关云谦
- 作品数：75 被引量：171H指数：7
- 供职机构：首都医科大学宣武医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金北京市科技新星计划更多>>
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- 复制性衰老减弱人胚骨髓间充质干细胞静脉移植治疗大鼠脑梗死的疗效
- 2015年
- 目的比较不同代次的人胚胎骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)移植治疗大鼠脑梗死模型的疗效,包括梗死体积和行为学改变以及疗效产生机制,包括对梗死区激活的小胶质细胞的抑制、产生营养性细胞因子上的差别。方法体外培养人胚胎骨髓来源间充质干细胞,并通过连续传代制作复制性衰老模型。分别收集传第4代和第10代的MSC用于移植。制作大鼠大脑中动脉远端阻塞(distal middle cerebral artery occlusion,d MCAO)脑梗死模型。实验分假手术组(无脑梗死)、缺血对照组〔脑梗死模型给予0.9%(质量分数)氯化钠注射液〕和MSC细胞治疗组。移植组在造模后1 h经尾静脉移植1×106不同代次的BM-MSC,移植后2、4 d进行行为学评价;移植后2 d部分动物进行梗死体积测定;部分动物灌注取脑,免疫组织化学法计数并对比皮质梗死区激活的小胶质细胞CD68染色的数量;另一部分动物于移植4 d用ELISA法检测梗死灶区域大鼠来源的脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、胰岛素样生长因子(insulin like growth factor-1,IGF-1)的浓度。结果只有第4代人BM-MSC能够有效减少梗死体积,并在移植后第2天改善脑梗死模型动物的神经功能。移植后第4天,仅第4代BM-MSC移植组脑内BDNF、IGF-1蛋白浓度明显高于缺血对照组,小胶质细胞激活明显低于对照组;第10代MSC对营养性细胞因子和小胶质细胞的影响和缺血对照组相比,差异无统计学意义。结论脑梗死后1 h移植早代次的BM-MSCs会产生减小梗死体积、改善动物行为的作用,但晚代次细胞的作用不明显,原因可能和晚代次细胞促进脑内神经营养因子表达,抑制脑内小胶质细胞激活的能力下降有关。
- 黄爱华张萍萍张斌马步青关云谦周逸丹
- 关键词：脑梗死间充质干细胞小胶质细胞
- 胰岛素对心肺复苏大鼠神经元凋亡及Bcl-2，Bax mRNA表达的影响被引量：3
- 2011年
- 目的探讨脑室内注射胰岛素对心肺复苏（cardiopulmonary resuscitation，CPR）后大鼠海马CAl区神经元凋亡和对抑凋亡因子Bcl-2，促凋亡因子BaxmRNA表达的影响。方法实验地点在首都医科大学宣武医院试验动物中心。30只雄性SD大鼠随机（随机数字法）分为假手术组（对照组，n=6）、心怖复苏组（复苏组，n=12）及CPR后胰岛素干预组（胰岛素组，n=12）。经食道超速起搏诱发6min室颤制备大鼠CPR模型；以CPR后大鼠恢复室上性心率、收缩压超过60mmHg（1mmHg=0．133kPa）并持续10min以上，作为自主循环恢复（ROCS）标准；ROCS10min后，胰岛素组大鼠经立体定位仪定位，脑室内注射12．5μL（1U）胰岛素，其余2组大鼠注射等量生理盐水。维持生命体征，CPR后24，72h，应用实时荧光PCR（Realtime-PCR）测定海马CAl区神经元Bcl-2，BaxmRNA的表达量；CPR后7d，应用TUNEL染色检测海马CAl区神经元凋亡；CPR前后监测大鼠静脉血糖变化。计量资料采用均数±标准差（x±s），组间比较采用单因素方差分析（ANOVA）；相关性统计应用Pearson相关分析，以P〈0．05为差异具有统计学意义。结果①CPR后24，72h，胰岛素组大鼠Bcl-2mRNA表达量均高于复苏组（1．45±0．05）VS．（0.79±0．01）；（0．95±0．06）vs．（0．35±0．03），差异具有统计学意义（P〈0．01）。组内比较发现，胰岛素组、复苏组72h表达均低于24h（P〈0．01）。而胰岛素组与复苏组Bax mRNA表达差异无统计学意义（P〉0．05），胰岛素组、复苏组72h与24h比较差异无统计学意义（P〉0．05）。②CPR后7d，胰岛素组大鼠海马CAl区神经元凋亡计数，复苏组（124．75±17．35）个／mm^2明显高于对照组（5．12±3．26）个／mm^2和胰岛素组（92．79±7．49）个／mm^2，差异具有统计学意义（P〈0．01）。③各组大鼠各时间点外周静脉血糖比较无统计学意义（P〉0．05）�
- 何婧瑜王晶关云谦田欣廖秋菊秦俭
- 关键词：胰岛素MRNABAXMRNA凋亡神经保护
- 基因检测在Ⅳ型埃勒斯-当洛综合征诊断中的意义被引量：2
- 2011年
- 目的 埃勒斯-当洛综合征（Ⅳ型）是临床罕见病例,诊断困难,基因检测技术可明确该病诊断.方法 设计Col3A1基因引物,提取患者外周血标本DNA,PCR扩增后行测序分析碱基突变点,确认氨基酸变化位置,结合临床特征进行疾病诊断.结果 患者Col3A1基因外显子30的第2209个碱基及内含子15的第327碱基出现套峰.在2209位碱基出现G-A的突变,造成第698个氨基酸变化,由丙氨酸（Ala）改变为苏氨酸（Thr）,即：P.A698T（c.2209G＞A）,突变来源于先证者家系.结论 基因检测可以明确埃勒斯-当洛综合征诊断,对临床有指导意义.
