汪国建
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
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- 鳖甲煎改良方对肝星状细胞生长及TGFβ1、Smad3与Smad7表达的影响被引量：4
- 2017年
- 目的探讨鳖甲煎改良方(modified turtle shell decoction,MTSD)对肝星状细胞T6(hepatic stellate cell T6,HSC-T6)TGFβ1、Smad3及Smad7表达的影响。方法用含生药量为0.71 g/ml的MTSD处理HSC-T6作为实验组,与MTSD剂量相同的鳖甲煎丸(turtle shell pills,TSP)处理的HSC-T6作为阳性对照组,常规培养的HSC-T6作为正常对照组,倒置显微镜下观察比较各组HSC-T6的形态变化。CCK-8检测各组HSC-T6细胞的生长情况,并绘制生长曲线;采用Real time-PCR、免疫荧光细胞化学及Western blotting技术分别检测各组HSC-T6的TGFβ1、Smad3及Smad7基因及其编码蛋白的表达变化。结果倒置显微镜下观察显示,与阳性对照细胞比较,MTSD处理48 h的HSC-T6,胞体变小,部分细胞死亡碎裂。CCK-8检测证实,MTSD对HSC-T6生长具有抑制作用,与2个对照组比较,MTSD处理的HSC-T6的生长减慢,从48 h开始差异具有统计意义(P<0.01)。Real time-PCR、免疫荧光细胞化学及Western blotting检测显示,MTSD能在m RNA及蛋白水平明显下调HSC-T6的TGFβ1、Smad3的表达,上调其Smad7的表达,与2个对照组相比,差异均具统计学意义(P<0.01)。结论 MTSD能有效抑制HSC-T6的生长,下调其TGFβ1、Smad3的表达,同时使Smad7的表达上调。MTSD抑制HSC-T6的生长可能与干扰TGFβ1/Smad3信号通路密切有关。
- 柏干苹张荣华闫国和汪国建万萍
- 关键词：HSC-T6TGFΒ1SMAD3SMAD7
- 鳖甲煎改良方含药血清对肝星状细胞增殖、周期及凋亡的影响被引量：2
- 2016年
- 目的探讨鳖甲煎改良方含药血清对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)-T6增殖、周期及凋亡的影响。方法分别用高剂量[28.4 g/(kg·d)]、中剂量[14.2 g/(kg·d)]与低剂量[7.1 g/(kg·d)]的鳖甲煎改良方及与鳖甲煎改良方高剂量相同剂量的鳖甲煎丸灌胃大鼠以制备含药血清。将等体积不同剂量的鳖甲煎改良方含药血清分别处理HSC-T6细胞,以等体积鳖甲煎丸含药血清处理的细胞为阳性对照组,生理盐水处理的细胞为空白对照组,正常大鼠血清处理的细胞为正常对照组。CCK-8检测不同处理组HSC-T6细胞的增殖情况,并绘制其增殖曲线;流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测经不同处理的HSC-T6细胞的周期,Annexin V-PI染色法检测其凋亡;在mRNA及蛋白水平分别检测经不同处理的HSC-T6细胞的增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)基因及其编码蛋白的表达变化。结果 CCK-8检测结果显示,鳖甲煎改良方含药血清对HSC-T6细胞增殖具抑制作用,高剂量与中剂量组的增殖速度慢于正常对照组、阳性对照组和空白对照组(P<0.05,P<0.01),且该抑制作用呈剂量-效应关系。FCM检测证实,鳖甲煎改良方含药血清可将HSC-T6细胞阻滞于S期,能诱导HSC-T6细胞的凋亡,与正常对照组比较,其凋亡诱导率差异具有统计学意义(P<0.01)。mRNA与蛋白水平检测结果显示,与空白对照组和阳性对照组比较,高剂量组能在基因与蛋白水平显著下调HSC-T6细胞PCNA的表达。结论鳖甲煎改良方含药血清能明显抑制HSC-T6细胞的增殖,诱导HSC-T6细胞的凋亡,并能下调其PCNA基因及其编码蛋白的表达。
