原红军
- 作品数：5 被引量：18H指数：3
- 供职机构：南方医科大学珠江医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Beclin1基因增强三阴性乳腺癌细胞BT-549对多柔比星的敏感性被引量：3
- 2013年
- 目的:探讨Beclin1基因对三阴性乳腺癌细胞BT-549增殖及多柔比星作用于癌细胞的影响。方法:脂质体法分别将质粒pDsRed-C1、pDsRed-C1-Beclin1转染于人三阴性乳腺癌BT-549细胞株。转染后一组用多柔比星处理,另一组不做处理。MTT法分析Beclin1过表达对BT-549细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:多柔比星处理前后,Beclin1组细胞增殖均慢于阴性对照组和空白组细胞(各P<0.01);细胞凋亡的变化:多柔比星处理前转染pDsRed-C1-Beclin1的BT-549细胞凋亡率为(8.81±1.45)%,高于转染pDsRed-C1细胞组和空白组(P<0.05),多柔比星处理后,Beclin1组细胞的凋亡率为(14.3±1.09)%,亦高于阴性对照组和空白组(P=0.00)。结论:Beclin1基因过表达抑制BT-549细胞的增殖,增强癌细胞对多柔比星的敏感性。
- 王日玮吴爱国王梦川原红军
- 关键词：多柔比星
- 转染beclin1基因诱导自噬对三阴性乳腺癌BT-549细胞生长的影响被引量：14
- 2013年
- 目的探讨转染beclin1基因诱导三阴性乳腺癌BT-549细胞发生自噬及其对细胞生长的影响。方法将BT-549细胞分为4组,包括空白组、空载体组、脂质体组和目的基因组,并以MDA-MB-231细胞作为阳性对照组。采用Lipofectamine^(TM)2000携带含有beclin1基因的质粒转染BT-549细胞,分别于转染后24、36、48、60h用荧光显微镜观察转染效率;于转染后48h利用RT-PCR检测各组细胞beclin1 mRNA表达情况;转染后各组细胞分别在含10%胎牛血清1640培养基和无胎牛血清1640培养基内培养,并分别于24、48、72、96h和12、24、36、48h采用MTT法检测细胞的增殖率和存活率;各组细胞在无胎牛血清1640培养基内培养24h后,采用流式细胞仪检测其细胞凋亡和细胞周期情况;各组细胞在无胎牛血清1640培养基内生长36h后,经吖啶橙染色观察并比较发生自噬的细胞数。MTT数据按重复测量的方差分析进行统计,其余计量资料按单因素方差分析进行统计,计数资料按照R×C表资料的χ~2检验进行统计分析。结果 48h时携带目的基因的质粒经脂质体转染BT-549细胞的效率最高;目的基因组细胞beclin1 mRNR水平显著高于空白组、脂质体组、空载体组和阳性对照组(P<0.01);在含10%胎牛血清1640培养基内,目的基因组细胞的增殖率显著低于空白组(F=112.1,P=0.00),而在无胎牛血清1640培养基内,目的基因组细胞36h和48h的存活率显著高于空白组(F=37.5,P=0.00);目的基因组细胞的凋亡比例增加(F=3914.4,P=0.00),且细胞处于G0/G1期的比例升高(F=258.8,P=0.00);目的基因组细胞发生自噬的数量显著增加(χ~2=7.7,P=0.00)。结论向三阴性乳腺癌BT-549细胞转染beclin1基因,可提高细胞的自噬水平。该作用可抑制细胞在正常培养环境下的增殖,但对低营养环境下的细胞存活具有保护作用。
- 王梦川吴爱国王日玮原红军李学孝胡斌邵国利纪术峰吴凯范旭龙郑临海
- 关键词：BECLIN自噬
- beclin 1过表达对三阴性乳腺癌BT-549细胞生长抑制作用观察被引量：3
- 2014年
