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DKPs对解淀粉芽孢杆菌Q-426抗菌活性物质基因表达量的影响: 2012年; 目的:解淀粉芽孢杆菌Q-426在其生长过程中能够产生芬枯草菌素、依枯草菌素、枯草杆菌素等多种脂肽类抗菌物质。利用实时荧光定量PCR的方法考察细菌群体感应信号分子二酮哌嗪类化合物(diketopiperazines,DKPs)对脂肽类抗菌物质合成的调控作用。方法:当Q-426菌进入对数生长期中期,向发酵液中加入终浓度为5 mg/L的DKPs,并继续培养至48 h,并利用实时荧光定量PCR的方法进行抗菌物质mRNA表达水平的定量分析。结果:二酮哌嗪类化合物能够抑制抗菌活性物质相关基因的表达。; 熊文杨学敏王建华权春善范圣第; 关键词：抗菌活性

丙氨酸肽脂的合成与脂质体制备被引量：1: 2015年; 以十六酸、十六烷基胺、Boc保护丙氨酸、6-溴己酰氯、三甲胺为主要原料,通过EDC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺)缩合、氢化锂铝还原酰胺形成胺等反应合成丙氨酸肽脂,最终得率为39.9%,高分离温度(35℃)可提高产物得率。丙氨酸肽脂不需要胆固醇与辅助类脂可独立形成脂质体,通过激光粒度仪、透射电子显微镜进行初步检测,脂质体平均粒径为97.4±15.5nm,表面电位为+63.53±1.53 m V。; 姜强刘宝全熊文王剑锋范圣第; 关键词：脂质体

RF克隆结合巢式PCR构建金黄色葡萄球菌组氨酸蛋白激酶AgrC表达载体被引量：3: 2014年; AgrC蛋白是位于金黄色葡萄球菌细胞膜上的组氨酸激酶,能够感受细胞外的化学信号并将信号传递到细胞内,进而调控细胞内与致病性相关的一系列基因的表达。利用无限制克隆法(RF克隆),并结合巢式PCR成功构建了AgrC表达载体pET-28a-AgrC。将表达载体电转入大肠杆菌中,并利用IPTG进行诱导表达AgrC蛋白。再经过低温超高压破碎、超高速离心、金属螯合层析与尺寸排阻层析等过程,分离纯化得到AgrC蛋白。; 陆路熊文张钰琨王丽娜权春善范圣第; 关键词：金黄色葡萄球菌巢式PCR

不同电性脂质体对金黄色葡萄球菌组氨酸激酶AgrC跨膜镶嵌效率的影响被引量：5: 2014年; 通过改变脂质体中磷脂成分，构建了不同电性的脂质体。利用表面活性剂介导方法，将截短的金黄色葡萄球菌细胞膜上的组氨酸激酶AgrC（ AgrCTM6-7C ）蛋白重构到不同电性的脂质体上。结果表明，阴离子脂质体对AgrCTM6-7C蛋白的镶嵌效率明显高于阳离子脂质体，约60%~70%镶嵌至阴离子脂质体中的AgrCTM6-7C蛋白的细胞质域朝向脂质体囊泡的外部，并保持较高活性。利用圆二色光谱比较了AgrCTM6-7C蛋白在表面活性剂胶束和脂质体中的二级结构稳定性，发现阴离子脂质体对AgrCTM6-7C蛋白的二级结构具有一定的保护作用，可明显提高蛋白的热稳定性。; 熊文权春善王丽娜张旭宁赵晶郑维范圣第; 关键词：金黄色葡萄球菌脂质体膜蛋白

金黄色葡萄球菌双组分系统反应调节蛋白AgrA的原核表达、纯化及活性鉴定被引量：2: 2015年; AgrA作为金黄色葡萄球菌双组分信号转导系统(two-component signal transduction system,TCST)的反应调节因子,能调控细菌毒力因子的表达,在金黄色葡萄球菌致病过程中起着重要的作用。采用无限制克隆法构建AgrA表达载体,在AgrA蛋白的C端融合绿色荧光蛋白(GFP)标签,通过实时监测GFP的荧光强度来快速检测重组蛋白的表达水平。首先利用单因素实验,筛选出宿主菌株BL21-(DE3)-PlysS;其次,结合Box-Behnken试验设计,筛选出最优蛋白质表达条件:诱导时间为22h、转速为222r/min、诱导剂浓度为0.5mmol/L,AgrA产量达到5.56mg/L。最后,基于AgrA蛋白LytTR区域的非放射性凝胶阻滞实验(non-radioactive electrophoretic mobility shift assay,EMSA)验证了AgrA的生物活性。提出了反应调节蛋白AgrA在大肠杆菌高效可溶性表达的策略,为双组分信号转导系统的体外研究奠定基础,也为其他反应调节蛋白的可溶性表达与分离纯化提供了一个可行借鉴。; 张旭宁权春善廖颖玲柳科欢熊文范圣第; 关键词：金黄色葡萄球菌 GFP EMSA

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