陈永坤
- 作品数：18 被引量：71H指数：5
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家科技重大专项艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 中国职业暴露人群感染H9N2禽流感病毒血清学调查被引量：22
- 2015年
- 目的评估我国职业暴露人群感染H9N2禽流感病毒的风险因素。方法利用2009 2011年间在我国22个省(直辖市、自治区)采集的职业暴露人群血清13 715份,筛选了在我国主要流行的G9系毒株A/Chicken/AK4/Anhui/2011作为检测抗原,使用血凝抑制方法初筛和微量中和方法复核两种血清抗体检测方法,在我国大陆地区开展系统的H9N2禽流感病毒血清学研究。结果 H9N2禽流感病毒在中国职业暴露人群的中和抗体血清阳性率为0.41%(63份阳性血清标本)。所有家禽职业暴露人群均有阳性血清标本检出,活禽市场暴露人群感染H9N2禽流感病毒风险显著高于其他职业暴露人群。结论活禽市场是人感染禽流感病毒的重要暴露风险因素。加强H9N2禽流感病毒在我国职业暴露人群的监测,对于有效评估和防控禽流感对人类的危害具有重要的意义。
- 辛丽白天周剑芳唐静陈永坤陈涛史景红李晓丹李燕朱闻斐高荣保王大燕舒跃龙
- 关键词：禽流感H9N2职业暴露人群血清学调查
- 2015-2016年度中国甲型H1N1亚型流感病毒疫苗候选株的制备及鉴定
- 2017年
- 目的 为获得2015-2016年度中国流行的甲型H1N1亚型流感病毒疫苗候选株,制备流感病毒重配株并对其进行鉴定.方法 采用经典重配的方法,将H1N1亚型流感病毒流行株与H3N2亚型的鸡胚高产重配母本株（X-157株）在鸡胚上进行混合培养.用H3亚型的HA蛋白抗血清和X-157株全病毒抗血清对混合培养病毒进行阴性筛选.阴性筛选后HA滴度较高的病毒用Real-Time PCR法对表面蛋白基因型进行鉴定.对表面蛋白基因型正确的毒株用限制性内切酶酶切鉴定法鉴定其内部基因组成.进一步对HA和NA基因进行Sanger法测序,并用表面基因无氨基酸位点突变的毒株免疫雪貂,进行双向血凝抑制（Two-way hemagglutination inhibition test,HI）试验.结果 Real-Time PCR筛选出5株表面蛋白基因型正确的毒株.经内部基因鉴定其中4株为6＋2组成,1株为5＋3组成.5株重配株的HA和NA基因均未发生氨基酸位点突变.5株重配株HA滴度均维持在1 024以上.最终选取的12号重配株免疫原性良好,HI滴度达5 120,双向HI试验均通过.重配后疫苗株在鸡胚上的产量是重配前野毒株的64倍.结论 成功制备了2015-2016年度中国流行的甲型H1N1亚型流感病毒疫苗株,为疫苗贮备和疾病防控奠定了基础.
- 唐静辛丽李晓丹陈永坤郭俊峰黄维娟成艳辉王大燕舒跃龙
- 关键词：流感病毒A型H1N1亚型流行株
- 禽流感病毒H5N1血凝素基因和神经氨酸酶基因在真核酵母菌中的表达被引量：2
- 2011年
- 目的克隆、表达和鉴定禽流感病毒H5N1血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶基因(neuramidinase,NA)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。方法在成功克隆禽流感病毒H5N1全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pMET A上,构建了重组表达质粒pMET A/HA(49～1 587 bp)、pMET A/NA(121～1 200 bp),电转化真核酵母菌pMAD16,甲醇诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果重组蛋白在酵母菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示蛋白表达后形成了二聚体,蛋白纯度占总蛋白的95%以上,ELISA和Western Blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。结论本研究成功克隆和表达了禽流感病毒H5N1 HA、NA基因序列,为禽流感病毒H5N1诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究提供了依据。
- 邹淑梅于在江张烨辛丽陈永坤陈禹保陈清轩舒跃龙
- 关键词：血凝素神经氨酸酶
- 与H7N9禽流感易感性相关的标记物及其应用
- 本发明涉及生物技术领域，具体公开了一种与H7N9禽流感易感性相关的标记物及其应用，本发明采用病例对照研究方法，从人全基因组水平研究与H7N9禽流感易感性相关的宿主基因，发现17个人MX1基因编码区的稀有变异与人感染H7N...
