刘晔
- 作品数：124 被引量：296H指数：8
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- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学语言文字更多>>
- 狂犬病病毒磷蛋白单抗的制备与应用
- 2014年
- 以灭活的狂犬病病毒CVS株细胞毒免疫BALB/c小鼠,通过间接ELISA法和Western-blot筛选获得针对磷蛋白的单克隆抗体4株:1C9、4B10、2G12、4G5,其中1C9针对氨基端保守表位。以亲和层析法纯化1C9单抗腹水,异硫氰酸荧光黄标记制备荧光抗体。以1C9磷蛋白荧光抗体与本实验室研制的狂犬病核蛋白免疫荧光抗原检测试剂盒,对本实验室收集的501份疑似狂犬病鼬獾、蝙蝠、犬和黄鼬的脑组织样品进行直接免疫荧光平行检测。结果显示,两种检测手段对基因1型狂犬病毒的检出结果完全一致,而蝙蝠源Irkut病毒仅能以磷蛋白单抗1C9检出。本研究成功获得了与我国现有不同基因型狂犬病毒良好反应的抗狂犬病磷蛋白单抗,并应用于狂犬病的直接免疫荧光检测,为狂犬病诊断提供了敏感性和可靠性良好的诊断试剂。
- 米立娟张守峰刘晔王述超扈荣良
- 关键词：狂犬病病毒荧光抗体
- 我国野生动物狂犬病流行与病毒特征
- 自2008年至2012年，本实验室采集来自浙江和江西等鼬獾狂犬病报道较多地区的鼬獾脑组织1650份，分离获得狂犬病病毒38株。对全部毒株的糖蛋白和核蛋白基因及部分毒株的全基因组进行了序列测定及系统发生分析，并对主要结构蛋...
- 张守峰赵敬慧刘晔陈奇张菲扈荣良
- 关键词：狂犬病流行病学病毒感染野生动物
- 文献传递
- 狂犬病病毒SRV9株糖蛋白基因重组伪狂犬病病毒的构建及鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的构建狂犬病病毒(Rabies virus,RV)SRV9株糖蛋白(Glycoprotein)基因的重组伪狂犬病病毒(Pseudorabiesvirus,PRV),并进行鉴定。方法将SRV9株糖蛋白基因表达盒和报告基因Lac Z表达盒克隆至转移载体p8AA中,构建转移质粒p8AA-LacZ-G,与PRV Bartha-K61株基因组共转染BHK-21细胞,待细胞发生病变后,收集病毒液,进行多轮蓝色噬斑筛选,获得重组病毒rPRV-LacZ-G,对其进行电镜观察、PCR及Western blot鉴定,并测定重组病毒的滴度。结果酶切及测序鉴定证实,转移质粒p8AA-LacZ-G构建正确;电镜观察显示,重组病毒rPRV-LacZ-G呈典型的PRV特征结构;PCR分析显示可见RV 1 790 bp的特异性条带;Western blot显示,重组病毒可与SRV9株糖蛋白单抗发生反应,形成特异条带;经测定,重组病毒的滴度为106.25TCID50/ml,较Bartha-K61亲本株的滴度(107TCID50/ml)下降。结论成功构建了RV SRV9株糖蛋白基因重组PRV rPRV-LacZ-G,为其应用于兽用狂犬病疫苗的开发奠定了基础。
- 李业伟杨洋刘晔王景龙孙程龙韩乃君刘祥义扈荣良
- 关键词：伪狂犬病病毒狂犬病病毒同源重组LAC
- 一株鼬獾狂犬病病毒的全基因组及主要结构蛋白序列分析
- 对2008年10月分离自江西景德镇地区的鼬獾狂犬病分离株JX08-45进行了全基因组和编码蛋白序列的测定和分析。结果显示,JX08-45分离株基因组全长11922nt,其3’端和5’端分别存在58nt的Leader和70...
- 张守峰刘晔赵敬慧张菲王颖张锦霞扈荣良
- 关键词：狂犬病病毒全基因组
- 文献传递
- 狂犬病病毒SRV9株糖蛋白333位氨基酸变异对其免疫原性的影响
- 2012年
- 目的探讨狂犬病病毒(Rabies virus,RV)SRV9株糖蛋白(G)333位丝氨酸(S)分别突变为精氨酸(R)和谷氨酸(E)后,对其免疫原性的影响。方法采用RT-PCR法扩增RV SRV9株G蛋白基因,经测序鉴定正确后,通过PCR将编码糖蛋白333位丝氨酸的核苷酸分别突变为编码精氨酸和谷氨酸的核苷酸,并分别构建复制缺陷型重组人5型腺病毒rAd5-SRV9-G333E、rAd5-SRV9-G333S和rAd5-SRV9-G333R,经形态学观察、RT-PCR检测及直接免疫荧光试验鉴定重组腺病毒,并免疫小鼠,检测小鼠中和抗体水平及阳转率,评价3种重组腺病毒免疫原性的差异。结果 SRV9株G蛋白基因及其突变体经测序鉴定正确;制备的重组腺病毒镜下可见典型的腺病毒外形特征,感染HEK293AD细胞后出现明显的细胞病变;RT-PCR及直接免疫荧光试验结果显示,3种重组腺病毒在HEK293AD细胞中均已成功表达;rAd5-SRV9-G333E诱导小鼠产生的中和抗体效价和阳转率均明显高于rAd5-SRV9-G333S(P<0.05)。结论 RV SRV9株糖蛋白333位丝氨酸突变为谷氨酸后,可显著增强其免疫原性。
- 孙程龙杨洋王颖宫婷刘祥义陈奇王景龙刘晔张守峰扈荣良
- 关键词：狂犬病病毒糖蛋白氨基酸免疫原性
- 以犬2型腺病毒Ⅸ蛋白为基础的展示技术研究
- 2008年
