黄亚红
- 作品数：67 被引量：156H指数：8
- 供职机构：南京大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省水产三项工程项目农业科技跨越计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学历史地理更多>>
- 人缺失型Midkine重组蛋白的纯化及多克隆抗体的制备
- 2010年
- 目的获得兔抗人缺失型Midkine(t MK)的多克隆抗体,并将其初步应用于临床检测。方法将人t MK蛋白经亲和层析法纯化,并将其作为抗原免疫新西兰大白兔,获得兔抗人血清,经饱和硫酸铵纯化,获得初步纯化的兔抗人t MK多克隆抗体,用免疫组织化学和蛋白印迹(Western blot)试验检测抗体的灵敏度和特异性。结果获得初步纯化的兔抗人t MK特异性多克隆抗体,该抗体能识别天然人t MK蛋白。结论制备的t MK多克隆抗体可初步用于临床检测。
- 王庆苓黄亚红侯亚义
- 关键词：多克隆抗体
- 不同环境因素对克氏原螯虾后代幼虾生长状况的影响被引量：2
- 2022年
- 为研究克氏原螯虾亲虾受干旱胁迫和生境影响后,其子代生长表现是否存在差异,以及这种差异在不同饲养模式下的表现,对亲虾进行不同生境下的干旱处理(人工塑料池内干旱胁迫10 d、养殖塘内干旱胁迫20 d),胁迫结束获得抱卵虾后,在实验室内孵化并收集幼虾。在不同饲养模式(单养、群养)条件下进行30 d的生长试验,统计生长指标(体长、平均体质量、增质量率、特定生长率、存活率、蜕皮频率)。对试验结果进行广义线性混合模型分析,比较亲本培育生境、干旱胁迫、饲养模式对后代幼虾生长的影响。结果表明,饲养模式对幼虾的体长、特定生长率、蜕皮频率有极显著影响(P<0.01),单养组处理高于对照组处理;干旱胁迫对特定生长率有显著影响(P<0.05),对蜕皮频率有明显影响(P=0.055),胁迫组处理高于对照组处理;生境对幼虾特定生长率有显著影响(P<0.05),人工塑料池组的高于养殖塘组。表明胁迫后产出的幼虾生长速度高于普通幼虾,亲代所处的生境会影响子代的生长表现;为保证幼虾的生长速度,育苗时应适当降低饲养密度。
- 许荟李佳佳严维辉黄亚红
- 关键词：干旱胁迫克氏原螯虾幼虾饲养模式
- 中期因子(Midkine)在我国胃癌患者组织中的表达
- 目的:研究胃癌中MK的表达水平及其定位,探讨MK与肿瘤的关系。方法:通过RT-PCR、real-time PCR和免疫组化的方法,检测9例正常胃镜组织、37例胃肿瘤组织及其相应的配对癌旁组织中MK的表达情况,对Midki...
- 黄雅玲黄亚红曹国春王会王庆苓侯亚义
- 关键词：胃癌RT-PCR实时定量PCR免疫组化
- 文献传递
- Zbtb7A在毕赤酵母中的表达纯化及单克隆抗体制备
- 背景:转录抑制因子Zbtb7A过表达于许多人类肿瘤组织中。通过抑制ARF表达,调控下游许多肿瘤抑制基因和原癌基因的表达,过表达Zbtb7A可促进肿瘤的发生发展,从而扮演着肿瘤的'分子开关'。
- 王会赵树立王庆苓黄亚红季玉连侯亚义
- 高效检测人降钙素原化学发光免疫分析方法的建立与评价被引量：3
- 2017年
- 目的重组原核表达人降钙素原(PCT)蛋白,制备抗人PCT单克隆抗体,建立高效检测PCT化学发光免疫分析方法。方法根据NCBI提供的PCT基因序列,按照大肠埃希菌偏爱密码子优化后进行全基因合成,通过BamHⅠ和XhoⅠ双酶切将其构建到pET32a载体上;将pET32a-PCT质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,采用Western blot法分析重组蛋白表达情况;用镍亲和纯化柱纯化重组蛋白,以此为抗原免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合,采用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,有限稀释法进行克隆化后再用间接ELISA法筛选阳性单克隆细胞;将阳性单克隆细胞接种于小鼠腹腔内,制备腹水单抗,经Protein A/G纯化后进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,采用间接ELISA方法对抗体的特异性、灵敏度以及亲和力进行鉴定;用NaIO4氧化HRP法标记单克隆抗体,通过棋盘法筛选配对单克隆抗体,以筛选的配对抗体为捕捉抗体,建立双抗夹心化学发光免疫分析的血清学检测体系,检测临床150例血清标本,其中PCT升高(>0.05ng/ml)120例,PCT阴性(<0.05ng/ml)30例。结果共筛选出6株抗人PCT蛋白的单克隆细胞,制备的腹水效价均大于4×10^(-6);通过棋盘法筛选得到2对能够进行双抗夹心配对的单抗,其中1对亲和力较高,其亲和力常数分别为2.39×10~8 L/mol和2.91×10~8 L/mol。双抗夹心化学发光免疫分析方法检测线性范围为0.06~8ng/ml,其中阳性检出率为96.6%,阴性符合率为100%,与临床检测数据相比,相关系数R^2=0.9737。结论建立的双抗夹心ELISA方法灵敏度高、特异性强、稳定可靠,可用于细菌、寄生虫等病原体感染患者的PCT血清学定量检测。