- 舒跃龙陈永坤王大燕朱闻斐杨磊
- 干扰素诱导的跨膜蛋白抗病毒作用的研究进展被引量：9
- 2016年
- 干扰素诱导的跨膜蛋白(Interferon-induced Transmembrane Proteins,IFITMs)是20世纪80年代发现的一种宿主限制因子蛋白,1996年发现该蛋白具有抗病毒作用,目前该蛋白的抗病毒作用及其作用机制已成为研究热点。研究表明IFITM能抑制多种病毒的复制,包括甲型流感病毒、人类免疫缺陷病毒-1、丙型肝炎病毒、埃博拉病毒和西尼罗病毒等。IFITM蛋白主要在病毒生命周期的早期,即病毒进入细胞质之前,发挥抑制病毒复制的作用。近来的研究表明,IFITM蛋白通过影响病毒包膜与内涵体膜的融合抑制病毒复制,但具体机制尚不明确。本文对IFITM的发现、结构、抗病毒作用以及潜在的作用机制进行了综述。
- 陈永坤朱闻斐舒跃龙
- 关键词：抗病毒作用
- 流感病毒H3N2血凝素基因和神经氨酸酶基因在真核酵母菌中的表达
- 2010年
- 目的克隆、表达和鉴定流感病毒H3N2血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶基因(neuramidinase,NA)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。方法在成功克隆流感病毒H3N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pMET A上,构建了重组表达质粒pMET A/HA(52 bp～1 549 bp)、pMET A/NA(121 bp～1 260 bp),电转化真核酵母菌pMAD16,甲醇诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果重组蛋白在酵母菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示蛋白表达后形成了二聚体,蛋白纯度占总蛋白的95%以上,ELISA和Western Blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。结论本研究成功克隆和表达了流感病毒H3N2 HA、NA基因序列,为流感病毒H3N2诊断试剂和疫苗开发等进一步研究奠定了基础。
- 李梓张烨唐启慧陈禹宝于在江辛丽陈永坤陈清轩舒跃龙
- 关键词：血凝素神经氨酸酶酵母菌
- 禽流感病毒H9N2血凝素基因和神经氨酸酶因在大肠杆菌中的表达
- 2010年
- 克隆、表达和鉴定禽流感病毒H9N2 HA,NA基因序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。在成功克隆禽流感病毒H9N2全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重组表达质粒pET32a(+)/HA(截短)、pET32a(+)/NA(截短)、pGEX4T-1/HA、pGEX4T-1/NA,转化大肠杆菌BL21/rosetta,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱和GSTrap4B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western Blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致。ELISA和Western Blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。本研究成功克隆和表达了禽流感病毒H9N2 HA、NA基因序列。为禽流感病毒H9N2诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础。
- 张烨于在江辛丽陈永坤唐启慧陈禹保陈清轩舒跃龙
- 关键词：血凝素神经氨酸酶克隆表达
- 与H7N9禽流感易感性相关的标记物及其应用
- 本发明涉及生物技术领域，具体公开了一种与H7N9禽流感易感性相关的标记物及其应用，本发明采用病例对照研究方法，从人全基因组水平研究与H7N9禽流感易感性相关的宿主基因，发现17个人MX1基因编码区的稀有变异与人感染H7N...
- 舒跃龙陈永坤王大燕朱闻斐杨磊
- 文献传递
- 季节性流感疫苗株制备技术平台的建立被引量：3
- 2015年
- 目的 在国家流感中心建立经典重配技术平台,使我国具备制备季节性流感疫苗株的能力.方法 我国甲型H1N1流感病毒的代表毒株A/四川/1/2009与母本毒株X157重配,经3轮血清筛选以获得鸡胚高产疫苗候选株.结果 经鉴定,重配毒株的表面基因HA和NA均来自野毒株,内部基因M和NP来自母本毒株.重配株的血凝效价为1024,抗原性分析表明重配株与野毒株无抗原性差异.结论 重配毒株为鸡胚高产株,为我国自主研发季节性流感疫苗株奠定了基础.
- 辛丽鲁健陈永坤唐静郭俊峰王大燕舒跃龙
- 关键词：流感病毒A型流感流感疫苗
- 禽流感病毒H5N1血凝素基因和神经氨酸酶基因在大肠杆菌中的表达
- 2010年
- 目的:克隆、表达和鉴定禽流感病毒H5N1血凝素基因(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶基因(neuram idinase,NA)序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。方法:在成功克隆禽流感病毒H5N1全长HA、NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重组表达质粒pET32a(+)/HA(49～1587bp)、pET32a(+)/NA(121～1141bp)、pGEX4T-1/HA、pGEX4T-1/NA,转化大肠杆菌BL21/rosetta,IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱和GSTraP4B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果:重组蛋白在大肠杆菌中可以高效达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致,蛋白纯度占总蛋白的90%以上。ELISA和Western blotting实验证实,重组蛋白具有良好的抗原性。结论:成功克隆和表达了禽流感病毒H5N1HA、NA基因序列,为禽流感病毒H5N1诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础。
- 邹淑梅于在江张烨辛丽陈永坤唐启慧陈禹保陈清轩舒跃龙
- 关键词：血凝素神经氨酸酶克隆表达