- 陈兵关云谦邬晓乐齐一侠俞恒锡李建新张建
- 关键词：肾血管性高血压基因突变
- 含GDNF基因的慢病毒载体的构建和其在人胚胎神经干细胞中的表达被引量：4
- 2008年
- 利用含胶质源性神经营养因子(Glial cell derived neurotrophic factor,GDNF)基因的慢病毒载体转染了人胚胎来源的神经干细胞,探讨了转染后GDNF在神经干细胞中的体外表达水平及其影响因素。首先GDNF基因被克隆入慢病毒载体,通过瞬时转染法包装出病毒上清,经滴度鉴定后分别按拷贝数为1、2.5、5、10转染神经干细胞。转染后细胞经过潮霉素筛选得到均一表达GDNF的神经干细胞体系。其后分别利用酶联免疫吸附(ELISA)方法和Real-time PCR方法测定不同转染组细胞在不同时间点GDNF的蛋白分泌水平和基因表达水平。实验中构建了表达GDNF基因的慢病毒载体,包装出的病毒上清在体外培养条件下成功转染了神经干细胞,经潮霉素筛选可以得到均一的持续表达分泌GDNF的人胚胎皮层神经干细胞体系。实验结果表明转染拷贝数可以影响GDNF的分泌水平,相同条件下转染拷贝数越高,GDNF分泌量越多,其基因表达水平越高。因此,含GDNF的慢病毒载体可以成功转染人胚胎来源的神经干细胞,使其持续表达GDNF,转染过程中可以通过拷贝数在一定水平上控制GDNF的蛋白分泌水平和基因表达水平。
- 王淑艳任萍谢淑朱宛宛王暘关云谦张愚
- 关键词：胶质源性神经营养因子神经干细胞慢病毒载体
- 全骨髓培养法扩增小鼠内皮祖细胞
- 2012年
- 背景:对于小型实验动物,通过分离骨髓单个核细胞进行内皮祖细胞培养、扩增的方法较为繁琐。目的:探讨采用全骨髓培养方式扩增小型动物内皮祖细胞的可行性。方法:采用全骨髓培养分离C57BL/6小鼠内皮祖细胞,培养第7天行DiL-acLDL和FITC-UEA-1双荧光染色检测,并利用流式细胞仪检测其CD34、FLK-1表达情况。同时检测其体外血管生成能力,黏附、增殖和迁移能力。设立骨髓单个核细胞培养法为对照。结果与结论:全骨髓培养至第2天便可见早期内皮祖细胞集落形成,第7天时可见大量短梭状内皮祖细胞,其具有吞噬DiL-acLDL及结合FITC-UEA-1的能力,内皮祖细胞在基质胶上同样能够形成血管样结构,培养至第2周晚期内皮祖细胞集落出现,迅速生长形成典型的铺路石样,并能够在体外传代培养,细胞数量、细胞表面CD34、FLK-1表达、体外黏附、增殖和迁移能力及晚期集落出现时间与对照组差异无显著性意义(P>0.05)。说明采用全骨髓培养的方式能够实现小型动物内皮祖细胞的筛选扩增,且操作简便。
- 刘俊峰杜忠东陈植关云谦李慎涛
- 关键词：骨髓内皮祖细胞小鼠扩增单个核细胞
- 小鼠胚胎干细胞分化扩增期连续低密度传代对原始细胞中Oct-4阳性细胞比例及神经分化能力的影响被引量：2
- 2009年
- 目的:探讨在分化扩增期采用连续低密度传代的方法是否能降低小鼠胚胎干细胞向神经细胞分化的前体细胞中Oct-4阳性细胞的比例,以及对神经分化能力的影响。方法:采用"五步法"将小鼠胚胎干细胞向神经元分化,进入扩增期后采用连续低密度传代的方法连续传10代。然后应用细胞免疫组化鉴定Oct-4阳性细胞、神经元与胶质细胞、流式细胞仪检测Oct-4阳性细胞比例、凋亡试剂盒测定细胞凋亡。结果:流式细胞仪检测出扩增期连续低密度传代得到的前体细胞中Oct-4阳性细胞的比例由16.17±4.8%降至4.33±1.63%,扩增期低密度传代细胞和正常高密度传代细胞的细胞凋亡率鉴定分别为15.16±3.64%和11.88±2.63%,步骤5诱导分化后的细胞GFAP和Tuj-1免疫组化染色呈阴性。结论:低密度传代培养可以减少分化后Oct-4阳性细胞的比例,且该比例下降不是由Oct-4阳性细胞的凋亡引起的。同时可能是因为低密度传代培养和高密度相比引起了细胞的质变、或者改变了前体细胞向神经元分化的某种微环境,导致了前体细胞不能分化为神经细胞。提示高密度培养在前体细胞向神经元分化过程中具有重要作用,高密度和低密度培养的比较,提供了研究ES细胞向神经元分化机制的新平台和研究方向。
