马琳琳
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
- 供职机构：厦门大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 抗Rab39A多克隆抗体的制备检测及Rab39A相互作用蛋白的筛选鉴定
- Rab/Ypt/Sec4家族是RaS超家族中重要的一类小分子GTP酶,在调控细胞内膜泡运输途径方面发挥重要的作用。Rab39是Rab家族中的新发现的蛋白,包含两个亚型:Rab39A和Rab39B,两者分别定位于11号染色...
- 马琳琳
- 关键词：抗体制备酵母双杂交多克隆抗体免疫荧光
- 应用酵母双杂交筛选Rab39A相互作用的蛋白
- 2013年
- 目的:应用酵母双杂交方法,寻找可能与Rab39A相互作用的蛋白。方法:采用醋酸锂转化法将诱饵蛋白Rab39A转入AH109酵母菌,Western blotting检测蛋白表达情况,检测诱饵载体有无毒性和自激活能力,筛选出的蛋白通过免疫荧光法进一步验证。结果:获得12个与Rab39A相互作用的候选蛋白,免疫荧光法证明Rab39A与ATRN、TIFA、ITGB1蛋白确实存在互作关系。结论:筛选出的蛋白主要与细胞生长、肿瘤细胞形成有关,为Rab39A功能的研究提供了重要线索。
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- 关键词：酵母双杂交蛋白质相互作用自激活共定位
- Rab39A多克隆抗体的制备与鉴定
- 2013年
- 制备抗人Rab39A多克隆抗体并进行纯化检测,以用于Rab39A功能的研究.选取免疫原性强且特异性高的羧基端42个氨基酸(176～217aa)作为目的片段.PCR法扩增并构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Rab39C42.异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并纯化GST-Rab39C42融合蛋白,免疫新西兰兔,制备多克隆抗体.然后以亲和层析法纯化抗体,利用Western blot和免疫荧光检测抗体的特异性.结果表明,构建的原核表达载体经IPTG诱导后高效表达GST-Rab39C42蛋白,纯化后抗体质量浓度为1μg/μL;Western blot实验显示,抗体可以识别外源Rab39A蛋白和多个细胞系的内源Rab39A蛋白;抗体中和实验和RNA干扰实验证明了该抗体具有特异性.本研究成功构建了pGEX-4T-1-Rab39C42原核表达载体,并制备了特异性的抗人Rab39A兔多克隆抗体,为进一步研究Rab39A的功能提供了有力的支持.
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- 关键词：原核表达多克隆抗体