- 张荣华闫国和汪国建粟永萍
- 关键词：HSC-T6细胞增殖细胞周期凋亡增殖细胞核抗原
- 慢病毒介导 shRNA 沉默鼠肝星状细胞 TGFβ1 对 α1Ⅰ型胶原表达的影响被引量：4
- 2014年
- 目的构建大鼠转化生长因子β1(transforming growth factor,TGFβ1)基因RNA干扰慢病毒载体,并观测其对大鼠肝星状细胞HSC-T6的TGFβ1基因沉默效应与对Ⅰ型胶原α1(alpha-1 typeⅠcollagen,Col1α1)表达的影响。方法针对大鼠TGFβ1基因CDs序列,筛选3个干扰靶点,合成其3对小干扰RNA(siRNA),将各对siRNA分别转入HSC-T6细胞,采用RT-PCR法从3对siRNA中筛选出最佳siRNA,设计并合成针对最佳siRNA靶序列的shRNA,退火形成双链,与载体pGreenPuro连接,构建pGreenPuro/TGFβ1 shRNA慢病毒载体,予以酶切与测序鉴定。pGreenPuro/TGFβ1 shRNA慢病毒载体经293细胞包装,将包装产生的高感染力的慢病毒颗粒感染HSC-T6细胞,倒置显微镜观察经感染的HSC-T6细胞的GFP表达情况,在mRNA与蛋白水平检测重组慢病毒pGreenPuro/TGFβ1 shRNA对HSC-T6细胞的TGFβ1基因的沉默效应及对Col1α1表达的影响。结果筛选到TGFβ1基因的最佳干扰靶序列。酶切与测序结果证实,构建pGreenPuro/TGFβ1 shRNA慢病毒载体成功。HSC-T6细胞经pGreenPuro/TGFβ1 shRNA慢病毒感染48 h后,RT-PCR检测未见TGFβ1基因表达,Col1α1基因较弱表达;Western blot检测显示TGFβ1、Col1α1蛋白表达均非常弱。结论成功构建大鼠TGFβ1基因RNA干扰慢病毒载体,该载体能有效沉默HSC-T6细胞的TGFβ1基因,并抑制Col1α1的表达。
- 张荣华闫国和汪国建粟永萍
- 关键词：转化生长因子Β1慢病毒载体
- 沉默转化生长因子β1对肝星状细胞-T6生长及增殖的影响
- 2014年
- 目的观察沉默转化生长因子β1(TGFβ1)对肝星状细胞(HSC)-T6生长及增殖的影响。方法用具有高效感染力的TGFβ1 shRNA慢病毒液感染HSC-T6细胞,以未经感染或经空病毒感染的HSC-T6细胞作对照。倒置荧光显微镜下观察HSC-T6细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达变化;CCK-8法检测TGFβ1 shRNA慢病毒对HSC-T6细胞生长及增殖的影响;RT-PCR和Western blotting分别检测HSC-T6细胞TGFβ1及增殖细胞核抗原(PCNA)基因及其编码蛋白的表达,并予以定量分析。结果经TGFβ1 shRNA慢病毒感染的HSCT6细胞显著表达GFP。CCK-8法检测结果显示:经TGFβ1 shRNA慢病毒感染的HSC-T6细胞的生长及增殖慢于对照细胞,培养48 h后差异有统计学意义(P<0.01)。RT-PCR和Western blotting检测结果显示:TGFβ1shRNA慢病毒能有效沉默HSC-T6细胞TGFβ1,并下调其核抗原PCNA基因及其编码蛋白的表达,与对照细胞的差异有统计学意义(P<0.01)。结论沉默TGFβ1能明显抑制HSC-T6的生长及增殖,并下调其核抗原PCNA的表达。
- 张荣华闫国和汪国建粟永萍
- 关键词：转化生长因子Β1增殖细胞核抗原增殖
