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方玉珍

作品数：94 被引量：165H指数：7
供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划国际科技合作与交流专项项目更多>>
相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

合作作者

文献类型

  • 51篇期刊文章
  • 38篇专利
  • 3篇科技成果
  • 2篇会议论文

领域

  • 49篇农业科学
  • 11篇生物学
  • 3篇医药卫生

主题

  • 61篇病毒
  • 60篇口蹄疫
  • 43篇疫病
  • 43篇口蹄疫病毒
  • 30篇疫苗
  • 27篇免疫
  • 15篇灭活
  • 12篇灭活疫苗
  • 12篇活疫苗
  • 11篇毒株
  • 8篇引物
  • 8篇抗原
  • 8篇A型口蹄疫
  • 8篇病毒毒株
  • 7篇流行性
  • 7篇流行性腹泻
  • 7篇免疫效力
  • 7篇基因
  • 6篇猪流行性腹泻
  • 6篇免疫原性

机构

  • 94篇中国农业科学...
  • 19篇甘肃农业大学
  • 1篇南京农业大学
  • 1篇西北农林科技...

作者

  • 94篇方玉珍
  • 92篇张永光
  • 91篇王永录
  • 62篇潘丽
  • 61篇蒋守田
  • 58篇吕建亮
  • 45篇周鹏
  • 38篇刘新生
  • 35篇张中旺
  • 27篇刘力宽
  • 16篇杜进鑫
  • 13篇张昱
  • 13篇李正丰
  • 13篇张淑刚
  • 11篇张维德
  • 10篇丁耀忠
  • 10篇张杰
  • 8篇孙元
  • 8篇赵付荣
  • 8篇常惠芸

传媒

  • 12篇中国兽医科学
  • 10篇中国兽医科技
  • 5篇华北农学报
  • 3篇安徽农业科学
  • 3篇病毒学报
  • 3篇中国人兽共患...
  • 2篇微生物学报
  • 2篇浙江农业科学
  • 1篇中国动物保健
  • 1篇生物技术通报
  • 1篇江苏农业科学
  • 1篇江苏农业学报
  • 1篇微生物学通报
  • 1篇畜牧与兽医
  • 1篇中国人兽共患...
  • 1篇动物医学进展
  • 1篇甘肃农业大学...
  • 1篇畜牧兽医学报
  • 1篇中国畜牧兽医

