邱洁
- 作品数：57 被引量：94H指数：5
- 供职机构：南京医科大学第二附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金教育部基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学机械工程更多>>
- Resistin基因过表达对大鼠胰岛β细胞株RINm5F基础胰岛素分泌的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨Resistin基因过表达对大鼠胰岛β细胞株RINm5F基础胰岛素分泌的影响。方法体外培养大鼠胰岛β细胞株RINm5F,采用PCR法扩增大鼠Resistin基因全编码区cDNA片段,BamH和Xho双酶切后插入pcDNA3.1B表达载体,经测序验证正确后,采用脂质体转染pcDNA3.1-Resistin真核表达质粒入RINm5F细胞,筛选稳定表达株,并采用RT-PCR验证过表达Resistin的效率。在RINm5F细胞密度达到80%,缓冲液洗3遍,继续于缓冲液中生长2 h,收集上清液,采用ELISA法检测细胞培养上清中的胰岛素水平。同时Trizol一步法提取RINm5F细胞总RNA,采用RT-PCR法检测葡萄糖转运子2(Glut2)mRNA水平,并用紫外吸收剂凝胶密度扫描仪分析条带吸光度值。采用SPSS11.0软件进行统计学分析。结果观察过表达Resistin的RINm5F中ResistinmRNA表达,发现过表达Resistin的细胞株中Resistin mRNA水平为对照组的2.46倍(P<0.001)。过表达Resistin的RINm5F细胞的基础胰岛素分泌低于转染空载质粒的细胞,较对照组下降约32%(P<0.001)。过表达Resistin的RINm5F细胞中Glut2表达明显低于转染空载质粒的细胞,较对照组下降约38%(P<0.05)。结论Resistin基因过表达显著下调胰岛β细胞RINm5F的基础胰岛素分泌,其机制可能与Glut2有关。
- 刘峰邱洁张春梅季晨博陈小慧高春林赵亚萍陈荣华郭锡熔
- 关键词：RESISTIN胰岛Β细胞胰岛素分泌
- NYGGF4基因过表达对脂肪细胞胰岛素敏感性及分泌功能的影响被引量：10
- 2009年
- 目的观察肥胖相关新基因NYGGF4过表达对脂肪细胞的胰岛素敏感性及分泌功能的影响。方法体外培养稳定转染NYGGF4基因(NYGGF4-pcDNA3.1)的3T3-L1前体脂肪细胞,以转染空载体(pcDNA3.1)的3T3-L1细胞为对照,胰岛素加地塞米松加1-甲基-3-异丁基黄嘌呤(MDI)方案诱导细胞分化成熟,液闪仪测定3H标记的葡萄糖摄取率,Westernblot检测葡萄糖转运体4(GLUT4)的表达及转位;采用ELISA双抗体夹心法检测培养上清中TNF-α、IL-6、脂联素、抵抗素4种细胞因子的水平。结果NYGGF4过表达显著降低胰岛素刺激的葡萄糖摄取率(P<0.05)。NYGGF4过表达对总的GLUT4的表达量没有影响,但明显降低胰岛素刺激的GLUT4由细胞浆向细胞膜的转位(P<0.05)。过表达NYGGF4的脂肪细胞其培养上清中TNF-α、IL-6、脂联素及抵抗素的分泌水平与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。结论NYGGF4基因过表达通过下调胰岛素刺激的GLUT4的转位而减少脂肪细胞的葡萄糖摄取率,提示脂肪细胞对胰岛素的敏感性降低,而对脂肪细胞的分泌功能无明显影响。
- 张春梅邱洁陈小慧王玢张敏郭锡熔
- 关键词：葡萄糖转运体43T3-L1脂肪细胞
- 新基因6次跨膜表位抗原4在肥胖患儿脂肪组织的表达及生物信息学分析被引量：3
- 2011年
- 目的肥胖呈现全球流行趋势。目前,已基本证实其为一种多基因遗传病,先前研究小组筛选获得肥胖相关的新基因6次跨膜表位抗原(six-transmembrane epithelial antigen of the prostate 4,STEAP4)在肥胖患儿脂肪组织中差异表达,旨在进一步验证其在肥胖儿童脂肪组织中的表达,并初步探讨STEAP4的生物信息学特征。方法采用实时荧光定量PCR(Realtime-qPCR)技术验证肥胖与健康儿童脂肪组织中STEAP4基因的表达差异,应用DNA Star、Blast、ProtParam、SOPMA、Tar-getP、TMHMM、ProtScale、Interpro Scan和SMART等软件或数据库分析STEAP4的核苷酸基本特征、蛋白质理化性质、信号肽、跨膜结构域、疏水性/亲水性、结构域及亚细胞定位等。结果 STEAP4基因是一个功能未知的基因,低表达于肥胖患儿脂肪组织中,生物信息学分析该基因cDNA全长4454 bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)长1380 bp,编码459个氨基酸,预测相对分子质量51981.2,定位在胞膜,蛋白序列分析显示为6次跨膜螺旋结构,为可溶的亲水性蛋白,蛋白结构域分析显示具有黄素蛋白跨膜成分(三铁还原酶结构域),NAD(P)结合结构域,NADP氧化还原酶(依赖辅酶F420)和血红素蛋白保守位点。结论 STEAP4基因是一低表达于肥胖患儿脂肪组织中的基因,高度提示该蛋白与肥胖及其相关的胰岛素抵抗的发生存在相关性,值得进一步研究证实。
