张新红
- 作品数：6 被引量：33H指数：3
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- 槲皮素诱导MCF-7细胞凋亡及其与Fas/FasL通路的相关性研究被引量：11
- 2015年
- 目的:了解槲皮素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用及其与Fas/Fas L通路的相关性。方法:建立槲皮素诱导的MCF-7细胞凋亡模型。采用透射电镜观察细胞核形态变化,Annexin V-FITC/PI和JC-1荧光标记流式细胞术检测细胞凋亡率、线粒体膜电位(Δψm)及Fas L中和抗体对细胞凋亡的阻断作用。采用免疫荧光法和流式细胞术检测细胞Fas/Fas L的表达。流式细胞术观察p38 MAPK抑制剂SB203580对细胞Fas/Fas L表达的影响。Western blot检测p38 MAPK和p-p38 MAPK蛋白水平的变化。结果:80.0μmol/L槲皮素处理MCF-7细胞48h,透射电镜可见染色质浓缩及边缘化现象;处理24 h、48 h和72 h,Δψm分别下降17.4%、44.3%和68.9%,细胞凋亡率分别为(10.2±3.3)%、(28.9±7.5)%和(39.2±8.9)%。Fas L中和抗体预处理细胞后,24 h、48 h和72 h的细胞凋亡率则分别为(8.2±2.8)%、(19.2±5.3)%和(22.5±6.9)%,细胞凋亡阻断率分别为19.6%、33.6%和42.6%。Fas/Fas L表达率随处理时间增加而升高,SB203580可显著抑制细胞Fas/Fas L的表达率。p38 MAPK的蛋白水平变化不大,而p-p38 MAPK的蛋白水平在48 h和72 h显著增高。结论:槲皮素可上调MCF-7细胞的Fas/Fas L表达,并经膜Fas/Fas L途径诱导MCF-7细胞凋亡,p-p38 MAPK可能是上调Fas/Fas L表达的重要信号分子。
- 厉小雪徐水凌张婷婷陈张艳张新红
- 关键词：槲皮素MCF-7细胞细胞凋亡FAS/FAS
- 线粒体损伤在创伤弧菌诱导树突状细胞凋亡中的作用被引量：3
- 2014年
- 目的:探讨线粒体损伤在创伤弧菌(Vibrio vulnificus,Vv)诱导树突状细胞(dendritic cell,DC)凋亡过程中的作用及其可能机制。方法:建立Vv 1.1758与DC2.4细胞混合培养模型。采用扫描电镜和透射电镜观察创伤弧菌侵入细胞方式和细胞线粒体病变情况。荧光探针DCFH-DA和Fluo-8/AM分别检测侵入细胞内活性氧(ROS)和Ca2+离子水平。流式细胞术检测细胞线粒体膜电位和细胞凋亡情况。采用Western blotting检测NF-κB p65和TNF-α蛋白的表达。结果:Vv 1.1758可诱导DC2.4细胞凋亡。Vv 1.1758以菌体一端与细胞表面结合的方式侵入细胞,侵入细胞的线粒体有明显病变,细胞内ROS和Ca2+水平升高,线粒体膜电位降低。共培育1 h,NF-κB p65蛋白即开始升高,5 h达高峰,6 h稍有下降;TNF-α蛋白则在共培育2 h开始增高,6 h达高峰。结论:线粒体损伤在Vv诱导DC凋亡中发挥作用,其作用机制可能与细胞内ROS和Ca2+水平升高、线粒体膜电位降低有关,NF-κB p65和TNF-α可能是细胞凋亡过程中的重要信号分子。
- 徐水凌朱佳张新红邵平扬郑文文
- 关键词：创伤弧菌树突状细胞细胞凋亡线粒体肿瘤坏死因子Α
- RGD修饰载阿霉素固体脂质纳米粒的制备及体外转运能力观察
- 2023年
- 目的 制备精氨酸—甘氨酸—天冬氨酸肽(RGD)修饰的载阿霉素固体脂质纳米粒(RGD-DOX-SLNs),观察其在肠道M细胞模型中的转运能力。方法 采用不同乳化剂配方,以乳化溶剂挥发法制备固体脂质纳米粒(SLNs),通过检测SLNs的稳定性,选取较优乳化剂配方进行阿霉素包载;制备载阿霉素的SLNs(DOX-SLNs),测定粒径、表面电位及包封率,选择最优乳化剂配方,对DOX-SLNs表面进行RGD修饰,制备RGD-DOX-SLNs;以空白SLNs作为对照。使用透射电镜观察RGD-DOX-SLNs和DOX-SLNs的形态,采用CCK-8法测算与载药SLNs共培养的Caco-2细胞及293T细胞存活率以评价载体安全性。建立滤泡相关上皮单层细胞模型,分别加入含有阿霉素单药、DOX-SLNs或RGD-DOX-SLNs的HBSS液,采用荧光分光光度法测定转运小室下侧的阿霉素浓度,共聚焦显微镜观察荧光,评价RGD-DOX-SLNs和DOX-SLNs的药物转运能力。结果 选择最优乳化剂配方为1%吐温与1%泊洛沙姆188体积比2∶1,DOX-SLNs粒径、表面电位及包封率分别为(147.4±11.2)nm、(-20.0±2.3)mV、80.9%±2.8%,RGD-DOX-SLNs分别为(153.1±6.2)nm、(-22.0±1.3)mV、81.3%±0.8%。透射电镜下RGD-DOX-SLNs和DOXSLNs形态圆整,RGD-DOX-SLNs表面略粗糙。RGD-DOX-SLNs和DOX-SLNs在0~1 000μg/mL浓度范围内安全性较好。阿霉素单药组、DOX-SLNs组及RGD-DOX-SLNs组的转运量依次增高(P均<0.05);阿霉素单药组红色荧光微弱,DOX-SLNs组X-Y、Y-Z、X-Z三个切面均可见红色荧光,RGD-DOX-SLNs组红色荧光强度较DOX-SLNs增强。结论 成功制备RGD-DOX-SLNs,较DOX-SLNs对阿霉素的体外转运能力更高。
- 于海涛冯梦萱张新红沈斌肖燕萍董晶剑施丽丽
- 关键词：药物转运阿霉素固体脂质纳米粒M细胞
- 人脂肪间充质干细胞的分离、培养及鉴定被引量：1
- 2012年
- 取脂肪吸脂术分离的脂肪细胞,在胰酶和胶原酶的作用下分离、培养ADSC并对其进行增殖能力、干细胞表面标志的测定以及转录因子水平的检测.分离、培养的ADSC在光镜下呈圆形、贴壁生长,可见小的胞浆突起.经细胞增殖曲线绘制,细胞在1～3d处于生长适应期,而3～6d处于对数生长期,8～10d后细胞增殖明显减缓.流式细胞术鉴定细胞表面标志结果显示分离培养的细胞表达间充质干细胞表面标志,而不表达造血干细胞和成纤维细胞表面标志.对培养的ADSC检测其转录因子Nanog和oct-4的表达,结果显示体外培养的ADSC在第15代仍可稳定表达Nanog和oct-4.