年份

  • 1篇2021
  • 1篇2020
  • 5篇2019
  • 10篇2018
  • 5篇2017
  • 3篇2016
  • 10篇2015
  • 2篇2014
  • 5篇2013
  • 3篇2010
  • 12篇2009
  • 8篇2008
  • 2篇2007
  • 8篇2006
  • 6篇2005
  • 3篇2004
  • 2篇2003
  • 1篇1999
  • 1篇1998
  • 3篇1997
共 94 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
切流式超滤技术及其在病毒学研究中的应用被引量：1
1997年
切流式超滤技术及其在病毒学研究中的应用王永录张永光方玉珍蒋守田（中国农业科学院兰州兽医研究所７３００４６）超滤（ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）是借助于超滤膜或其他超滤装置对生物大分子物质进行分离、纯化及浓缩的一种技术。这一技术以物理方法对大分子物质...
王永录张永光方玉珍蒋守田
关键词：超滤技术病毒学纯化
口蹄疫病毒A型AF/72株衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及鉴定被引量：1
2015年
通过限制性酶切位点将P12A和3C基因插入到带有双启动子(Pp10和PPH)的杆状病毒表达载体p Fast BacTMDual,转化E.coli DH10感受态细胞进行蓝白斑筛选,将鉴定正确的重组杆状病毒质粒转染Sf9细胞后收获重组杆状病毒r Bac-Dual-P12A3C,通过间接免疫荧光(IFA)和蛋白质印迹(Western-blot)检测衣壳蛋白的表达。IFA结果表明表达产物能够被A型FMDV猪抗阳性血清所识别,鉴定正确并具有良好反应原性。Western-blot检测到81 k D(P12A)、57 k D(VP0+VP3)、47 k D(VP3+VP1)、33 k D(VP0)和24 k D(VP1/VP3)5条蛋白条带,与预期相符。该研究为进一步研究A型口蹄疫病毒空衣壳的体外组装提供了试验依据。
张庆勋刘新生方玉珍王永录张永光
关键词：口蹄疫病毒衣壳蛋白
A型口蹄疫病毒真核表达载体的构建及其在BHK-21细胞中的表达被引量：2
2013年
为了构建A型口蹄疫重组表达质粒,并鉴定其在BHK-21细胞中的表达效果及免疫活性,通过设计引物及酶切位点,获得A型口蹄疫毒株AF/72的P1,2A及3C编码区的目的基因片段,利用设计的BamHⅠ及XbaⅠ酶切位点,定向将片段克隆于真核表达载体pcDNA3.1(+),经筛选、鉴定及序列分析后,将重组阳性质粒pcDNA3.1/P12A3C转染BHK-21细胞,通过双抗体夹心ELISA方法、间接免疫荧光标记方法及电镜透射法,检测细胞中表达的蛋白。结果表明:目的片段正确克隆到pcDNA3.1真核表达载体上,转染BHK-21细胞后,几种方法都能够检测表达蛋白。由此得出结论,构建的A型pcDNA3.1/P12A3C重组质粒能够在BHK-21细胞中正确表达目的蛋白并能组装成病毒空衣壳,表达蛋白具有良好的免疫活性,为进一步研究该质粒的动物免疫试验奠定了基础。
胡文发张永光王永录张攀唐华方玉珍蒋守田吕建亮周鹏张中旺刘新生潘丽
关键词：口蹄疫病毒BHK-21细胞电镜
牛O型A型口蹄疫双价灭活疫苗研究──—A型毒种的选择被引量：5
1995年
收集保藏的６株口蹄疫（ＦＭＤ）Ａ型牛源强毒，适应乳鼠５代，转适８ＨＫ—２１细胞单层１０代，用弗氏完全佐剂制成疫苗免疫豚鼠。综合分析其对实验动物及制苗细胞的适应性、病毒感染性滴度、豚鼠抗强毒攻击的免疫原性、血清中和抗体应答的抗原广谱杜表明，在６株毒中ＡＦ／７２具有更好的适应性，病毒滴度高，免疫原性好，抗原谱广。
张永光刘在新方玉珍蒋守田魏怀录王永录况乾惕
关键词：口蹄疫灭活疫苗疫苗
口蹄疫病毒AF72株3D聚合酶的三维结构模拟和功能分析被引量：7
2008年
为了研究口蹄疫病毒(FMDV)3D聚合酶的结构和功能,以A型FMDV AF72株RNA为模板,反转录并扩增目的基因,将PCR纯化产物与pGEM-T Easy载体连接并转化JM109菌株,对经凝胶电泳、PCR和EcoRⅠ酶切法鉴定为阳性的重组质粒进行测序,并与GenBank中登录的其他4株FMDV完整参考序列进行比较,以确定AF72株3D聚合酶的核苷酸和氨基酸序列的保守区域,然后利用同源建模的方法建立AF72株3D聚合酶的三维结构。结果显示,3D聚合酶含有孔状活性区域。拉马钱德兰图证明,构建的3D聚合酶的空间结构是合理的。