- 羊婷婷余易展刘培王念超卢彦黄亚红
- 关键词：单克隆抗体双抗体夹心
- 江苏地区日本沼虾种质资源的RAPD分析被引量：8
- 2008年
- 用RAPD技术研究了江苏地区10个日本沼虾群体的遗传多样性和亲缘关系。以40个随机引物（10个碱基）对沼虾基因组DNA进行扩增,选取其中18个扩增产物多态性好的引物进行分析。结果共扩增出234个DNA片段,大小在250-2000 bp之间;126个位点表现为多态位点,多态位点比例为53.85%。常州湖繁保区的日本沼虾遗传多样性最高,遗传多样性指数为0.1742;宿迁骆马湖池塘养殖的日本沼虾遗传多样性最低,遗传多样性指数为0.1263。UPGMA聚类分析表明,常州湖繁保区的日本沼虾和苏州太湖胥口镇渔洋山西南侧水域的日本沼虾亲缘关系最近,总体上亲缘关系和地理位置呈正相关。
- 陈婵娟张鑫许志强窦红霞葛家春黄亚红
- 关键词：日本沼虾RAPD地理群体种质资源
- 利用高效农杆菌遗传转化系统将ACP反义基因片段导入油菜被引量：16
- 2003年
- 通过对已有的油菜农杆菌遗传转化体系的改进 ,建立了一种利用农杆菌感染油菜子叶柄的高效遗传转化方法 ,经过农杆菌感染的子叶柄在含有 6 BA 2 .0mg/L ,IBA 0 .15mg/L ,AgNO33 .5mg/L的MS培养基上由卡那霉素抗性愈伤组织分化出抗性幼苗的频率达到 12 .2 8%。利用已经构建的含有油菜Napin启动子加上反义ACP脱饱和酶第一外显子、内含子的基因片段的植物双元表达载体 pNACP ,将该反义 ACP基因片段转入油菜“沪油 15” ;PCR和GUS染色结果表明抗性植株中有 60 %的植株含有导入的目的基因。
- 张承妹钱炳俊许斌贝黄亚红潘爱虎梁婉琪张大兵
- 关键词：遗传转化系统基因片段基因导入油菜
- 杂交粳稻亲本随机扩增多态性DNA(RAPD)分析(研究简报)被引量：5
- 2001年
- 选用 6 0个随机引物对 15份杂交粳稻亲本材料进行了RAPD分析 ,其中 10种引物的扩增结果具有明显的多态性。在这 15份杂交粳稻亲本材料中共扩增得到 153条条带 ,其中的86条为多态性条带。聚类分析结果表明 ,所有供试材料可以被明确区分。在此基础上分析了这15个水稻品种的亲缘关系 ,对田间育种有一定的参考价值。
- 梁婉琪黄亚红潘爱虎曾令珂张大兵袁勤全立勇曹黎明倪林娟
- 关键词：杂交粳稻RAPD分析亲本选育
- 原癌基因Zbtb7A的POZ区在大肠杆菌中的表达及其多抗制备被引量：2
- 2009年
- 目的:原癌基因Zbtb7A在肿瘤的发生发展过程中起"分子开关"的作用。本研究制备Zbtb7A蛋白POZ功能区重组蛋白及相应的多克隆抗体。方法:根据大肠杆菌的密码子偏好性,优化其编码序列,用2步法PCR合成目的片断,并将其构建入原核表达载体pET-26b(+)中。重组表达质粒转入大肠杆菌BL21(DE3),用0.5 mmolIPTG诱导重组蛋白表达。所获重组表达蛋白经15%SDS-PAGE分离,切胶回收目的蛋白,研磨后免疫家兔制备抗血清。收集的抗血清经饱和硫酸铵沉淀和G蛋白柱联合纯化,用Western blot证实对纯化的抗血清进行鉴定。结果:获得了密码子优化后的Zbtb7APOZ区的编码序列,并成功地获得了其重组蛋白,制备了高纯度的抗POZ区多克隆抗体。结论:所获得的重组POZ区蛋白及其多克隆抗体可应用于对Zbtb7A的进一步研究。
- 季玉连赵树立黄亚红赵光锋侯亚义
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- K88 ad ETEC菌毛蛋白亚基基因faeC的克隆、表达及多克隆抗体的制备被引量：4
- 2005年
- 为研究毒素源性大肠杆菌(ETEC)菌毛蛋白分子装配机理,从K88adETEC中PCR扩增出K88菌毛蛋白小亚基基因片段faeC,然后将其克隆到大肠杆菌表达载体pET30a(+)中,获得重组质粒pET30C,并将该质粒转入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中;重组菌株经IPTG诱导后,经过SDS PAGE分析表明该菌株可以表达FaeC蛋白(16.9kDa),且重组蛋白主要以包涵体形式存在,约占菌体蛋白的30%。用分离纯化的重组FaeC蛋白免疫小鼠,获得FaeC的鼠抗血清,经免疫学分析表明,利用此重组蛋白制备的抗血清与FaeC重组蛋白及K88adETEC的菌毛蛋白都能发生特异性抗原抗体反应。
- 申慧峰王玉炯黄亚红梁婉琪周智爱潘爱虎钱炳俊武爱波张大兵
- 关键词：重组蛋白多克隆抗体基因克隆K88菌毛
