李学荣
- 作品数：33 被引量：89H指数：4
- 供职机构：中山医科大学更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金广东省自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 恶性疟原虫传播阻断抗原Pfs25和Pfs48/45基因编码序列的体外扩增被引量：34
- 1998年
- 目的：体外扩增编码恶性疟原虫传播阻断抗原Pfs和Pfs48／45的基因序列，为进一步对其进行克隆和体外高效表达创造条件。方法：特定寡核苷酸引物的设计、合成与纯化；恶性疟原虫FCC1／HN株体外培养；利用碱裂解法从培养的恶性疟原虫FCC1／HN株提取染色体DNA；PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳分析。结果：从恶性疟原虫FCC1／HN株基因组DNA中特异扩增出编码Pfs25和Pfs48／45基因序列，其片段大小分别为657bp和1，359bp。而用间日疟原虫基因组DNA为模板作对照，无扩增条带出现。结论：体外扩增编码恶性疟原虫传播阻断抗原Pfs25和Pfs48／45基因序列与预期长度相符合，从而，为该基因的克隆、测序和表达奠定基础。
- 罗树红余新炳李学荣陈观今
- 关键词：恶性疟原虫
- T载体的构建及在恶性疟原虫RAP2基因克隆中的应用研究
- 2000年
- 目的 构建PCR产物高效克隆载体T载体 ,并应用于克隆恶性疟原虫RAP2基因。方法 PUC18用SmaI酶切纯化后 ,与dTTP在 70℃孵育 3h ,构建T载体。另设计一对特异引物 ,采用PCR方法从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中特异扩增RAP2基因 ,并将其克隆入T载体 ,重组克隆经蓝白斑初筛后 ,再用双酶切及PCR法进行鉴定。结果 从恶性疟原虫基因组DNA中特异扩增出大小为 12 15bp基因片段 ,与预期长度相符。克隆入T载体后的重组克隆经双酶切及PCR鉴定均正确无误。结论 成功构建T载体 ,并获得阳性重组克隆T -RAP2 。
- 李学荣余新炳单志新马长玲
- 关键词：恶性疟原虫T载体聚合酶链反应克隆
- 恶性疟原虫海南株STARP基因真核表达重组质粒的构建及基因结构分析被引量：1
- 2001年
- 目的 构建恶性疟原虫海南 (FCC1/HN)株STARP基因真核表达重组质粒pcDNA3-STARP ;分析STARP基因结构 ,并了解FCC1/HN株与其它分离株STARP基因序列的差异。方法 根据STARP基因已知序列设计合成两对引物 ,用PCR技术从FCC1/HN株基因组DNA中扩增两个部分序列重叠的STARP基因片段 ;将两基因片段分别双酶切后定向克隆入真核表达载体 pcDNA3 ,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞。酶切 ,PCR扩增鉴定筛选重组质粒阳性克隆 ;用双脱氧链末端终止法测序 ,应用软件辅助分析基因结构及进行同源性比较。结果 分别PCR扩增获得 10 78bp ,10 92bp的两个STARP基因片段 ;经双酶切及PCR鉴定表明获得正确重组质粒 ;恶性疟原虫FCC1/HN株与T9/ 96株STARP基因核苷酸序列同源性为 92 .2 % ;推测编码氨基酸序列同源性为 90 .9% ;在STARP蛋白中部重复区推测有多个明显的抗原表位区段。结论 从FCC1/HN株恶性疟原虫基因组DNA中获取STARP基因 ,并成功构建真核表达重组质粒pcDNA3-STARP ;FCC1/HN株与其它分离株STARP基因有高度的同源性。
- 单志新余新炳马长玲李学荣吴忠道方建民
- 关键词：恶性疟原虫重组质粒基因测序
- 核酸疫苗及其免疫机制研究被引量：36
- 2000年
- 李学荣余新炳
- 关键词：核酸疫苗免疫机制基因治疗转基因技术
- 恶性疟原虫MSP1_(19)与PfCMR基因的体外重组与克隆鉴定
- 1999年
