马丽娜
- 作品数：7 被引量：24H指数：2
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 大鼠癌钙调蛋白基因原核表达载体的构建及表达
- 2010年
- 目的 在原核表达载体中构建癌钙调蛋白（OM）基因,并对构建的原核表达质粒进行表达和鉴定.方法 取SD大鼠6只,提取腹腔巨噬细胞并活化,提取总RNA,设计引物对OM基因进行RT-PCR扩增.通过中间载体pUC57进行目的 基因克隆,将阳性克隆质粒酶切,与原核表达载体pET-22b（＋）连接,转化入大肠杆菌感受态细胞DH5α,菌检PCR筛选阳性克隆后小量提取质粒,送样行核苷酸序列分析鉴定.成功构建的原核表达质粒,在大肠杆菌BL21中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导重组体的表达,并用Western blot鉴定表达产物.结果 琼脂糖凝胶电泳获得目的 基因OM,大小为350 bp左右,与预期的目的 基因大小一致.构建的重组质粒pET-22b（＋）/OM菌检PCR获得长度为500 bp左右的阳性克隆,与预期大小一致.抽提质粒经核苷酸序列分析后表明,克隆的片段与OM基因序列一致.在IPTG的诱导下,重组体表达出分子量约11.7 kD的表达产物,Western blot结果证实其为目的 蛋白.结论 实验成功构建了OM基因原核表达载体及其表达,为该蛋白促进视神经损伤后再生的研究奠定了基础.
- 薛峥石燕红朱彤马丽娜胡丹崔志利
- 关键词：克隆基因表达
- 硅油乳化及其并发症被引量：18
- 2006年
- 硅油用作玻璃体替代物已有40余年的历史,目前广泛应用于复杂性视网膜脱离的治疗。但是硅油长期存在于眼内可发生乳化,导致多种严重的并发症,影响手术后的长期疗效。本文简要综述硅油的理化性质与眼内填充的关系、已知的关于硅油乳化的机制和影响因素、硅油乳化的并发症,及其应对的考虑。
- 马丽娜惠延年
- 关键词：硅油并发症
- 硅油小滴对人视网膜色素上皮细胞吞噬活性的影响
- 目的：探讨一定大小的乳化硅油小滴能否影响视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞的吞噬能力。方法：将硅油挤压通过一种微孔滤膜制成大小相似的小滴。用酞箐蓝标记硅油小滴。培养的人 R...
- 马丽娜
- 文献传递
- 共培养系统中巨噬细胞对大鼠视网膜神经节细胞存活和轴突再生的影响被引量：1
- 2010年
- 目的 观察体外巨噬细胞对视网膜神经节细胞（RGC）存活和生长的影响.方法 采用Transwell小室建立大鼠腹膜腔巨噬细胞和RGC的共培养模型,以不用巨噬细胞共培养的RCC作为对照组,用台盼蓝染色计数及相差显微镜观察RGC存活的时间,并测量培养1 d、3 d和5 d时RGC突起的平均长度,进行组间比较.结果 培养1 d、3 d、5 d和7 d,共培养组平均活细胞数分别为（35.50±2.92）个、（28.20±3.36）个、（18.70±3.95）个和（8.80±1.55）个,对照组为（36.20±2.35）个、（27.10±2.96）个、（15.80±3.04）个和（8.40±2.01）个,两组之间差异均无统计学意义（t=0.369、0.497、0.487、2.854,P均〉0.05）.培养1 d、3 d和5 d,共培养组RGC突起的平均长度分别为（19.79±3.98）μm、（68.30±4.07）μm和（95.51±6.51）μm,明显长于对照组[（15.28±1.28）μm、（58.18±4.22）μm和（82.61±3.75）μm],两组差异均有统计学意义（t=-4.562、-6.554、-7.027,P均〈0.05）.结论
- 朱彤崔志利马丽娜薛峥石艳红惠延年
- 关键词：视网膜神经节细胞巨噬细胞共培养视神经再生
- 培养人视网膜色素上皮细胞脂褐素形成对胞内钙离子和细胞活力的影响被引量：2
- 2007年
