刘思静
- 作品数：19 被引量：41H指数：3
- 供职机构：四川大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省国际科技合作与交流研究计划项目国家大学生创新性实验计划更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学理学生物学更多>>
- 大气压低温等离子体射流对白色念珠菌生物膜的杀灭效果被引量：5
- 2019年
- 目的评价大气压低温等离子体射流对白色念珠菌生物膜的杀灭效果。方法将对数生长期的白色念珠菌悬液接种于24孔板上,培养白色念珠菌生物膜,通过活菌计数评价生物膜的培养稳定性;将大气压低温等离子体射流作用于白色念珠菌生物膜不同时间后,平板计数法计算残余活菌的量,荧光染色观察死亡真菌的情况,透射显微镜观察真菌形态变化。结果白色念珠菌培养72 h后,可在24孔板上形成典型的、成熟的、稳定的生物膜结构;大气压低温等离子体射流对白色念珠菌生物膜具有较好的杀灭效果,作用20 s可杀灭90%真菌,作用时间超过55 s,则无活菌检出;随着作用时间的增加,荧光素标记的死细胞面积也相应增加;透射显微镜结果显示大气压低温等离子体射流对白色念珠菌的细胞结构具有显著的破坏作用。结论大气压低温等离子体射流可破坏白色念珠菌结构,对白色念珠菌生物膜具有较强的杀灭作用。
- 蒲启康刘思静黄欢熊靖飞张丽方志汪川
- 关键词：白色念珠菌生物膜灭菌
- 三种李斯特菌菌体蛋白提取方法的比较被引量：9
- 2015年
- 通过对3种李斯特菌菌体蛋白提取方法主要是破壁方式的比较,找到一种可高效提取李斯特菌菌体蛋白的方法,为该菌的深入研究提供可靠技术。以绵羊李斯特菌新鲜液体培养物为材料,收集菌沉淀,分别选用3种破壁方式破除细胞壁,三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)-丙酮沉淀法沉淀破壁液中的菌体蛋白,采用聚丙烯酰氨凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和Western-blot分析所得菌体蛋白。溶菌酶-超声破壁-TCA-丙酮沉淀法提取得到的李斯特菌菌体蛋白SDS-PAGE条带清晰丰富,Western-blot条带特异。溶菌酶-超声破壁-TCA-丙酮沉淀法可有效提取李斯特菌菌体蛋白,满足常用蛋白分析技术的要求,是一种提取李斯特菌菌体蛋白的可靠方法。
- 徐宗凯林青青周梦莹刘思静黄耀李文熙李兴桥余倩汪川
- 关键词：李斯特菌蛋白质
- 绵羊李斯特菌为载体的结核多阶段T细胞表位疫苗的构建及评价被引量：1
- 2020年
- 目的构建以绵羊李斯特菌(Listerria ivanovii,LI)为载体的表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)特征性抗原蛋白的疫苗候选菌株,并评价其生物安全性和免疫效果。方法将MTB早期感染、潜伏感染和复发阶段的4种抗原基因的细胞表位串联形成融合抗原基因,即多阶段结核杆菌抗原基因,命名为msv。将msv插入含有LI同源序列的打靶质粒,利用同源重组技术构建基因组整合msv抗原基因的重组LI菌株。观察重组菌株的体外生长情况,通过Western blot验证靶抗原蛋白的表达情况,测定重组菌株对C57BL/6小鼠的半数致死量(50%lethal dose,LD50),以0.1×LD50为免疫剂量,通过尾静脉接种小鼠,通过接种前及接种后1、2、3、5、7、14 d的血清谷丙转氨酶(ALT)水平、脏器载菌量和脏器病理切片评价疫苗候选株的安全性。为测定疫苗候选株的免疫效果,另取3组小鼠分别尾静脉免疫LI-msv、LI、NS,免疫后第9天制备脾悬液,流式细胞术检测分泌干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)等细胞因子的CD4+T细胞和CD8+T细胞水平结果成功构建能表达多阶段结核杆菌抗原的疫苗候选株LI-msv。LI-msv对C57BL/6小鼠的LD50为3.3×10^8 CFU/只。通过尾静脉接种小鼠后,LI-msv主要在小鼠肝脏和脾脏内短期繁殖,7d后能被机体清除,对肝、脾的病理损伤时间短且可恢复;流式细胞术检测结果表明接种LI-msv的小鼠脾淋巴细胞分化出了特异的IFN-γ^+CD4^+T细胞和IFN-γ^+CD8^+T细胞,阳性细胞比率较相应载体对照组和生理盐水对照组高(P<0.005);特异性TNF-α^+CD4^+T细胞比率高于相应载体对照组(P<0.01)和生理盐水对照组(P<0.005),TNF-α^+CD8^+T细胞比率高于生理盐水对照组(P<0.005)结论成功构建了一株以LI为载体的表达结核杆菌多阶段抗原的疫苗候选株。该菌株具有生物安全性,且能诱导一定的特异性细胞免疫应答,有望作为结核疫苗�
- 刘婷刘思静周玉真张云雯汪川
- 关键词：结核病安全性免疫效果
- 粗壮女贞提取物预防动脉粥样硬化的作用及机制研究
- 研究背景与目的 动脉粥样硬化（Atherosclerosis，AS）及其引起的心血管疾病已成为严重危害全球人类健康的重要公共卫生难题之一。因此，安全有效的预防AS策略对于降低心血管疾病的发病率和死亡率变得尤为重要。生活...