- 目的:观察自噬调控基因beclin 1过表达对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)BT-549细胞的体外生长影响。方法:应用荧光显微镜观察细胞转染效率,采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测细胞beclin 1mRNA和蛋白表达水平,采用吖啶橙染色观察细胞自噬情况,采用MTT检测细胞的增殖率,采用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期情况。结果:细胞转染48h实验组和对照组的细胞转染效率均>45%,qRT-PCR提示实验组细胞beclin 1mRNA 2-ΔΔCt值为16.806±2.920,较空白组(0.853±0.025)显著升高,F=88.733,P<0.001;蛋白质印迹法提示实验组细胞beclin 1/GAPDH灰度值比为1.050±0.056,较空白组(0.640±0.006)显著升高,F=137.213,P<0.001;吖啶橙染色提示实验组细胞发生自噬的比例为33%,显著高于空白组(15%),χ2=8.985,P=0.011;MTT法提示实验组细胞增殖率在24h(0.152±0.019)、48h(0.254±0.029)、72h(0.322±0.027)和96h(0.357±0.035)均显著低于空白组24h(0.202±0.023)、48h(0.308±0.030)、72h(0.446±0.032)和96h(0.851±0.014),P值均<0.05;72h实验组细胞凋亡率为(6.560±0.593)%,显著高于空白组(2.533±0.216)%,F=107.085,P<0.001;实验组G0/G1期为(63.267±3.650)%,显著高于空白组(51.533±5.152)%,F=6.566,P=0.027。结论:自噬调节基因beclin 1过表达可显著抑制BT-549细胞的体外增殖水平。
- 吴爱国王梦川王日玮原红军纪术峰邵国利郑临海范旭龙焦庆丽
- 关键词：乳腺肿瘤自噬BECLIN
- 正常和低氧环境下转染beclin-1对乳腺癌细胞BT-549的抑制作用
- 研究背景和目的:乳腺癌已成为近年来发病率最高的女性肿瘤之一，其中三阴性乳腺癌(TNBC)约占15％。TNBC指的是ER、PR与HER-2均为阴性的乳腺癌，其特点是预后差，早期和术后转移率高，针对ER、PR的内分泌治疗和针...
- 原红军
- 关键词：乳腺癌荧光蛋白
- 正常和低氧环境下转染beclin-1对乳腺癌细胞BT-549的抑制作用被引量：2
- 2012年
- 目的研究转染beclin-1基因对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞BT-549在正常及低氧环境下的增殖抑制情况,促自噬和促凋亡作用,以及其对细胞迁移能力的影响。方法利用脂质体将真核载体pDS-RED-C1-beclin-1转染进入BT-549细胞作为实验组,空白组细胞和转染pDS-RED-C1空质粒的细胞分别作为空白对照组和阴性对照组,用RT-PCR检测转染后beclin-1mRNA表达,Western blot检测转染后蛋白表达。在正常及低氧环境下分别培养后用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测细胞增殖率,吖啶橙染色后用荧光显微镜观察细胞自噬情况,流式细胞仪检测细胞凋亡百分比。通过细胞划痕试验研究转染beclin-1基因对细胞迁移能力的影响。RT-PCR和Western blot结果及MTT所测增殖率结果用单因素方差分析,自噬和凋亡的差异采用卡方检验分析。结果 beclin-1基因被成功转染进细胞;转染后目的基因组beclin-1mRNA和蛋白表达均高于对照组,72h最明显。MTT测定结果:正常与低氧环境下实验组48h和72h增殖率均低于对照组(48hP_1=0.002,P_2=0.000;72hP_1=0.006,P_2=0.001;P_1和P_2分别为正常与低氧环境下统计结果),beclin-1与低氧刺激有明显交互作用(P=0.016),即二者能增强彼此对细胞增殖率的抑制作用。吖啶橙染色镜下观察正常和低氧环境下实验组自噬发生率明显高于空白对照组(P_1=0.004,P_2=0.001),阴性对照组与空白对照组间差异无统计学意义(P>0.050)。流式细胞仪检测正常和低氧环境下实验组凋亡发生率均高于空白对照组(P_1=0.045,P_2=0.008)。体外划痕试验发现转染beclin-1后细胞迁移能力降低。结论在正常和低氧环境下,转染beclin-1基因可抑制TNBC细胞BT-549增殖,促进细胞发生自噬及凋亡,并且降低其迁移能力。
- 原红军吴爱国王梦川王日玮李学孝胡斌邵国利纪术峰吴凯范旭龙郑临海
- 关键词：自噬