- 王芳杜庆安朱宛宛吴迪徐艳玲关云谦张愚
- 关键词：神经分化
- 汉族人群雌激素受体β基因多态性与子宫肌瘤的关系被引量：3
- 2010年
- 目的研究在中国人汉族人群中,子宫肌瘤的发生与雌激素受体β(estrogen receptor,ERβ)基因多态性之间的关系。方法自2007年1月至2008年6月,采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)来扩增ERβ基因序列,用限制性内切酶对193名平均年龄为(39.64±7.14)岁的健康女性和92名平均年龄为(43.96±6.59)岁的子宫肌瘤患者的ERβ基因扩增产物酶切,测定其基因多态性。结果ERβ的基因多态性AluI在子宫肌瘤组与对照组之间的分布分别为78.3%、19.6%、2.2%以及69.4%、29%、1.6%(P=0.229);RsaI在子宫肌瘤组与对照组之间的分布分别为65.2%、25%、9.8%以及67.4%、28.5%、4.1%(P=0.162),2种基因多态性的分布在2组之间差异均无统计学意义。结论在汉族人群中,ERβ基因的RsaI和AluI多态性分布与子宫肌瘤的发生无相关性。
- 王佳茵张海珍关云谦谢峰
- 关键词：子宫肌瘤基因多态性ERΒ
- 基于内皮祖细胞和脱细胞基质构建组织工程静脉的初步研究
- 目的：探讨基于犬骨髓源内皮祖细胞和猪脱细胞动脉基质体外构建组织工程静脉及其植入体内的可行性。方法：实验犬(n=8)骨髓单个核细胞体外扩增获取足够数量内皮祖细胞,荧光标记后将其种植于酶法脱细胞猪动脉管状基质,观察不同预衬基...
- 吴英锋张建谷涌泉陈晓松陈亮李学锋陈兵郭连瑞罗涛崔世军廖传军关云谦张景燕吴燕川孙雪静万岁桂俞恒锡李建新汪忠镐
- 文献传递
- 利用巢式聚合酶链反应检测单个胚胎小体细胞中时钟基因的表达被引量：2
- 2006年
- 目的建立一组灵敏的检测时钟基因(c lock gene)的巢式聚合酶链反应(nested PCR)方法,并检测小鼠胚胎小体(EB)来源的单细胞中重要时钟基因的表达情况。方法培养小鼠胚胎干细胞(mESC),体外诱导分化为EB,提取总RNA并进行反转录,用BMAL1、CLOCK、CRY1和CRY2基因特异引物进行巢式聚合酶链反应,电泳检测扩增产物,从而建立相应的巢式PCR反应体系。利用膜片钳获取胚胎小体来源的单个细胞,通过巢式PCR反应检测相应时钟基因的表达情况。结果确定了BMAL1、CLOCK、CRY1和CRY2基因的扩增参数。证明在此条件下无非特异扩增,并且能够检测到至少两个拷贝的目的分子。利用此检测体系发现,部分胚胎小体细胞中BMAL1、CLOCK、CRY1和CRY2时钟基因环路不完整。结论巢式PCR方法能够灵敏地、而且特异地从单细胞中检测出一组时钟基因的表达,时钟基因的转录在胚胎小体细胞中并不一致,即时钟基因的环路不完整。时钟基因可能在细胞分化过程中发挥着某种作用。
- 关云谦蔡彦宁谢淑朱宛宛徐艳玲张愚陈彪
- 关键词：巢式聚合酶链反应时钟基因单细胞
- 大鼠局灶性脑缺血再灌注时皮层核心区calpain对nNOS的调节作用
- 目的:研究整体动物脑缺血再灌注过程中皮层核心区calpain对nNOS表达的调节作用.结论:整体动物脑缺血过程中,calpain对nNOS的表达有复杂的直接或间接作用,但最终的结果是促进nNOS的表达,可以推测,calp...
- 关云谦
- 关键词：局灶性脑缺血
- 文献传递
