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内皮抑素和血管生成抑素融合基因修饰的单纯疱疹病毒对胶质瘤干细胞的体外实验研究被引量：4: 2011年; 目的探讨内皮抑素和血管生成抑素（Endo—Angio）融合基因修饰的单纯疱疹病毒（VAE）对胶质瘤干细胞（GSCs）的体外溶瘤作用。方法新鲜高级别（WHOⅢ级、Ⅵ级）人脑胶质瘤标本经原代培养获得GSCs，采用流式细胞术检测其中CD133阳性细胞数，单克隆形成实验检测GSCs的自我更新能力，免疫荧光技术检测未分化GSCs的Nestin及分化后GFAP、NF和MAG的表达；MTS法检测VAE对GSCs增殖活性的影响，RT—PCR和Western blot检测Endo—Angio融合蛋白的表达并检测其对人脑微血管内皮细胞（HBMEC）增殖的影响；最后观察病毒处理后仍存活细胞的自我更新和诱导贴壁情况。结果（1）从20例高级别胶质瘤标本中培养出4例GSCs，能够表达CD133及Nestin，具有自我更新能力和多向分化能力。（2）VAE能够感染GSCs，4例GSCs增殖活性明显下降（P〈0．05）。（3）VAE感染GSCs 48h后，基因水平及蛋白水平都有Endo—Angio融合蛋白表达，该融合蛋白使HBMEC增殖活性明显下降（P〈0．05）。（4）VAE感染后仍存活的细胞不再具有形成GSCs球的能力，加入血清诱导后也不再贴壁生长。结论在体外，VAE能够显著抑制GSCs活性，能够表达具有生物活性的Endo—Angio融合蛋白，为脑胶质瘤溶瘤病毒治疗开辟了新的途径。; 朱贵东刘福生苏伟金贵善柴奇; 关键词：内皮抑素类血管生成抑制剂

Smad2基因在人脑胶质瘤的表达及其临床意义被引量：2: 2011年; 目的探讨Smad2基因在人脑胶质瘤组织中的表达情况，与细胞增殖指数Ki一67及患者生存期的关系。方法对80例人脑胶质瘤组织标本，用免疫组化sP法检测Smad2、Ki一67的蛋白表达，逆转录聚合酶链反应法（RT—PCR）测定Smad2mRNA的转录水平。Smad2蛋白表达情况与患者生存期的关系用Kaplan—Meier生存曲线表示，并采用log—rank方法分析。结果（1）Smad2蛋白在高级别胶质瘤（Ⅲ级和Ⅳ级）中表达水平较低级别胶质瘤（Ⅱ级）明显增高（P〈0．001）。（2）Smad2mRNA在高级别胶质瘤（Ⅲ级和Ⅳ级）中转录水平较低级别胶质瘤（Ⅱ级）增高（P〈0．05）。（3）Smad2蛋白阳性表达与Ki-67阳性表达呈正相关（r=0．812，P〈0．001）。（4）将所有患者分为Smad2高表达组和低表达组，两组间生存率差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Smad2的转录和蛋白表达水平在恶性胶质瘤中显著增高，检测Smad2表达水平有利于脑胶质瘤的恶性程度判断及对患者预后的评估。; 苏伟朱贵东刘福生姜中利金贵善柴奇曹泽聂秀涛; 关键词：神经胶质瘤 SMAD2 免疫组织化学逆转录聚合酶链反应

溶瘤病毒治疗脑胶质瘤新进展被引量：9: 2010年; 胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发肿瘤，约占颅内原发肿瘤的45％。临床上按照组织学类型分为四级：Ⅰ级具有良性生物学行为；Ⅱ级呈低度恶性，经过手术、放疗和化疗等综合治疗后，其5年生存率为45％～60％；; 朱贵东刘福生; 关键词：脑胶质瘤病毒治疗溶瘤原发肿瘤生物学行为组织学类型

人脑胶质瘤中转化生长因子β_2、Smad3蛋白表达及临床意义被引量：4: 2011年; 目的探讨人脑胶质瘤组织中转化生长因子β2(TGF-β2)、Smad3蛋白表达水平与患者预后的关系。方法应用免疫组化SP法检测80例人脑胶质瘤组织TGF-β2、Smad3蛋白表达水平,并分析其与患者无进展生存期及总生存期的关系。结果 TGF-β2蛋白和Smad3蛋白在不同级别胶质瘤之间表达具有显著性差异(P<0.05),其表达与病理级别呈正相关(r=0.545,r=0.570,P<0.01)。将所有患者分为TGF-β2或Smad3高表达组和低表达组,其无进展生存期和总生存期均有显著性差异(P0.05)。结论 TGF-β2、Smad3蛋白表达与胶质瘤发生及恶性程度相关;检测两者表达情况可为脑胶质瘤的临床诊治及预后判断提供依据。; 苏伟刘福生朱贵东姜中利金贵善柴奇曹泽; 关键词：脑胶质瘤 SMAD3