- 以犬2型腺病毒全基因组重组质粒pPolyⅡ-CAV-2为基础,通过NcoⅠ和MluⅠ双酶切、Klenow补平,构建了不含外源启动子、大小为979bp的增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因;通过MluⅠ和EcoRⅠ双酶切将含有犬2型腺病毒的Ⅸ蛋白的340bp的片段克隆入pEGFP-C1-dAseⅠ质粒中,构建pEGFP-SIX载体,通过AseⅠ单酶切插入EGFP,即在编码Ⅸ蛋白基因的最后密码子与终止密码子之间按与Ⅸ蛋白编码链相同转录方向插入EGFP基因,获得重组基因组质粒pPolyII-CAV-2-ⅨE(34.3kb)。酶切鉴定结果显示,目的基因均克隆进Ⅸ蛋白中。
- 王燕张守峰刘晔扈荣良张乐萃
- 关键词：犬2型腺病毒狂犬病病毒重组病毒
- 猪瘟病毒E2蛋白基因重组人5型腺病毒的构建及鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的构建猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)E2蛋白基因重组人5型腺病毒,并进行鉴定。方法通过巢式PCR从猪瘟活疫苗中扩增CSFV E2全基因序列,克隆至穿梭质粒pacAd5 CMVK-NpA的多克隆位点处,构建重组穿梭质粒pacAd5 CMVK-NpA-E2,将其线性化后与骨架质粒pacAd5 9.2-100共转染293AD细胞,进行重组腺病毒的包装。细胞完全病变后,采用RT-PCR法检测E2基因mRNA的转录;细胞病变法检测病毒滴度;连续传代后检测病毒的稳定性;Western blot法检测E2蛋白的表达;以105.82TCID50重组腺病毒经腹腔免疫小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清猪瘟抗体效价。结果重组穿梭质粒pacAd5 CMVK-NpA-E2经双酶切及测序证明构建正确;重组腺病毒rAd5v-MxE2转染的293AD细胞可检测到E2基因的转录和蛋白的表达;重组腺病毒的滴度为105.82TCID50/ml;第5、30代重组腺病毒均可扩增出目的基因条带,病毒滴度无明显变化;重组腺病毒免疫小鼠后,可产生CSFV抗体。结论成功构建了CSFV E2基因重组人5型腺病毒,其免疫原性良好,为进一步研制猪瘟基因工程疫苗奠定了基础。
- 杨洋高博宫婷李业伟孙程龙张守峰刘晔扈荣良
- 关键词：猪瘟病毒E2蛋白腺病毒免疫原性
- 我国狂犬病预防和控制建议被引量：33
- 2012年
- 1狂犬病及流行概况
狂犬病（Rabies）是一种由狂犬病病毒（Rabiesvirus，RABV）感染引起的高度致死性脑脊髓炎^[1]。所有种类的温血动物，不分年龄大小，均对狂犬病易感。犬的狂犬病俗称疯狗病（MadDogDisease），能使患病犬的中枢神经系统兴奋，发作时往往表现攻击行为，咬伤人或其他种类动物个体，造成犬群或犬科野生动物狂犬病的外溢，从而导致人、家畜（如牛、马、羊、猪、驴、鹿、水牛等）和其他温血动物（如猫、狐、黄鼬、鼬獾、猪獾、狼、浣熊、臭鼬、鼠等）的感染^[2-3]。
- 扈荣良张守峰刘晔
- 关键词：狂犬病病毒中枢神经系统兴奋野生动物脑脊髓炎
- 广东省猪圆环病毒2型基因的克隆与序列分析被引量：3
- 2016年
- 根据Gen Bank已发表的猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）全基因组序列,设计1对特异性引物,对广东省不同地区规模化猪场采集的临床诊断为断奶仔猪多系统消耗综合征（Postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS）的组织病料进行了PCV2基因克隆和序列分析。结果表明,采集的PMWS病料均可扩增出PCV2完整基因序列,与Gen Bank已发表的PCV2参考毒株序列核苷酸同源性达93.7%-99.8%,亲缘关系密切。其中10个PCV2基因全长1767 bp,属于PCV2b亚型,1个PCV2基因全长1768 bp,属于PCV2a亚型。
- 严妍宫婷张守峰赵敬慧刘晔王颖张菲张锦霞扈荣良
- 关键词：猪圆环病毒2型基因分析流行毒株
- 牛乳铁蛋白肽转基因小鼠的构建被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨牛乳铁蛋白肽在转基因鼠乳汁中的表达及其抑菌活性。方法:将实验室构建并保存的包含山羊β-酪蛋白基因启动子和牛乳铁蛋白肽基因的乳腺特异表达载体PI-bcp-LfcinB,用Xho I和Nru I双酶切,得到含有全部表达盒的显微注射DNA片段,采用常规显微注射技术获得转基因小鼠。并通过对泌乳期转基因雌鼠乳腺组织的RT-PCR检测,确定了牛乳铁蛋白肽在mRNA水平的表达,同时利用琼脂板扩散法检测了转基因鼠乳汁中表达产物的抑菌活性。结果:获得了牛乳铁蛋白肽转基因小鼠,且转基因小鼠乳汁中能够表达具有抑菌活性的牛乳铁蛋白肽。结论:通过转基因动物乳腺可以获得具有生物活性的牛乳铁蛋白肽,为进一步研究抗菌肽转基因牛、培育抗乳房炎奶牛新品种以及通过建立转基因动物生物反应器进行抗菌肽的大量生产奠定了基础。
- 张锦霞范志强刘晔张守峰杨洋王颖张菲扈荣良
- 关键词：显微注射转基因鼠
