王瑾
- 作品数：9 被引量：58H指数：5
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程农业科学更多>>
- 宇佐美曲霉木聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达与优化被引量：5
- 2007年
- 从宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001中克隆木聚糖酶基因xynⅡ,将不含原酶信号肽编码序列的xynⅡ以正确的读码框克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a中,构建成重组质粒pET-Xn并转化大肠杆菌,得到重组工程菌KN21。通过对其进行IPTG浓度、温度等诱导培养条件的优化后,胞内重组木聚糖酶活力最高达到81.77U/mg。对重组木聚糖酶进行酶学性质研究,显示其最适温度为45℃,最适pH为4.5。
- 白剑宇周晨妍王瑾邬敏辰
- 关键词：木聚糖酶宇佐美曲霉大肠杆菌重组蛋白
- 产酸性果胶酶菌株的筛选及产酶条件的研究被引量：4
- 2006年
- 从实验室保藏的9株黑曲霉菌株和1株宇佐美曲霉菌株中,通过初筛和复筛获得了一株高产酸性果胶酶菌株—宇佐美曲霉(Aspergillususamii)YL-1。YL-1菌株产酶发酵条件为:29℃静置培养72h,期间在24h翻曲1次。采用单因素试验确定了该菌株固态发酵优化培养基组成为:250mL锥形瓶装发酵基料10g(麸皮8g+豆饼粉2g),食用果胶0.9g,玉米浆0.5mL,吐温-800.15%,(NH4)2SO42.0%,KH2PO40.4%(均相对于基料),料水比1∶1,自然pH。酸性果胶酶活力最高达4831IU/g干曲。
- 邬敏辰方诗月王瑾
- 关键词：固态发酵
- 真空微波诱变结合化学诱变选育酸性纤维素酶高产菌株被引量：1
- 2009年
- 以酸性纤维素酶产生菌绿色木霉(Trocjpderma)wL 0512作为原始出发菌株,首先经自然分离筛选出一株产酶较稳定的菌株TVN-18,其羧甲基纤维素酶活(CMC酶活)达2765.8 U/g,滤纸酶活(FPA酶活)达48.5 U/g。再经真空微波和甲基磺酸乙酯(EMS)逐级诱变处理,获得了一株高产、稳产酸性纤维素酶的E6-1菌株,其CMC酶活达4396.6 U/g,FPA酶活达126.0 U/g,分别是菌株TVN-18的1.59倍和2.60倍。通过对固态发酵培养基麸皮和稻草比例、料水比以及初始pH值的优化,突变株的产酶能力进一步得到提高,其产的CMC酶活和FPA酶活分别提高了22.3%和22.4%。
- 王瑾邬敏辰张树飞
- 关键词：纤维素酶绿色木霉EMS处理
- 宇佐美曲霉木聚糖酶基因xynⅡ在不同毕赤酵母中的分泌表达被引量：6
- 2008年
- 将宇佐美曲霉E001的内切-1,4-木聚糖酶基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,得到重组质粒pPXY-NII,将其经SalⅠ线性化后分别转化2株毕赤酵母GS115和KM71,xynⅡ基因通过同源重组被整合到毕赤酵母染色体上,并处于酵母α因子的下游,经筛选获得阳性重组菌PXGL98(Mut+)和PXKL29(Muts)。该木聚糖酶基因在2株毕赤酵母中均实现了分泌表达。同时对工程菌的发酵条件进行了优化,在甲醇诱导下,PXGL98与PXKL29培养物上清液中的酶活力分别可达1156.92 U/mL和1646.03 U/mL。
- 周晨妍邬敏辰李东峰王瑾王武
- 关键词：宇佐美曲霉毕赤酵母分泌表达
- 圆弧青霉BD26碱性脂肪酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：6
- 2008年
- 采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR),以圆弧青霉BD26总RNA为模板,扩增出774 bp cDNA片段,将该基因片段克隆到表达载体pET-28a(+)上并转化Escherichia coil BL21(DE3),得到重组菌株BL21/ Lip PD。经IPTG诱导,菌体在固体琼脂显色平板上形成明显透明圈。SDS-PAGE电泳显示该脂肪酶分子质量约为27 ku。表达条件优化结果表明,当工程菌培养至OD_(600)为0.5时,加入IPTG至终浓度为1.0 mmol/L,在32℃诱导培养1 h,比酶活达29.30 U/mg。