VP22修饰的CD基因工程化神经干细胞治疗大鼠C6脑胶质瘤体外实验研究: 2009年; 目的探讨病毒蛋白VP22在胞嘧啶脱氨酶（cytosine deaminase，cD）基因工程化神经干细胞治疗大鼠C6胶质瘤中的作用。方法质粒pAdTrack-CMV-CD中PCR获取CD片段，克隆到慢病毒（1entivims）质粒pHIV-EGFP和pHIV-VP22-EGFP载体上，获得重组质粒pHIV—CD—EGFP和pHIV—VP22-CD—EGFP，采用酶切和PCR技术进行鉴定。病毒包装采用三质粒系统共同转染293T细胞。CD基因的表达采用逆转录一聚合酶链式反应（RT—PCR）方法鉴定。Lentivirus-EGFP、lentivirus-CD-EGFP、lentivirus-VP22-EGFP和lentivirus—VP22-CD-EGFP四种慢病毒感染经体外原代培养、扩增的sD大鼠胎脑神经干细胞（Nerualstem cells，NSCs），体外与C6细胞按1：1比例共培养，并加入终浓度100mg／L的5-氟胞嘧啶（5-FC）培养3d后，MTT比色法测定细胞存活率。结果酶切和PCR证实，重组的慢病毒中含有CD基因。慢病毒lentivims-EGFP、lentivims—CD—EGFP、lentivirus—VP22-EGFP和lentivirus—VP22-CD—EGFP分别感染NSCs后与C6细胞共培养，在5-FC作用下，其细胞存活率分别为（95．57±4．83）％，（49．96±7．19）％，（94．254-4．32）％和（28．064-6．26）％。统计学处理，转染lentivirus—CD—EGFP和lentivirus—VP22-CD—EGFP组的细胞存活率明显低于其相应对照组lentivirus—EGFP和lentivirus—VP22-EGFP（P〈0．01）；其中转染lentivirus-VP22-EGFP组的细胞存活率又明显低于lentivirus-EGFP组（P〈0．01）。结论VP22能够在体外增强CD基因修饰的NSCs抗C6胶质瘤疗效。; 金贵善刘福生柴奇苏伟朱贵东; 关键词：慢病毒载体神经干细胞 C6胶质瘤细胞

内皮抑素和血管生成抑素融合基因修饰的溶瘤病毒对胶质瘤干细胞的体外实验研究: 朱贵东; 关键词：人脑胶质瘤胶质瘤干细胞内皮抑素

慢病毒载体VP22-EGFP的构建及其对大鼠神经干细胞转染及表达的研究被引量：1: 2009年; 目的研究VP22穿梭蛋白对神经干细胞（neural stem cell，NSC）转染效率的影响。方法通过酶切质粒pUIA9ep获得VP2：片段后克隆到含有增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）的慢病毒（Lentivirus）pHIV-EGFP质粒载体上，并采用PCR及基因测序技术对VP22基因进行鉴定。病毒包装采用三质粒系统共转染293T细胞后感染经体外原代培养、扩增的SD大鼠胎脑NSC，荧光显微镜下观察EGFP在NSC中的表达，流式细胞仪检测EGFP的表达，PCR检测基因组中VP22-EGFP基因的表达，MTT法测定转染前后单纯NSC、含有EGFP及含有VP22-EGFP的NSC的增殖活性。结果PCR和DNA测序证实，外源基因VP22成功插入到质粒载体pHIV—EGFP的骨架结构中的启动子CMV和EGFP序列之间；荧光显微镜下均见有绿色荧光蛋白的表达；流式细胞仪测定结果：Lentivirus-EGFP及Lentivims-VP22-EGFP转染的NSC的EGFP的表达率分别为（23．1±1．8）％及（34．9±2．9）％（P〈0．01）；PCR结果显示VP22整合入NSC的基因组DNA中；MTr结果显示转染前后单纯NSC、含有EGFP及含有VP22-EGFP的NSC的细胞生长曲线无明显改变。结论VP22能够提高慢病毒对NSC的转染效率，且不影响其生长特性。表明VP22作为一种短链蛋白可以与编码的治疗基因形成融合蛋白增强基因治疗的疗效，在基因修饰的工程化干细胞中具有良好应用前景。; 金贵善刘福生柴奇苏伟朱贵东; 关键词：慢病毒载体转染效率神经干细胞

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朱贵东

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