- 目的：构建编码恶性疟原虫复合多价保护性抗原的基因的重组质粒，为进行基因免疫提供条件。方法：设计一对特异引物Ｐ１与Ｐ２，采用ＰＣＲ法扩增获取ＭＳＰ１中Ｃ端１９肽基因，纯化后用ＳａｌⅠ＋ＸｂａⅠ双酶切，把含复合基因ＰｆＣＭＲ的重组质粒ｐＷＲ４５０－１／ＰｆＣＭＲ用ＥｃｏＲⅠ＋ＳａｌⅠ双酶切，回收复合基因ＰｆＣＭＲ，将ＭＳＰ１１９基因与ＰｆＣＭＲ基因串联后与经ＥｃｏＲⅠ＋ＸｂａⅠ双酶切的真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３进行重组，转化大肠杆菌ＪＭ１０９，经电泳初筛、双酶切鉴定及ＰＣＲ鉴定。结果：ＰＣＲ扩增获得３６３ｂｐ的ＭＳＰ１１９基因，重组克隆经双酶切鉴定及ＰＣＲ鉴定后获得正确重组克隆子ｐｃＤＮＡ３－ＰｆＣＭＲ－ＭＳＰ１１９（命名为ｐｃＤＮＡ３－Ｐｆ８），Ｐｆ８基因长度为６１８ｂｐ。结论：成功构建编码恶性疟原虫多价保护性抗原的基因的重组质粒ｐｃＤＮＡ３－Ｐｆ８。
- 李学荣余新炳罗树红
- 关键词：恶性疟原虫核酸疫苗克隆
- 恶性疟原虫红内期p41-3基因真核表达重组质粒的构建及序列分析(英文)被引量：1
- 2001年
- 【目的】构建恶性疟原虫海南 (FCC1/HN)株 p41 3基因真核表达重组质粒pcDNA3 p41 3;测定p41 3基因序列 ,并了解FCC1/HN株与其它分离株 p41 3序列的差异。【方法】根据 p41 3基因已知序列设计合成 2对引物 ,用PCR技术从FCC1/HN株基因组DNA中扩增 p41 3基因 ;将p41 3基因定向克隆入真核表达载体 pcDNA3 ,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 ;用酶切 ,PCR扩增鉴定筛选到的重组质粒阳性克隆。以正确的重组质粒为模板 ,用双脱氧链末端终止法测定 p41 3基因序列 ,应用软件辅助分析p41 3序列及进行同源性比较。【结果】PCR扩增得到特异的FCC1/HN株 p41 3基因 ;正确的 pcD NA3 p41 3重组质粒被筛选和鉴定。测序表明 ,FCC1/HN株p41 3基因大小为 2 137bp ,编码 375个氨基酸。恶性疟原虫FCC1/HN株与FCBR株 p41 3基因核苷酸序列同性为 98.98% ,编码氨基酸序列同源性为 99.73%。【结论】从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中获取p41 3基因 ,成功构建真核表达重组质粒pcDNA3 p41 3,并测定了FCC1/HN株p41 3基因的序列 ;FCC1/HN株与其它分离株 p41
- 单志新余新炳李学荣马长玲陆家海徐劲
- 关键词：恶性疟原虫重组质粒真核表达
- 恶性疟原虫红内期PF332抗原基因未知片段的体外扩增与克隆
- 1999年
- 根据恶性疟原虫FCCI／NH株PF332基因片段5’端巳知序列，设计台成了一条特异引物(SP)；报据PF332基因的结构特点，又设计合成了一条非特异引物(NSP)。应用低严谨PCR技术(LSPCR)，从恶性疟原虫FCC1／FN株基因组DNA中扩增出一系列PF332基因未知片段。利用T-A克隆法将一560bp大小的片段克隆入测序用PMD-18T载体。限制性内切酶酶切及PCR扩增鉴定表明重组正确。
- 单志新余新炳李学荣方建民马长玲
- 关键词：恶性疟原虫红内期基因片段克隆
- 恶性疟原虫海南株膜抗原Pf7、Pfl2基因的体外扩增
- 1999年
- Pf7、Pfl2基因是恶性疟原虫红内期阶段虫体表面膜抗原。根据已知的Pf7、Pfl2基因序列．自行设计并合成引物。应用PCR技术，从恶性疟原虫海南株(FCCl／HN)基因组中特异扩增出Pf7、Pfl2基因，其片段太小分别约为800bp、1040hp，为进一步克隆、测序奠定了基础。
- 马长玲余新炳李学荣单志新方建民
- 关键词：恶性疟原虫抗原聚合酶链反应免疫原性
- RPMI-1640培养液加入VitC、庆大霉素体外培养恶性疟原虫效果观察
- 1999年
- 体外连续培养恶性疟原虫，观察培养液中加入VitC、庆大霉素对恶性疟原虫生长的影响。结果显示VitC、庆大霉素对恶性疟原虫的发育与繁殖影响不明显。
- 马长玲陆家海单志新李学荣
- 关键词：恶性疟原虫VITC庆大霉素血清
- 恶性疟原虫FCCI/HN株PfI2体外扩增、克隆及序列分析
- ＜正＞目的 构建恶性疟原虫FCC1/HN株Pf12基因原核表达质粒PET28 a Pf12测定Pf12基因序列,并为FCC1/HN株基因组DNA中扩增出pf12基因,扩增产物经纯化后,用BamHl+Xhol双酶切,定向克...
- 马长玲余新炳李学荣单志新吴忠道
- 关键词：恶性疟原虫聚合酶链反应DNA
- 文献传递
