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温晓芳
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1
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供职机构:
浙江大学医学院附属第一医院
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发文基金:
江苏省高校自然科学研究项目
江苏省自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
姜云水
浙江大学医学院附属第一医院
汪明珊
徐州医学院附属医院
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浙江大学医学院附属第一医院
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浙江大学医学院附属第一医院
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2009
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基因1b型不同准种株HCV核心蛋白原核表达质粒pTrc-CKS构建及诱导表达
2009年
目的为研究与不同准种HCV核心蛋白(Core)相互作用的细胞蛋白质组,构建并表达基因1b型的不同准种Core的原核表达质粒pTrc-CKS。方法用聚合酶链反应(PCR)扩增并获得等长度片段的基因1b型的不同准种株丙型肝炎病毒(HCV)Core基因,氨基酸(aa)长度分别为癌中心株(T):1~172 aa、癌旁株(NT):1~172 aa及C191(HCV-J6):1~172 aa。扩增产物用BamHⅠ及EcoRⅠ双酶切后插入到原核表达质粒pTrc-CKS中。阳性克隆转化到大肠埃希菌Top 10F’中,异丙基-β-D-S-代半乳糖苷(IPTG)诱导表达获得融合蛋白CKS-Core-His,经Ni2+10F’柱纯化并经Westernblot验证。结果PCR及双酶切验证表明3个基因为1b型的不同准种Core基因成功构建到原核质粒pTrc-CKS中,体外诱导并获得了相应的融合蛋白。结论构建不同准种Core基因的原核表达质粒获得成功,体外诱导表达并纯化获得了CKS-Core-His融合蛋白,为后续研究与Core相互作用的细胞蛋白质组奠定了基础。
汪明珊
颜学兵
周林福
侯晓丽
李杨霞
温晓芳
姜云水
陈智
关键词:
丙型肝炎病毒
核心蛋白
质粒构建
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