张昱王永录张永光潘丽方玉珍刘力宽蒋守田吕建亮张中旺张淑刚李正丰杜进鑫
关键词：口蹄疫病毒活性位点
Asia 1型口蹄疫病毒多抗原表位真核表达质粒的构建及表达被引量：1
2013年
为了构建Asia 1型口蹄疫病毒多抗原表位真核表达质粒,采用多表位基因串联策略,合成包括口蹄疫病毒T细胞和B细胞表位基因的基因片段F,该基因片段由结构蛋白VP1上的2个B细胞表位(VP1135-159aa、VP1194-211aa)基因、非结构蛋白3A和3D上的T细胞表位(3A21-35aa、3D795-803aa)基因组成。利用限制性内切酶HindⅢ、XbaⅠ将基因片段F克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)。经酶切鉴定、序列分析正确后,利用LipofectamineTM2000将阳性重组质粒pc-F转染至BHK-21细胞。Western-blot和IFA分析结果显示,所表达的蛋白大小约25.4ku,能够与Asia 1型口蹄疫病毒标准兔抗血清发生特异性反应,证实所表达的蛋白具有较好的反应原性。结果表明,Asia 1型口蹄疫病毒多抗原表位真核表达质粒pc-F构建成功,且能在BHK-21细胞中正确表达。
张攀张永光王永录潘丽胡文发唐华方玉珍蒋守田吕建亮周鹏张中旺刘新生
关键词：ASIABHK-21细胞
口蹄疫O/China/99毒株在不同宿主系传代的3A和VP1基因变异研究被引量：4
2004年
利用RT-PCR法扩增了经不同宿主系(乳鼠、BHK21细胞、PK15细胞)连传不同代次的口蹄疫O/China/99毒株的3A和VP1基因,并进行了核苷酸和氨基酸序列分析。结果表明,该毒株经不同宿主系传至90代后,VP1基因未发生大的变异,主要抗原位点也较稳定;而非结构蛋白3A基因却在不同宿主和代次发生突变缺失;经BHK21细胞传代后未发生缺失;经PK15细胞传代,在70～90代之间在第254～313位出现缺失;经乳鼠传代,在60～70代之间在第265～300位发生缺失,并在以后的90代毒中仍在此位缺失。这与代表性猪源流行毒O/YUN/TAW/97和O/HKN/21/70的3A基因在第276～305位发生缺失有相同之处。
张永光吕建亮王永录方玉珍蒋守田张维德刘湘涛潘丽刘力宽裴仉福
关键词：VP1基因毒株非结构蛋白3传代代次口蹄疫
高浓度口蹄疫病毒抗原的稀释试验
2004年
用预备试验初选的 4种稀释剂a、b、c、d ,对经浓缩培养法繁殖的牛、猪O型口蹄疫病毒进行稀释 ,使其与普通毒 (对照 )浓度相当。然后将其与普通毒一起在不同温度下放置不同时间后 ,测定TCID50 ,并对测定结果进行方差分析和多重比较。结果显示 ,4种稀释剂稀释的病毒TCID50 存在显著差异 ;a和b稀释的病毒TCID50 之间无显著差异 ,但均显著高于c和d稀释的病毒TCID50 ;a和b稀释的病毒与普通对照毒的TCID50 也无显著差异。表明 ,a和b均可用于稀释口蹄疫病毒抗原 ,考虑到成本 ,宜选用b。
方玉珍王永录张永光蒋守田张维德
关键词：口蹄疫病毒稀释剂
一种猪简易固定器
本实用新型公开了一种猪简易固定器，其目的在于临时快速提供一种能够有效控制猪的行动，使其保持一定姿势，有利于兽医工作人员对猪进行体检，治疗以及采集血液，本实用新型所述固定器包括拉环、拉杆、拉绳和手柄，所述拉绳一端穿过所述拉...
林彤常惠芸邵军军赵付荣潘丽周鹏刘新生王永录方玉珍吕建亮张杰陈浩泰丁耀忠张中旺张永光
文献传递
猪德尔塔冠状病毒重组聚合酶扩增检测方法的建立与应用被引量：9
2019年
为了快速检测猪德尔塔冠状病毒(PDCoV),针对PDCoV N基因设计特异的引物,建立了猪德尔塔冠状病毒重组聚合酶扩增(RPA)方法。特异性试验中以PPRSV、PEDV、PKV、TGEV和FMDV为模板时均未产生任何条带,特异性较好。该检测方法的灵敏度为103 copies/μL,敏感性较好。用该方法检测194份仔猪腹泻样品,PDCoV阳性率为14.4%,较常规RT-PCR阳性率为11.9%更高。研究所建立的猪德尔塔冠状病毒RPA检测方法具有反应快速、操作简单、结果可靠、设备要求低等优点,可为基层简易实验室提供一种方便适用的快速检测方法。
肖帅刘新生方玉珍周鹏张永光王永录魏彦明
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