谢飞
- 作品数：50 被引量：185H指数：9
- 供职机构：福州总医院更多>>
- 发文基金：福建省重点科技计划项目福建省科技攻关计划南京军区“十一五”计划课题更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 凝血因子Ⅴ缺陷:血栓形成与出血转换的分子基础被引量：10
- 1999年
- 第Ⅴ因子(FⅤ)是分子量为330KD的单链糖蛋白,与第Ⅷ因子(FⅧ)及铜蓝蛋白之间在结构上有许多相似之处。FⅤ参与凝血过程中凝血酶的生成,促进凝血,同时,活化的蛋白C(APC)通过灭活FⅤ来抑制凝血。FⅤ缺陷根据产生机制不同可导致对APC的抵抗(APCR)引起血栓病或遗传性FⅤ缺乏症,导致出血。目前已证实部分APCR和遗传性FⅤ缺乏症均存在分子缺陷。本文主要对FⅤ的结构、功能、活化蛋白C抵抗及遗传性FⅤ缺乏症研究的最新进展作一综述。
- 谢飞
- 关键词：凝血因子V活化蛋白C抵抗出血血栓形成
- ELISA检测新生儿脐带血S100B蛋白被引量：6
- 2001年
- 目的 了解新生儿 S1 0 0 B蛋白水平。方法 用双抗体夹心 ELISA法检测了 45名正常足月新生儿脐带血 S1 0 0蛋白含量。结果 正常足月新生儿脐血 S1 0 0 B为 1 .1 9± 0 .1 6μg/L ,参考范围 0 .88～ 1 .5 0μg/L,男女性别无显著性差异。结论 新生儿脐血 S1 0 0 B与脑成熟有关。
- 徐卫平谢飞林也溶
- 关键词：S100B蛋白新生儿脐带血酶联免疫吸附测定
- 小鼠乳酸脱氢酶C亚基在大肠埃希菌中的表达与鉴定
- 2004年
- 目的 :构建小鼠特异性乳酸脱氢酶 (LDH)C亚基的原核重组载体并进行表达和鉴定。 方法 :提取小鼠睾丸总RNA ,逆转录合成cDNA ,自行设计引物 ,PCR扩增小鼠LDH C亚基编码序列 ,PCR产物经BamH Ⅰ/EcoR Ⅰ 双酶切后 ,克隆至谷胱甘肽S转移酶 (GST)融合表达载体pGEX 2T中 ,在E .coliBL2 1中诱导GST融合蛋白的表达。 结果 :在异丙基 β 硫代半乳糖苷 (IPTG)的诱导下 ,重组菌高效表达出一个相对分子质量约为6 0 0 0 0的产物。对重组质粒的序列分析表明 ,插入片段的序列与GenBank登录的编码序列完全一致。 结论 :小鼠LDH C亚基的全长编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX 2T ,并在E .coliBL2
- 熊永忠郑德柱谢飞涂向东兰风华
- 关键词：精子小鼠PCRLDH同工酶避孕疫苗
- 遗传性高铁血红蛋白血症的基因诊断(附3例报告)被引量：1
- 2004年
- 目的探讨遗传性高铁血红蛋白血症的基因诊断方法。方法采用RTPCR产物直接测序法,分析3名遗传性高铁血红蛋白血症患者细胞色素b5还原酶(b5R)基因的cDNA编码区序列。通过PCR限制性内切酶酶切,分析患者b5R基因组DNA。结果患者A的一个b5R等位基因存在C203Y(TGC→TAC)突变,另一个存在M176T(ATG→ACG)突变;患者B的一个b5R等位基因存在R57Q(CGG→CAG)突变,另一个存在R60H(CGC→CAC)突变;患者C的一个b5R等位基因存在C203Y(TGC→TAC)突变,另一个存在P264L(CCA→CTA)突变。其中M176T、R60H和P264L3种突变尚未见报道。结论建立了遗传性高铁血红蛋白血症的基因诊断方法,并在3名中国人患者中发现了3个以复合杂合子形式存在的、新的b5R基因突变。
- 郑德柱兰风华谢飞吴玉水朱忠勇
- 关键词：遗传性高铁血红蛋白血症突变杂合子
- 遗传性因子V缺乏症的基因研究
- 2002年
- 研究一个遗传性凝血因子 (FV)缺乏症重型患者的基因缺陷。方法 :采用 RT- PCR及 PCR技术 ,对先证者FV c DNA序列全长和基因组 DNA中第 11和第 13外显子的序列进行了 PCR扩增 ,PCR产物回收纯化后直接测序。结果 :对先证者 FV基因组 DNA的部分序列的 PCR扩增 ,经 DNA测序 ,发现有两个基因突变位点 ,其中 2 86 3G→ A为中性多态性位点 ,另一个 336 6 C→ G为同义突变。对先证者 FV c DNA序列全长进行分段扩增均未见目的条带。结论 :推测先证者 FV缺乏可能为 FV基因某种新的突变导致 m RNA不稳定或转录调控异常所致。
- 侯丽虹杨林花刘秀娥谢飞
- 关键词：基因突变PCR技术
- 肾上腺脑白质营养不良等若干遗传病的分子诊断研究
- 兰风华吴玉水谢飞郑德柱杨渤生吴一波黄俏佳程烽朱晓辉朱忠勇
- 项目对肾上腺脑白质营养不良（ALD）、遗传性凝血因子VII缺乏症、遗传性凝血因子V缺乏症和遗传性高铁血红蛋白血症4种单基因遗传病进行了分子诊断研究。3种遗传病的分子诊断以mRNA途径为主，以基因组DNA途径为辅：从外周血...
