戴五星 作品数:39 被引量:50 H指数:4 供职机构: 华中科技大学同济医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 卫生部科技专项基金 湖北省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 更多>>
弓形虫RH株SAG2基因片段的克隆、表达、纯化与鉴定 目的:克隆弓形虫RH株膜表面抗原2(SAG2)编码基因,构建原核重组表达质粒PET23a-SAG2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达及纯化SAG2蛋白。方法:PCR扩增503bp的SAG2编码基因目的片段,胶回收... 雷明军 吴少庭 戴五星 潘晖榕 林绮萍 温见翔 黄达娜 高世同 张仁利文献传递 人结核杆菌Hsp65和Ag85B双价膜锚定表达DNA疫苗pIRES-MTHsp65-Ag85B的构建及其表达 结核病(tuberculosis,TB)是由结核杆菌引起的一种世界性的传染病,也是单一致病菌感染导致死亡率最高的疾病,它是全球重点控制的传染病之一。据统计,全球现在约有20亿人隐形感染结核分枝杆菌(mycobacteri... 杨平 戴五星文献传递 SARS冠状病毒E蛋白DNA疫苗的构建及其实验免疫研究 2006年 目的构建SARS冠状病毒(SARS-CoV)小囊膜蛋白(E蛋白)的DNA疫苗pVAC-E,观察其在小鼠中诱导的免疫应答。方法采用PCR方法体外扩增SARS冠状病毒E蛋白的基因片段,克隆入真核表达载体pVAC,构建pVAC-E重组质粒。通过脂质体介导瞬时转染非洲绿猴肾(Vero)细胞,Western-blot鉴定E蛋白在细胞中的表达。以基因枪方式免疫小鼠,ELISA检测小鼠血清特异性抗体,MTT法测定淋巴细胞转化率,流式细胞仪检测小鼠脾脏T淋巴细胞亚群分布。结果成功构建SARS-CoVDNA疫苗pVAC-E。Western-blot结果示,转染后的Vero细胞可表达一约9kD大小能被SARS病人血清特异识别的蛋白条带。免疫小鼠中未检测到明显的抗体滴度升高。淋巴细胞转化率在免疫组和对照组间无差别(P>0.05)。脾脏T淋巴细胞亚群分析示免疫组小鼠CD4+细胞显著升高(P<0.05),CD8+细胞与对照组相比无显著差异。结论构建的真核表达质粒pVAC-E能在Vero细胞中表达,表达产物具免疫活性,免疫小鼠后能诱导一定的细胞免疫应答。 甘燕 吴少庭 秦莉 潘晖榕 戴五星 袁仕善 黄达娜关键词:SARS冠状病毒 DNA疫苗 百日咳杆菌毒素S_1亚单位与谷胱甘肽S-转移酶融合基因在大肠杆菌中表达及其一步纯化 被引量:2 1999年 研究了百日咳杆菌毒素S1亚单位与谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白(GST-S1)在大肠杆菌(E.coli)中的表达,并一步纯化了重组GST-S1。首先用聚合酶链反应(PCR)扩增出长度为560bp的编码百日咳毒素S1亚单位的DNA片段。该片段比原编码S1蛋白的DNA片段在其3′端缺失了138个碱基,将其按正确的阅读框克隆入质粒pGEX中GST基因的3′端,构成GST-S1融合基因表达载体pGEX-S1。经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),可见所表达的GST-S1融合蛋白存在于细菌上清,为可溶性蛋白。分子量为49ku处有明显的蛋白表达带。用谷胱甘肽(GSH)亲和层析系统,一步纯化出GST-S1融合蛋白。最后经凝血酶的消化,得到23ku的重组百日咳杆菌毒素S1亚单位蛋白。 郑波 程继忠 皇甫永穆 海涛 海涛 戴五星关键词:疫苗 日本血吸虫多价膜锚定表达疫苗pIRES-Sj97-sj14-Sj26的构建及其免疫原性的研究 血吸虫病是一种严重危害人类及家畜的寄生虫病,在74个国家大约2亿人受到不同程度的感染,6亿人受到潜在的威胁。据2001年调查,我国现有9千万人口受日本血吸虫病的威胁,有82.1万日本血吸虫病患者,其中慢性患者79.5万,... 刘朔婕 戴五星文献传递 SARS冠状病毒M蛋白全长基因的克隆、表达与纯化 被引量:3 2005年 目的克隆SARS冠状病毒M蛋白基因编码序列,构建原核重组表达质粒pET23a-M,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达、纯化。表达产物用Western Blot检测其抗原性。方法RT-PCR扩增M编码基因目的片段,胶回收纯化,插入克隆载体pMD-18T载体并转化大肠杆菌DH5α。