叶秋萍
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 携带乙肝大包膜蛋白L基因与结核Esat6融合基因植物表达载体的构建及鉴定
- 2011年
- 构建包含编码结核杆菌Esat6基因和乙肝病毒大包膜蛋白(L蛋白)基因的植物双元表达载体,并转化根癌农杆菌LBA4404。分别以质粒pPIC9K-L和结核杆菌基因组为模板进行PCR扩增,获得L和Esat6基因,然后运用部分重叠聚合酶链式反应扩增出L-Esat6融合基因片段,连接到有玉米特异性启动子globulin-1的pEGG载体上,将G-L-Esat6融合基因片段酶切下,连接到含有抗除草剂基因bar的双元表达载体pCAMBIA1300上,电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA4404中。构建了真核表达重组质粒pCAMG-L-Esat6,测序分析表明,克隆的L和Esat6序列与NCB I上公布序列一致。成功构建与转化了包含编码乙肝病毒大包膜蛋白L基因和结核杆菌Esat6基因的植物表达载体,并将其转化入根癌农杆菌LBA4404中,为成功研制利用转基因植物生产抗乙肝和结核联合口服疫苗奠定了基础。
- 李君武宫君原刘鑫叶秋萍黄清华
- 关键词：结核分枝杆菌乙肝病毒
- 乙肝病毒大包膜蛋白基因植物表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2010年
- 构建包含编码乙肝病毒大包膜蛋白(L蛋白)基因的植物表达载体,并转化根癌农杆菌,为进一步制备转基因植物口服乙肝疫苗奠定基础。通过聚合酶链反应(PCR),以质粒pVAX1-L为模板扩增出L基因片段,插入到含有玉米特异性启动子的pCR2.1载体上;再用PCR技术扩增globulin-1-L融合片段,定向克隆到经过加工修饰的含有抗除草剂基因bar的双元表达载体pCAMBIA1300上,将重组质粒转化至农杆菌LBA4404中。HindⅢ和XbaⅠ双酶切证实,globulin-1-L融合片段已经插入到pCAMBIA1300上,测序结果说明克隆的靶基因序列与GenBank上公布的序列完全吻合。
- 李君武叶秋萍刘艳黄清华王珊珊宋东
- 关键词：乙肝病毒疫苗
- 携带结核杆菌Ag85B基因的植物表达载体的构建及鉴定
- 2010年
- 构建包含结核杆菌Ag85B基因的植物表达载体,并转化农杆菌LBA4404。以pcDNA3-Ag85B为模板,通过常规PCR克隆出Ag85B基因,定向克隆至含有玉米特异性启动子globulin-1的pCR2.1载体上,然后将globulin-1-Ag85B的融合片段酶切下来,并连接到经过加工修饰的含有抗除草剂基因bar的双元表达载体pCAMBIA1300上,将重组质粒转化至农杆菌LBA4404中。重组质粒双酶切可见0.8bp和10kb的两条特异性条带,与预期大小相一致。重组质粒测序表明克隆的Ag85B基因序列与Genbank上相一致,酶切从农杆菌中所抽提的质粒,片段大小与预期相一致。成功构建与转化了携带结核Ag85B基因的植物双元表达载体,为利用植物反应器生产口服结核疫苗奠定基础。
- 李君武刘艳黄清华叶秋萍
- 关键词：结核分枝杆菌
- 表达肾癌G250基因和hGM-CSF基因HEK293细胞系的建立
- 2011年
- 目的建立稳定表达肾癌G250基因与基因佐剂hGM-CSF基因编码蛋白的的HEK293细胞系。方法通过脂质体转染的方法,将表达肾癌G250基因与细胞因子GM-CSF基因的双顺反子pIG250-GM真核表达质粒导入HEK293细胞中;经持续G418压力选择和有限稀释法获得稳定转染的细胞系;用免疫组化、ELISA和Western Blot方法,检测目的蛋白在HEK293细胞中的表达。结果经600 μg / mL的G418压力筛选后,获得了抗性细胞克隆;免疫组织化学方法检测到表达G250的阳性细胞;ELISA方法检测到pIG250-GM转染组细胞培养上清中hGM-CSF的表达与空载体对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);Western Blotting方法检测到G250蛋白的表达,分子量约54Ku,与预期大小相符。结论成功建立可稳定表达肾癌G250基因与细胞因子GM-CSF基因的HEK293细胞系,为研究防治肾癌疫苗的免疫应答机制提供了实验基础。
- 陈怡叶秋萍刘鑫宫君原李淑琴
- 关键词：肾细胞癌G250HGM-CSFHEK293细胞