- 邓珊珊邬敏辰李江华周晨妍王瑾
- 关键词：碱性脂肪酶克隆原核表达
- 果胶酶生产及其在苹果汁澄清中的应用被引量：11
- 2006年
- 对黑曲霉(Aspergillus niger)LLW-1菌株固态发酵生产酸性果胶酶的发酵培养基组成和发酵条件以及利用果胶酶澄清苹果汁的工艺条件进行了研究。固态发酵产酶条件为:250 mL三角瓶装10 g基料(豆饼∶麸皮=2.0 g∶8.0 g),(NH4)2SO420 g/kg,Tween-80 1.5 g/kg,玉米浆50 mL/kg,KH2PO43.0 g/kg,CaCl21.0 g/kg,MgSO4.7H2O 1.0 g/kg(均相对于基料),料水比1∶1.2,自然pH;31℃静置培养72 h,期间在为24 h翻曲1次,果胶酶活力达2 418 IU/g(干曲)。酸性果胶酶澄清苹果汁的工艺条件为:果汁自然pH值,果胶酶用量500IU/L(果汁),明胶添加量0.05 g/L(果汁),酶解温度和时间分别为45℃和1 h。
- 邬敏辰王瑾刘月卜静
- 关键词：固态发酵正交试验苹果汁
- 内切葡聚糖酶基因在大肠杆菌与毕赤酵母中的表达被引量：18
- 2008年
- 根据绿色木霉(Trichoderma viride)WL 0422菌株内切葡聚糖酶基因egⅡ的cDNA序列,设计特异引物,以重组质粒pTG19-T-egⅡ为模板,扩增得到全长1 194bp的egⅡ成熟肽cDNA片段。将该片段分别克隆到大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pET-28a(+)和毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPIC9K中,并在大肠杆菌Rosse(t DE3)和毕赤酵母GS115中进行了表达。重组大肠杆菌表达蛋白占菌体总蛋白的15%,表达产物无内切葡聚糖酶活性。重组毕赤酵母经甲醇诱导实现了分泌表达,在摇床水平上酶活性达到2 788U/ml。酶学性质分析表明,该酶作用的最适pH为4.5,pH 3.5～6.0范围内酶活性保留在80%以上;最适温度为50℃,55℃以下酶的稳定性在90%以上。
- 王瑾邬敏辰周晨妍
- 关键词：绿色木霉内切葡聚糖酶大肠杆菌毕赤酵母酶学性质
- 编码草菇中性内切葡聚糖酶Ⅰ的基因克隆与表达研究被引量：2
- 2008年
- 采用RT-PCR法,以草菇Volvariella.volvacea V23总RNA为模板,克隆了包括自身信号肽在内的中性内切葡聚糖酶Ⅰ基因(egⅠ)的cDNA序列。测序结果表明,它全长1167 bp,编码389个氨基酸,推测第1～23位氨基酸为信号肽,第24～389位氨基酸为成熟肽,属于糖苷水解酶第5家族。PCR扩增成熟肽编码基因并将其插入到分泌型表达载体pPIC9K中,重组载体经SalⅠ线性化后电转化毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,筛选得到了1株高产中性内切葡聚糖酶Ⅰ的工程菌株P.pastoris-EGⅠ1。SDS-PAGE检测表明,重组中性内切葡聚糖酶Ⅰ分子质量约为42 ku。在甲醇诱导96h时,酶活达到3 698 U/mL。
- 王超凯李剑芳司晨妍王瑾孙军亭邬敏辰
- 关键词：草菇毕赤酵母分泌表达
- 木聚糖酶固态发酵培养基的优化被引量：7
- 2006年
- 采用单因素试验和正交试验对宇佐美曲霉（Aspergillus usamii）YW-38菌株产木聚糖酶的固态发酵工艺条件进行了研究。结果表明，三角瓶优化培养基及发酵条件为：250mL三角瓶装8．0g基料（m（麸皮）;m（玉米芯）=3.5：4.5），NH4NO310g／kg，Tween-80 3g／kg，KH2PO43．0g／kg，CaCl21．0g／kg，MgSO4·7H2O1.0g／kg（均相对于基料），基料与自来水的质量比为1：1．3～1：1,4，pH自然；于29C培养72h，期间翻曲2次，此工艺条件下最高比酶活力为8752 IU／g。曲盘发酵工艺条件为：基料与自来水的质量比1：1．8，其余成分同三角瓶优化培养基，29℃培养68h，比酶活力可达8761IU／g。
- 邬敏辰王瑾杨书艳李剑芳
- 关键词：宇佐美曲霉木聚糖酶固态发酵正交试验酶活力