序列测定后亚克隆至表达质粒载体pET23a,构建重组体pET23a-M,转化大肠杆菌DH5α。筛选阳性克隆,以限制性酶切分析鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3)以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。用SDS-PAGE与免疫印迹分析表达产物。结果PCR扩增出约675bp的特异性片段,与预期片段大小相符,测序鉴定无有义突变;所构建的pET23a-M重组体阳性克隆经PCR与双酶切鉴定,与预期结果一致;SDS-PAGE显示表达产物约27kD;表达产物经金属螯和层析纯化;免疫印迹表明表达产物能被混合的SARS病人恢复期血清识别。结论成功克隆了SARS冠状病毒M蛋白基因编码序列,构建了pET23a-M表达质粒,诱导表达并纯化出了SARS冠状病毒M蛋白,并以免疫印迹鉴定。本研究的成功为进一步进行SARS病毒诊断试剂与疫苗的开发奠定了基础。 雷明军 吴少庭 戴五星 秦莉 潘晖榕 袁仕善 黄达娜 高世同 张仁利 林绮萍关键词:SARS M蛋白 基因表达 蛋白纯化 免疫印迹 SARS冠状病毒E蛋白的表达与纯化 据WHO报道,严重急性呼吸综合征(Severe Acute Respiratory Syndrome, SARS)自2002年11月在中国广东被发现到2003年7月。已波及30多个国家和地区,给人类健康,社会稳定和经济发... 潘辉榕 戴五星 吴少庭文献传递 人结核杆菌热休克蛋白65重组卡介苗疫苗的构建、表达及鉴定 被引量:1 2004年 目的 构建人结核杆菌热休克蛋白 6 5 (HSP6 5 )重组卡介苗 (BCG)疫苗。方法 用PCR技术从BCG基因组中扩增出抗原 85B (Ag85B)的信号肽DNA序列 ,从 pCMV MTHSP 6 5质粒中扩增出HSP6 5全长基因。利用DNA重组技术将以上两个片段插入质粒 pBCG 2 10 0的人结核杆菌HSP70启动子下游 ,构建一个分泌型的原核穿梭表达质粒pBCG SP HSP6 5。利用电穿孔的方法将该质粒转入BCG中 ,经热诱导后 ,用SDS PAG电泳来观察其表达水平。利用Westernblot来检验HSP6 5的生物学活性。结果 酶切鉴定、PCR和测序分析结果表明 ,所克隆的信号肽DNA片段和热休克蛋白 6 5DNA片段与报道结果完全一致 ,重组体的连接方向正确 ,阅读框与预期完全一致。热诱导后 ,重组BCG表达的 6 5kD (1kD =0 992 1ku)蛋白占菌体总蛋白的 35 6 7% ,占裂解物上清总蛋白的 74 0 9% ,表明重组的HSP6 5基因能在BCG中高效表达 ,表达的蛋白大部分以可溶状态存在。通过Westernblot证实分泌的该蛋白能与结核杆菌HSP6 5的抗体特异性结合。结论 成功构建分泌型原核穿梭表达质粒pBCG SP HSP6 5 ,重组的HSP6 5基因能在BCG中高效表达 ,表达的HSP6 5具有生物学活性 ,重组BCG疫苗构建成功。 高红 戴五星 黄海浪 陈智浩 梁靓 程继忠 皇甫永穆关键词:HSP65 BCG 结核杆菌 重组卡介苗 重组体 重组SARS病毒M蛋白的免疫效应研究 被引量:1 2006年 目的检测SARS冠状病毒重组M蛋白疫苗诱导小鼠的免疫应答能力。方法PCR扩增M蛋白基因,构建至原核表达质粒pET-23a,pET-23a-M重组质粒转化BL21(DE3)宿主菌,诱导表达蛋白经SDS-PAGE、免疫印迹分析和纯化后免疫BALB/c小鼠,3次免疫后测定免疫功能,进行免疫效果评价。结果成功构建pET-23a-M重组质粒,转化宿主菌后诱导表达27 ku M蛋白。检测M蛋白免疫鼠体内有特异性抗体产生,抗体效价达1∶104;脾脏CD8+比例升高,CD4+/CD8+比值下降;免疫鼠血清IFN-γ和IL-4水平无显著变化。结论SARS病毒重组M蛋白疫苗能诱导BALB/c小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫应答。 甘燕 吴少庭 秦莉 雷明军 戴五星 袁仕善 黄达娜关键词:SARS冠状病毒 M蛋白 免疫效应 分泌型原核穿梭表达质粒pBCG-SP-HSP65的构建及其表达 用PCR技术从BCG基因组中扩增出抗原85B(Ag85B)的信号肽(SP)DNA序列,从pCMVMTHSP65质粒中扩增出人结核杆菌HSP65全长基因。利用DNA重组技术将以上两个片段插入质粒pBCG-2100的人结核杆... 戴五星 陈智浩 高红 黄海浪 梁靓 皇甫永穆关键词:信号肽 文献传递