- 目的:观察培养人视网膜色素上皮(retinal pigment epithe-lial,RPE)细胞在吞噬牛光感受器外节(photoreceptor outer segments,POS)膜盘形成脂褐素的过程中,胞内钙离子浓度及细胞活力的变化。方法:将培养人RPE细胞与制备的2×1010/L牛POS共培养,在形成脂褐素过程中,用钙荧光指示剂Fluo-3/AM和激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal micro-scope,LSCM)观察培养0.5,1,2,4和8d时间点胞内钙离子的变化;用MTT比色法观察培养0.5,1,2,4和8d的细胞活力。结果:对照组RPE细胞内钙离子荧光强度为165.4±29.9U,而与POS培养的细胞内钙离子荧光强度在0.5d达到高峰值777.3±63.9(P<0.01),4d下降至316.9±36.1U(P<0.01),但至8d仍维持在较高值334.1±30.6U(P<0.01)。细胞内脂褐素自发荧光平均强度在培养8d达到350.2±26.5U(P<0.01),而对照组为105.5±15.4U。MTT法显示共培养0.5,1,2,4和8d细胞相对增殖率分别为4.9%,84.4%,54.7%,21.1%和11.2%,细胞增殖活力在共培养1d达到最大值,之后下降。结论:在培养人RPE细胞和牛POS共培养形成脂褐素过程中,钙离子大量内流,细胞增殖活力增加。
- 张乐惠延年马丽娜王静波刘晓娟王雨生
- 关键词：脂褐素视网膜色素上皮细胞钙离子MTT
- 硅油小滴对人视网膜色素上皮细胞吞噬活性的影响被引量：2
- 2007年
- 目的:探讨一定大小的乳化硅油小滴能否影响视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞的吞噬能力。方法:将硅油挤压通过一种微孔滤膜制成大小相似的小滴。用酞箐蓝标记硅油小滴。培养的人RPE细胞与硅油小滴,伴或不伴有血清,共同孵育24h。被细胞内吞的小滴在显微镜下计数。测量人RPE细胞在体外吞噬硅油小滴的数量。结果:挤压通过这种微孔膜制成的硅油小滴至少稳定5d,硅油小滴的直径为4.25±0.77μm。乳化硅油浓度不同,RPE细胞吞噬硅油小滴的数量有明显剂量依赖性,随浓度增高,吞噬数量也增加。加有血清的硅油小滴使RPE细胞的吞噬能力进一步增强。结论:硅油小滴能刺激RPE细胞的吞噬能力,含有血清时对RPE细胞的吞噬能力有进一步的刺激作用。
- 马丽娜惠延年王雨生张乐王静波徐建峰马吉献
- 关键词：色素上皮硅油乳化
- 癌钙调蛋白／鱼精蛋白截短体融合基因在原核表达载体中的构建及鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的在原核表达载体中构建癌钙调蛋白(OM)/鱼精蛋白截短体(tp)融合基因,进行基因测序鉴定。方法提取SD大鼠腹腔巨噬细胞,并进行细胞计数,经巨噬细胞特异性抗体CD68鉴定。设计引物扩增OM基因,并在其3’端引入tp的编码基因,经PCR扩增获得OM/tp融合基因,通过中间载体PUC57进行目的基因克隆,将阳性克隆质粒酶切,与原核表达载体PET32a连接,转化大肠杆菌感受态细胞,筛选阳性克隆,小量提取质粒,送样经公司测序鉴定。结果琼脂糖凝胶电泳获得OM/tp目的基因,与预期的目的基因大小一致,回收目的基因与中间载体PUC57连接转化大肠杆菌感受态细胞DH5α后,菌检PCR获得约500bp的阳性克隆,与预期大小一致。抽提质粒PUC57-OM/tp,经测序鉴定后与预期的序列一致。质粒PUC57-OM/tp酶切后与载体PET32a连接转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,菌检PCR获得约500bp的阳性克隆,与预期大小一致。抽提质粒PET32a-OM/tp经测序后与预期的序列一致。结论 OM/tp融合基因的成功构建,为该融合蛋白促进视神经损伤后再生的研究奠定了基础。
- 石燕红薛铮朱彤马丽娜胡丹崔志利
- 关键词：鱼精蛋白融合基因原核表达