- 高春林刘光陵夏正坤邱洁高远赋樊忠民伏洁任献国徐敏郭锡熔
- 关键词：计算生物学
- 抗STEAP4多克隆抗体的制备、纯化和鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的制备兔抗人STEAP4多克隆抗体及其特性鉴定。方法应用DNAStar软件对STEAP4的蛋白序列进行分析,选择STEAP4基因编码蛋白的近N端序列合成多肽并与牛血清白蛋白(BSA)交联。以纯化的STEAP4免疫新西兰白兔,制备抗STEAP4蛋白多抗,间接ELISA检测兔血清效价,Westernblot和免疫组织化学法鉴定多抗的特异性。结果得到兔抗人STEAP4多肽抗体,效价达16000。ELISA及蛋白印迹证实兔抗人STEAP4抗体可特异性识别STEAP4多肽。Westernblot结果显示该抗体识别的相应抗原的相对分子质量为52000。以一抗采用STEAP4多克隆抗体的脂肪组织石蜡切片为检测标本,进行STEAP4组织定位研究,发现STEAP4蛋白表达于脂肪细胞膜;以上结果皆与STEAP4的生物信息学分析一致。结论成功制备了抗STEAP4多克隆抗体,制备的兔抗人STEAP4合成肽抗体可应用于Westernblot和免疫组织化学试验,为后续深入研究STEAP4蛋白的功能奠定了基础。
- 朱春季晨博邱洁张春梅倪毓辉刘峰陈晓慧朱金改费莉郭锡熔
- 关键词：多克隆抗体蛋白印迹
- 新基因NYGGF4在肥胖患儿脂肪组织中的表达验证及生物信息学分析
- 目的验证新基因NYGGF4在肥胖患儿脂肪组织中的表达,初步探讨NYGGF4的生物信息学特征。方法采用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)技术验证肥胖与正常儿童脂肪组织中NYGGF4基因的表达差异,应用DNAStar、Bl...
- 高春林邱洁郭锡熔王玢倪毓辉张敏李晓南吴伟玲陈荣华
- 文献传递
- 一种脑源肽及其应用
- 本发明公开了一种脑源肽HIBDAP，所述脑源肽的氨基酸序列为HSQFIGYPITLFVEKER。本发明还公开了一种融合肽TAT‑HIBDAP，所述融合肽TAT‑HIBDAP包括穿膜肽和所述的脑源肽HIBDAP。本发明还公...
- 邱洁侯雪雯袁子钧
- 文献传递
- LYRM1基因绿色荧光蛋白融合载体的构建及表达
- 2009年
- 【目的】构建LYRM1基因绿色荧光蛋白融合载体,进而观察LYRM1基因编码蛋白在细胞内的定位情况。【方法】运用RT-PCR技术从人网膜脂肪组织中分离LYRM1基因的完整编码框,将其亚克隆到绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-N2,脂质体转染3T3-L1前体脂肪细胞,激光共聚焦显微镜下观察融合蛋白的表达情况。【结果】PCR、酶切鉴定及测序结果表明重组质粒构建正确。激光共聚焦显微镜下观察到pEGFP-N2转染的细胞中绿色荧光均匀分布于整个细胞,而pEGFP-LYRM1转染的细胞中绿色荧光主要集中在细胞核区域。【结论】成功构建了LYRM1绿色荧光蛋白融合载体,LYRM1编码蛋白在细胞中定位于胞核中。
- 邱洁郭锡熔周晓玉程锐曹兴国王玢张敏
- 关键词：肥胖绿色荧光蛋白亚细胞定位
- 表观遗传学和miRNA被引量：2
- 2008年
- 目前认为表观遗传学的两个主要方面DNA甲基化和组蛋白修饰对调控基因表达有重要作用。微小RNA（miRNA）是近年来发现的一类长约22个碱基的单链非编码小分子RNA，在基因调控中亦扮演重要的角色。该文对表观遗传学和miRNA二者之间的关系作一综述。
- 邱洁郭锡熔
- 关键词：遗传学RNAMIRNA基因
- 人类肥胖相关新基因LYRM1真核表达载体的构建及稳定转染3T3-L1细胞系的建立
- 2009年
- 目的:构建人LYRM1基因的真核表达载体,转染3T3-L1前体脂肪细胞,建立稳定过表达人LYRM1基因的3T3-L1前体脂肪细胞系。方法:运用RT-PCR技术从人网膜脂肪组织中分离LYRM1基因的完整编码框,将其亚克隆到真核表达载体pcDNATM3.1/myc-His B,脂质体转染3T3-L1前体脂肪细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的3T3-L1前体脂肪细胞系,并利用Westernblot方法鉴定其表达。结果:PCR、酶切鉴定及测序结果表明重组质粒构建正确。建立了稳定转染LYRM1的3T3-L1前体脂肪细胞,成功地表达目的基因。结论:LYRM1真核表达载体的成功构建及稳定转染3T3-L1细胞系的建立为进一步研究其功能奠定了良好的实验基础。
- 邱洁张敏周晓玉程锐曹兴国王玢郭锡熔
- 关键词：逆转录聚合酶链反应转染
- 强光疗对高胆红素血症患儿姊妹染色体单体交换频率影响的研究
- 目的:探讨普通蓝光疗和强光疗两种不同光强度对高间接胆红素血症新生儿外周血淋巴细胞姊妹染色体单体交换频率的影响.方法:本研究收集孕龄≥37周,需光疗的高胆红素血症新生儿,按不同光疗方式分为普通蓝光组和强光疗两治疗组,同时选...
- 陶虹阚清邱洁杨洋周晓光周晓玉
- 关键词：光疗新生儿
