孙昌文
- 作品数：6 被引量：27H指数：2
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- 结核分枝杆菌对左氧氟沙星与莫西沙星的交叉耐药性及gyrA和gyrB基因突变分析被引量：23
- 2010年
- 目的研究结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）对左氧氟沙星（1evofloxacin，LVF）与莫西沙星（moxifloxacin，MXF）的交叉耐药性，分析gyrA和gyrB基因突变位点分布及突变位点与耐药水平的关系。方法采用改良罗氏培养基检测MTB标准菌株H。，Rv、66株LVF耐药和55株LVF敏感的MTB临床分离菌株LVF和MXF的最低抑菌浓度（minimal inhibition concentration，MIC）。通过PCR直接测序法测定gyrA和gyrB耐药基因片段。结果MXF的MIC比LVF低2～4倍，MXF抗MTB菌株的活性是LVF的2～4倍。MTB标准菌株H37Rv未见gyrA和gyrB基因突变。66株LVF耐药和55株LVF敏感菌株均存在gyrAAGc95ACC（Ser→Thr）突变；55株LVF敏感菌株gyrA和gyrB基因未见其他突变。66株LVF耐药菌株中，40株（60．6％）gyrA GAC94（AAC或GGC或GCC或CAC或TAC）（Asp→Asn或Gly或Ala或His或Tyr）突变；19株（28．8％）gyrAGCG90GTG（Ala→Val）和1株（1．59／6）gyrA GCG90AAG（Ala→Lys）（未见报导）双碱基突变；3株（4．6％）gyrA TCG91CCG（Ser→Pro）突变；1株（1．5％）gyrBGAC500AAC（Asp→Asn）突变；2株（3．0％）呈gyrA GAC94（AAC或GCC）（Asp→Asn或Ala）与gyrB GGG551AGG（Gly→Arg）（未见报导）双位点突变。gyrA GAC94（AAC或GGC）（Asp→Asn或Gly）突变引起FOs药物较高水平耐药；GAC94GCC（Asp→Ala）和GCG90GTG（A1a→Val）突变引起FQs药物较低水平耐药。结论LVF与MXF之间存在交叉耐药，MXFMIC随LVFMIC增高而增高，但耐药水平不同。GyrA基因突变位点可能与耐药水平有关，有可能根据基因突变的位点分析耐药水平。
- 李国利陈澎孙昌文张灵霞李邦印赵雁林
- 关键词：氧氟沙星莫西沙星GYRAGYRB
- Rv2653c在大肠埃希菌中的克隆与表达研究被引量：3
- 2010年
- 目的从H37Rv标准株克隆出结核菌Rv2653c基因并进行表达与初步分析。方法根据H37Rv基因组序列合成引物,以PCR方法钓取Rv2653c基因,克隆到pGEM-T上,挑取阳性克隆进行测序,将正确编码基因克隆到pET24b载体上,在BL21大肠埃希菌菌株中以IPTG诱导表达重组蛋白。以金属螯合层析初步分离纯化重组蛋白,采用western blot方法对重组抗原进行抗原性初步分析。结果首先获得了重组的Rv2653c编码的蛋白,表达产率不低于20%,初步纯化纯度约90%,以人血清进行的western blot分析发现,Rv2653c重组蛋白有较好的抗原性。结论获得了Rv2653c重组蛋白为进一步寻探讨其功能及应用价值奠定基础。
- 李邦印孙卫国程小星孙昌文熊志红王仲元王金河苏锐
- 关键词：分枝杆菌结核大肠埃希菌细菌蛋白质类重组蛋白质类
- Rv2653c在大肠杆菌中的克隆与表达研究
- 目的：从H37Rv标准株克隆出结核菌Rv2653c基因并进行表达与初步分析。方法：根据H37Rv基因组序列合成引物，以PCR方法钓取Rv2653c基因，克隆到pGEM-T上，挑取阳性克隆进行测序，将正确编码基因克隆到pE...
- 李邦印孙卫国程小星孙昌文熊志红王仲元王金河苏锐
- 关键词：结核分枝杆菌大肠杆菌基因克隆蛋白表达结核病
- Rv2653c在大肠杆菌中的克隆与表达研究
- 目的从H37Rv标准株克隆出结核菌Rv2653c基因并进行表达与初步分析。方法:根据H37Rv基因组序列合成引物,以PCR方法钓取Rv2653c基因,克隆到pGEM-T上,挑取阳性克隆进行测序,将正确编码基因克隆到pET...
- 李邦印孙卫国程小星孙昌文熊志红王仲元王金河苏锐
- 关键词：结核分枝杆菌大肠杆菌克隆
- 文献传递
- 结核分枝杆菌对左氧氟沙星与莫西沙星的交叉耐药性及gyrA和gyrB基因突变分析
- 目的：研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)对左氧氟沙星(levofloxacin，LVF)与莫西沙星(moxifloxacin，MXF)的交叉耐药性，分析gyrA和gyrB基因...
- 李国利陈澎孙昌文张灵霞李邦印赵雁林
- 关键词：结核分枝杆菌左氧氟沙星莫西沙星GYRA基因
- 结核分枝杆菌PE35在大肠杆菌中的可溶性表达及产物纯化被引量：1
- 2010年
- 目的利用大肠杆菌表达系统大量获得重组的结核分枝杆菌PE35蛋白,并初步评估其在结核病血清学诊断方面的价值。方法用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv全基因组中获得PE35基因克隆到pET24b中,转化BL21(DE3)构建大肠杆菌表达株;聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定重组蛋白及其表达方式;使用Ni-sepharose纯化蛋白;Western-blot检测结核病人血清的抗结核抗体。结果酶切鉴定和DNA序列分析显示构建了正确的pET-PE35原核表达载体,并能在大肠杆菌BL21(DE3)中可溶性地表达分子量大小相符的重组蛋白。纯化后的蛋白纯度达到90%以上,能与结核病人血清抗体结合。结论成功地构建了pET-PE35原核表达载体,并获得较纯的重组PE35蛋白,此蛋白能检测结核病人血清抗体。为探讨PE35蛋白在结核病的基础研究与诊断运用奠定了基础。
- 熊志红朱琰孙昌文庄玉辉程小星
- 关键词：结核分枝杆菌可溶性表达纯化
