裴静娴 王月刚 吴平生关键词:高血压 钙离子拮抗剂 血管紧张素转换酶抑制剂 脉搏波传导速度 钙离子拮抗剂和血管紧张素转换酶抑制剂对高血压患者动脉僵硬度影响的荟萃分析 被引量:1 2012年 目的系统评价钙离子拮抗剂(calcium channel blockers,CCBs)和血管紧张素转换酶抑制剂(angiotensin-converting-enzyme inhibitor,ACEI)对原发性高血压(高血压)患者血管功能作用的差异。方法按循证医学的要求,制定相应的纳入、排除标准及其检索策略。通过PubMed、EMBASE、Ovid EBM Reviews、中国期刊全文数据库、中文科技期刊全文数据库、万方数据库,检索相关的临床对照研究,计算机检索时间从各数据库建库至2012年1月;同时辅助其他检索,纳入CCBs和ACEI治疗高血压患者的随机对照试验(randomized controlled trials,RCT)。两名评价者独立评价纳入研究的质量,并用统一的表格提取资料,采用RevMan5.0软件进行统计分析。比较CCBs和ACEI对高血压患者脉搏波传导速度、收缩压、舒张压、脉压等指标的影响。结果共纳入4篇RCT,共计226例患者。文献异质性检验显示数据存在异质性(Q=54.80,P<0.001)。荟萃分析结果显示,ACEI在改善动脉僵硬度方面优于CCBs,差异有统计学意义(标准差=135.01,95%CI:59.87~210.16;Z=3.52,P=0.0004,P<0.05);但在降低收缩压(标准差=-4.73,95%CI:-9.35~-0.12,P<0.04)和舒张压(标准差=-10.42,95%CI:-19.16~-1.69,P<0.02)方面较CCBs弱;在降低脉压(标准差=-6.12,95%CI:-2.3~14.55,P<0.15)方面与CCBs相比,差异无统计学意义。结论ACEI在改善高血压患者动脉僵硬度方面优于CCBs,该作用与其降压作用无关。 张艺军 裴静娴 吴平生 钟武装关键词:钙离子拮抗剂 血管紧张素转换酶抑制剂