张晓伟
- 作品数：8 被引量：8H指数：2
- 供职机构：南昌大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技厅重大专项攻关项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生文化科学更多>>
- 多角度激光散射测定重组人核苷二磷酸激酶A在溶液中的聚集状态
- 2003年
- 熊盛钱垂文黄立王一飞张美英李久香严玖凤王小宁张晓伟毕志刚
- 重组人核苷二磷酸激酶A的理化性质被引量：5
- 2004年
- 对重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPK A)进行纯化 ,并对重组产物的理化性质及在溶液中的聚合状态进行鉴定。NDPK A工程菌发酵后的菌体高压匀浆 ,然后微孔过滤、超滤浓缩 ,所得样品经DEAE阴离子交换、CibacronBlue亲和层析、分子筛层析三步纯化后 ,以SDS PAGE和RP HPLC分析纯化产物的纯度 ,RP HPLC测定酶活性。合格制品以基质辅助激光解析飞行时间质谱测定相对分子质量 (MW ) ;Edman降解法测定N末端序列 ;多角度激光散射法测定重组产物在溶液中的表观分子量。结果表明 ,rhNDPK A纯化产物的SDS PAGE纯度为 97 3% ,RP HPLC纯度为 99 2 % ;比活性为 (90 0± 10 0 )u mg ;单体相对分子质量为 170 17,与NDPK A分子量理论值相差 132。测序结果表明 ,rhNDPK AN末端缺失Met残基 ,其理论分子量为 170 17,与飞行质谱测定结果完全一致。表观分子量测定结果表明 ,rhNDPK A在溶液中形成六聚体 ,表观分子量为 10 2kD。上述结果说明 ,NDPK A重组产物具与天然产物相同的自发形成六聚体性质 ,这为NDPK A新药开发和机理研究打下了良好基础。
- 熊盛钱垂文黄立王一飞张美英李久香严玖凤王小宁张晓伟毕志刚
- 关键词：六聚体
- 大黄素对大鼠肾移植急性排斥反应的影响
- 第一部分大鼠同种异体肾移植模型的建立
目的：在无需借助放大镜或手术显微镜的条件下建立一种稳定、简便、可靠的大鼠同种异体肾移植模型。
方法：以Wistar大鼠作为供体，SD大鼠作为受体。供体手术：分离供体的左输...
- 张晓伟
- 关键词：大黄素肾移植环孢素A白介素-2急性排斥反应
- 化学修饰的白细胞介素偶联物及其制备方法
- 本发明提供了一种化学修饰的白细胞介素偶联物，用以改善蛋白自身的物理化学性质。特别是聚乙二醇丙酸修饰的白细胞介素2。与已有技术中偶联物相比，本发明偶联物具有更为专一的结合位点，更低的免疫原性，产物稳定性好，更少的活性损失和...
- 刘谦严玖凤张晓伟李军张利萍李晋峰李先钟侯广才许可
- 文献传递
- 化学修饰的粒细胞集落刺激因子偶联物及其制备方法
- 本发明公开了一种化学修饰GCSF偶联物及其制备方法。本发明涉及一种接枝结构的聚乙二醇修饰的GCSF，其偶联物结构是已有技术中所没有的。与已有技术中偶联物相比，本发明偶联物具有更为专一的结合位点，更低的免疫原性，更少的活性...
- 刘谦严玖凤张晓伟李晋峰侯广才许可李先钟刘佳王蕊陈婷申晓阳
- 文献传递
- 江西高校“服务国家特殊需求人才培养项目”实施现状研究
- “服务国家特殊需求人才培养项目”（以下简称“特需项目”）是一项国家为了促使高等教育更好地服务经济社会发展需要，特安排少数办学水平较高、特色鲜明的高等学校，在一定时期内招收培养专业学位研究生的人才培养项目。项目开展以来，试...
- 张晓伟
- 关键词：专业学位
- 核苷二磷酸激酶A的异构及其分子机制被引量：3
- 2005年
- 对核苷二磷酸激酶A(NDPKA)的异构及其分子机制进行研究.还原和非还原SDSPAGE观察重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPKA)的异构;RPHPLC分析rhNDPKA异构体的反相色谱行为,并测定rhNDPKA异构体的酶活性;多角度激光散射法测定rhNDPKA异构体在溶液中的表观分子量;飞行质谱分析异构体的质量肽谱.结果发现,rhNDPKA在非还原SDSPAGE上表现为4条带,对应于NDPKA的氧化型、还原型、氧化型二聚体和还原型二聚体,其分子量分别为18.1kD、21.3kD、35.2kD和38.3kD.RPHPLC发现,还原型rhNDPKA和氧化型rhNDPKA疏水性有差异.新鲜制备的rhNDPKA在纯水溶液中,经空气氧化后,逐渐由还原型向氧化型过渡,而还原剂或生理盐水可使rhNDPKA稳定于还原型或氧化型.酶活测定结果表明,还原型rhNDPKA比活性为1965±166Umg,氧化型rhNDPKA比活性为974±53Umg.多角度激光散射检测发现,还原型rhNDPKA在溶液中仍可形成六聚体.质量肽谱结果证明,在氧化型rhNDPKA中,C4和C145位巯基形成二硫键,而C109位巯基游离存在.根据本文所确定的NDPKA单体中的二硫键位置,推导出rhNDPKA单体异构体和二聚体异构体的变构原理,这为进一步研究NDPKA的多能性调节机制打下了良好基础.
- 熊盛钱垂文王一飞黄立李久香严玖凤王小宁张晓伟毕志刚
- 关键词：异构二硫键分子机制
- 核苷二磷酸激酶A的定点突变及C4S突变体的制备和活性研究被引量：1
- 2010年
- 目的:对核苷二磷酸激酶A(NDPK-A)二硫键异构的关键残基C4进行定点突变,构建、表达并纯化C4S突变体,测定其磷酸转移酶活性和DNase活性,研究二硫键异构对NDPK-A活性的影响。方法:以pBV220-nm23-H1质粒作为模板,通过设计合适的引物对NDPK-A进行定点突变,将第4位半胱氨酸突变为丝氨酸,构建NDPK-AC4S突变体;在大肠杆菌BL21中表达,DEAE-sepharose Fas tFlow与Cibacron Blue 3GA Sepharose CL-4B纯化目的蛋白,获得均一重组蛋白,纯度达到98%;DNA序列测定及重组蛋白的肽质量指纹图谱(PMF)分析均证明构建正确突变体;高效液相色谱法(HPLC)与DNA消化法分别测定野生型NDPK-A与C4S突变体的磷酸转移酶活性与DNase活性差异。结果:NDPK-AC4S突变体的磷酸基转移酶与DNase酶活性均高于野生型NDPK-A。结论:NDPK-A缺失二硫键后,活性增高。NDPK-A形成链内二硫键可能是其活性负调控模式之一。
- 陈蕴如郭朝万黄增委钱垂文张晓伟王一飞熊盛
- 关键词：定点突变二硫键
