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大肠杆菌T蛋白PDH结构域的高效表达纯化与活性测定: 2005年; 目的构建高效表达菌株,以大量表达大肠杆菌T蛋白的预苯酸脱氢酶(PDH),为研究T蛋白双功能结构域CM和PDH的相互协同作用以及T蛋白抑制剂对其影响提供活性蛋白材料。方法利用pGEX高效融合表达系统将PDH与谷光甘肽疏基转移酶(GST)编码序列在表达宿主BL21实现高效表达,并利用对GST具有亲和作用的GlutathioneSepharose4B琼脂糖珠进行亲和层析以对其分离纯化。结果表达产物达菌体总蛋白的40%,可溶性目的产物得量为240mg·L-1,利用亲和层析法纯化后纯度达92.5%,GSTPDH融合蛋白的PDH的比活为38U·mg-1。结论本法成功构建高效表达PDH菌株,表达量高,纯化度高,GSTPDH酶活性正常,为进一步研究奠定基础。; 陈静阮昊水文波陈枢青; 关键词：GST 活性测定结构域表达量

人CYP1A2及CYP3A4重组酶的表达及其代谢活性研究: 药物大多是外来分子,进入人体后,一些药物可以以原形从人体排泄出去,然而大多数药物需要进行结构修饰才易于被排泄。这一结构修饰过程就被称为“药物代谢”。细胞色素P450(CYP)是最大的药物代谢酶蛋白超家族之一,主要分布于肝...; 阮昊; 关键词：细胞色素P450 重组酶分子克隆蛋白质纯化; 文献传递

一种光伏构网系统故障限流控制方法及装置: 本发明公开一种光伏构网系统故障限流控制方法及装置，涉及光伏并网技术领域。本发明基于逆变器输入侧直流稳压电容的电压产生开关管控制信号；基于变流器并网点的电压信号和电流信号得到并网点电压幅值以及静止同步坐标系下的电压信号和电...; 杨永恒阮昊朱殷晓

人细胞色素P450 1A2的异源表达及代谢活性测定被引量：1: 2009年; 目的获得单一的具有活性的人细胞色素P450 1A2(CYP1A2)重组酶,以进一步进行该酶参与的药物代谢研究。方法以人肝组织提取的总RNA为模板,RT-PCR扩增全长的人类CYP1A2基因片段,插入转座载体pFastBac构建重组转座质粒pFastBac-CYP1A2,转化入DH10Bac大肠杆菌,获得重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-CYP1A2,以之转染草地夜蛾细胞(Sf9),与细胞色素氧化还原酶(CYPOR)进行共表达。利用蛋白质印迹分析鉴定其表达,并以非那西丁为底物,利用HPLC对其进行代谢活性测定。结果蛋白质印迹分析表明人CYP1A2蛋白在Sf9细胞中成功表达,且该重组酶对非那西丁的Km值为(82.04±11.39)μmol·L-1(n=3),Vmax值为(1.78±0.26)nmol·min-1·mg-1蛋白(n=3),表观清除率Clint值为0.02mL·min-1·mg-1蛋白。结论利用杆状病毒/昆虫细胞系统,可获得具代谢活性的人CYP1A2重组酶,该酶可进一步用于其他底物的I相代谢研究。; 阮昊陈枢青姚彤炜; 关键词：细胞色素P450 杆状病毒非那西丁活性测定

大肠杆菌T蛋白PDH结构域的高效融合表达纯化与活性测定: 为了研究大肠杆菌的T 蛋白双功能结构域CM 和PDH 的相互协同作用以及T 蛋白抑制剂对其的影响,需要构建高效表达PDH 菌株,以大量表达预苯酸脱氢酶。合成引入连接肽编码的引物克隆PDH 基因,测序与预期设计完全匹配后用...; 陈静阮昊陈枢青; 关键词：酶活性; 文献传递

地非三唑对大鼠肝细胞细胞色素P450 CYP1A1/2的诱导作用被引量：2: 2007年; 目的试从mRNA表达水平阐明地非三唑对鼠肝微粒体中细胞色素P450 CYP1A1/2的诱导机制。方法给SD大鼠腹腔注射地非三唑,采用Tr-izol法提取大鼠肝脏RNA,用RT-PCR测定经地非三唑处理1,2及4d的鼠肝中细胞色素P450 CYP1A1,CYP1A2 mRNA的表达水平。结果地非三唑处理不同时间的鼠肝细胞中细胞色素P450CYP1A1,CYP1A2 mRNA的表达水平比空白对照组明显增加,空白对照组CYP1A1吸光度比值为0.270±0.040,诱导1,2及4d的吸光度比值分别为0.343±0.055,0.417±0.045及0.603±0.083;空白对照组的CYP1A2吸光度比值为0.613±0.189,而诱导1,2及4d的吸光度比值分别为1.510±0.226,3.057±0.518及4.120±0.458。随着诱导时间的增加,细胞色素P450 CYP1A1及CYP1A2 mRNA的表达也逐步增加,诱导时间与表达水平之间存在一定的线性关系,相关系数分别为0.9984和0.9563。结论地非三唑对细胞色素P450 CYP1A1/2 mRNA表达具有诱导作用。; 陈琳阮昊姚彤炜; 关键词：地非三唑细胞色素P450 CYP1A1 细胞色素P450 CYP1A2

中药与天然药物代谢活性筛选技术平台研究: 姚彤炜曾苏陈枢青蒋惠娣陈亚坤王以钱鸣蓉徐亚萍阮昊麻佳蕾; 一、建立模拟人肠道的Caco-2细胞和P-gp转基因细胞，模拟人肝药物代谢酶的CYP和UGT转基因细胞，作为体外药物吸收代谢研究试验模型。培养21天的Caco-2细胞单层跨膜电阻达500Wcm2；标志性药物Lucifer...; 关键词：; 关键词：天然药物中药

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阮昊