- 关键词：
- 关键词：肾上腺脑白质营养不良遗传病分子诊断
- 人血浆因子V蛋白免疫印迹分析及其临床应用被引量：3
- 2002年
- 目的 建立人血浆因子Ｖ（ＦＶ）蛋白免疫印迹分析，对遗传性ＦＶ缺乏症家系成员血浆ＦＶ含量进行分析。方法 以３３％饱和硫酸铰从多克隆兔抗人ＦＶ抗血清中纯化ＩｇＧ，待测血浆行４％～１２％梯度的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，继之电转印至硝酸纤维膜上。结果 在３３０ ｋＤ附近，正常人混合血浆呈现一明显的条带，患者母亲对应条带的显色强度明显弱于正常对照，而患者则完全缺如，且未能检出其他较小的ＦＶ片段产物。结论 我们建立的人血浆ＦＶ蛋白免疫印迹分析法对于遗传性ＦＶ缺乏症的辅助诊断及分型具有重要作用。该家系属于Ｉ型遗传性ＦＶ缺乏。
- 谢飞兰风华朱忠勇
- 关键词：FV免疫印迹分析
- GST融合的人血浆蛋白S成熟肽的原核表达
- 2004年
- 目的:构建人蛋白S(protein S,PS)的原核表达载体并诱导其表达。方法:自行设计引物,通过PCR技术,以人PS真核表达载体为模板扩增PS成熟肽编码序列,PCR产物经EcoR1/BamH1双酶切后,将其克隆至GST融合表达载体pGEX-2T中,在E.coli BL21中诱导GST-PS融合蛋白的表达。结果:聚丙烯酰胺凝胶电泳(10%SDS-PAEG) 显示,在IPTG的诱导下,BL21重组菌高效表达出一个分子量约为96kD产物,与预期大小相符,该产物可通过GST亲和层析柱纯化。对重组质粒的序列分析表明,插入片段的序列与Genebank登录的人PS基因编码序列完全一致。结论:人PS 编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX-2T,并在E.coli BL21中获得表达,为进一步研究奠定了基础。
- 卢爱薇兰风华程烽郑德柱谢飞朱忠勇
- 关键词：GST蛋白S人血浆成熟肽融合表达载体原核表达
- 一种新的突变引起遗传性凝血因子Ⅴ缺乏症被引量：6
- 2003年
- 目的 研究一个遗传性凝血因子Ⅴ (FⅤ )缺乏症家系的基因缺陷。方法 采用比浊法测定凝血酶原时间、凝血酶时间、活化的部分凝血活酶时间 ;采用凝血因子活性测定法 (一步法 )和BA ELISA法对先证者及其家系成员血浆FⅤ活性和抗原进行测定 ;采用PCR及DNA序列测定技术 ,对FⅤ基因组DNA中 2 5个外显子和 5′非翻译端的序列进行了PCR扩增 ,PCR产物回收纯化后直接测序 ,并经T/A克隆测序对所发现突变进行证实。结果 先证者血浆FⅤ严重缺乏 ,FⅤ活性为 1% ,FⅤ抗原为 1.5 4 %。基因研究显示为复合杂合子 ,其基因组DNA第 4外显子 6 75位核苷酸发生单个碱基A缺失 ,呈杂合状态 ,该致病基因来自先证者母亲 ,与来自父方的另外一条等位基因的未知缺陷 ,共同导致先证者血浆FⅤ严重缺乏。结论 发现一种新的突变 6 75delA ,该缺失引起移码 ,导致转录提前终止 ,引起遗传性FⅤ缺乏症。
- 侯丽虹谢飞刘秀娥张丽郭艳丽董春霞李智婷杨波杨林花
- 关键词：基因突变聚合酶链反应
- 人血浆凝血因子V双抗体夹心ELISA测定被引量：1
- 2002年
- 目的 建立一种新的双抗体夹心酶联免疫吸附试验 (ELISA) ,以测定人血浆凝血因子V(FV)抗原含量。方法 采用兔抗人FV抗体为包被抗体 ,FV单抗为检测抗体 ,首次对中国正常人 (n =2 6 )和一个遗传性FV缺乏家系的有关成员血浆中的FV抗原进行了检测。结果 所建方法线性范围广、特异性强、灵敏度高、重复性好 ,与FV活性测定有很好的相关性 ;正常人血浆FV抗原呈偏态分布 ;FV缺乏家系纯合子血浆FV抗原量只有正常人的 2 % ,证实该家系为Ⅰ型遗传性FV缺乏症。结论 该法是一种较好的FV蛋白定量测定法 ,可以对FV缺乏症进行辅助诊断和分型。
- 谢飞兰风华朱忠勇
- 关键词：凝血因子V酶联免疫吸附试验