- 韩冬徐煌张新红肖燕萍
- 关键词：脂肪间充质干细胞
- 龙葵碱通过线粒体途径诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡被引量：17
- 2014年
- 目的研究龙葵碱对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响并探讨相关机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察不同浓度龙葵碱对人乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用;4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色荧光显微镜进行细胞凋亡核形态学观察;DNA琼脂糖凝胶电泳进行DNA片段化分析,FITC-Annexin V/PI荧光标记流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光显微镜结合Fluo-8/Am法、流式细胞术和分光光度比色法分别检测胞内Ca2+浓度、线粒体膜电位(△ψm)和caspase-3,caspase-8活性变化。结果四甲基偶氮唑蓝法结果显示,龙葵碱对人乳腺癌MCF-7细胞有生长抑制作用。10.0 mmol·L-1龙葵碱处理2d,4,6-二脒基-2-苯基吲哚染色可见核浓缩及边缘现象,DNA电泳出现特征性的凋亡条带。10.0 mmol·L-1龙葵碱处理1,2,3d的细胞凋亡率分别为(20.9±7.3)%、(42.6±8.8)%和(74.9±12.8)%;细胞内Ca2+荧光强度分别为35.6±2.9、52.3±5.6和27.2±2.2;线粒体膜电位(△ψm)值分别下降7.7%、33.2%和46.9%;caspase-8活性在1 d达最高(1.85±0.09)U·μg-1,caspase-3活性则在2 d达最高(2.18±0.09)U·μg-1,与对照组相比均有统计学显著性差异(P<0.05)。结论龙葵碱可诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡,其诱导凋亡的机制可能与胞内Ca2+浓度升高、线粒体膜电位降低和caspase-3、8活化有关。
- 张新红朱佳徐水凌
- 关键词：龙葵碱MCF-7细胞细胞凋亡线粒体膜电位
- 钙离子及信号转导和转录激活因子3信号分子在创伤弧菌临床分离株 B2侵入树突状细胞中的作用被引量：1
- 2014年
- 目的：探讨创伤弧菌临床分离株 B2侵入树突状细胞（DC）过程中细胞内钙离子[Ca2＋]i浓度的改变以及信号转导和转录激活因子3（STAT3）信号分子的作用。方法建立创伤弧菌 B2株与DC 2．4细胞的混合培养模型，流式细胞术检测不同侵入时间段内细胞凋亡率和坏死率，荧光探针 Fluo-8-AM 观察[Ca2＋]i 的改变，Western 印迹和免疫荧光技术检测 STAT3和磷酸化 STAT3（p-STAT3，705位点）相对分子表达量和细胞内分布。数据分析采用 t 检验。结果创伤弧菌 B2株与 DC 2．4细胞混合培养1、2、3和4 h 后，其细胞凋亡率分别为（13．10±4．72）％、（30．10±3．52）％、（46．20±15．61）％和（31．00±19．10）％，创伤弧菌1．1758株与创伤弧菌 B2株细胞凋亡率比较差异有统计学意义（t 值分别为4．30、22．33、4．30和4．30，P 值分别为0．040、0．002、0．040和0．040）；同时细胞坏死率分别为（19．70±3．50）％、（39．20±4．60）％、（40．90±13．80）％和（62．10±8．20）％，创伤弧菌1．1758株与创伤弧菌 B2株细胞坏死率比较差异有统计学意义（t 值分别为9．93、14．09、4．30和14．09，P 值分别为0．010、0．005、0．049和0．005）。与创伤弧菌1．1758株相比，创伤弧菌 B2株能在相同时间内引起更为明显的细胞凋亡和坏死。荧光显微镜下观察到[Ca2＋]i 的荧光强度随着细胞凋亡的增加而增强。STAT3分子的总蛋白量有所增加，但 p-STAT3（705位点）相对分子表达量则呈下降趋势，与对照组相比 p-STAT3（705位点）分子在细胞内的分布未见明显改变。结论创伤弧菌 B2株在侵入 DC 过程中，升高[Ca2＋]i 的同时抑制 STAT3（705位点）磷酸化，有可能是创伤弧菌 B2株诱导细胞快速凋亡和坏死的重要机制。
- 朱佳徐水凌张新红朱丽
- 关键词：临床分离株树突细胞信号转导和转录激活因子