- 刘思静
- 关键词：氧化三甲胺胆汁酸入血成分
- 一种绵羊李斯特菌平衡致死系统、构建方法及应用
- 本发明涉及一种绵羊李斯特菌平衡致死系统、构建方法及应用，在actA和plcB双基因减毒LI菌株的基础上，利用同源重组的方法得到缺失四个基因(actA、plcB、dal、dat)的减毒营养缺失株(LI△actAplcB△d...
- 汪川周玉真刘思静张云雯
- 文献传递
- 结核分枝杆菌clpP2抗原表位预测与分析被引量：1
- 2017年
- 目的预测结核分枝杆菌酪蛋白酶蛋白水解亚基单位2(clpP2)的抗原表位,为结核病疫苗、药物研制等提供新的靶点。方法以clpP2蛋白的氨基酸序列为基础,采用生物信息软件DNA Star预测二级结构;运用SWISS-MODEL在线软件进行同源建模;运用VaxiPred软件综合预测T细胞抗原表位,用ABCpred、COBEPro和BepiPredPred软件综合预测其B细胞抗原表位;采用DNA Star Protean、SignalP、TMHMM在线软件和NCBI数据库分析其免疫学相关信息。结果 clpP2蛋白结构丰富,含有较多潜在细胞毒性T细胞和辅助T细胞表位;也含有较多的B细胞线性和构象优势表位,这些区域亲水性、表面可能性和柔韧性指数都较高。结论 clpP2蛋白具有诱导免疫应答的潜能,可以作为结核监测、治疗、预防的新靶点。
- 刘思静蒋明娟蒲启康任晨艳苏琳张祥汪川
- 关键词：结核分枝杆菌抗原表位
- 国内高校化学实验室安全管理问题及对策——由《耶鲁大学化学实验室安全条例》引发的实验室安全管理探讨被引量：14
- 2013年
- 本文对比了《耶鲁大学化学实验室安全手册》和国内高校化学实验室安全管理状况,探讨得出国内高校存在的实验室安全管理问题,进而探讨对大学生实验安全意识的培养方式,以及提出一系列化学实验室安全管理的对策。
- 李昊刘思静黄耀李文熙刘佳琪
- 关键词：高校化学实验室安全管理
- 李斯特菌载体结核疫苗候选株基因重组构建及蛋白表达验证被引量：2
- 2016年
- 目的基因重组构建以单增李斯特菌、绵羊李斯特菌为载体的新型结核疫苗候选株,并进行蛋白表达验证,为结核疫苗研究和结核防控提供新思路和新方法。方法以体外基因连接、质粒转化等技术,将本实验室已有的分别编码结核抗原Ag85C、ESAT-6蛋白的两种基因盒,插入携带单增李斯特菌、绵羊李斯特菌同源序列的打靶质粒中。将打靶质粒电转化单增李斯特菌、绵羊李斯特菌,在42℃和30℃连续传代,利用同源重组杂交原理和基因打靶技术,将打靶质粒携带的两种编码结核抗原的抗原基因盒,分别整合至致病基因(actA和plcB)被敲除的单增李斯特菌、绵羊李斯特菌减毒株及未经减毒的绵羊李斯特菌基因组中。重组菌经蓝白斑、抗生素抗性及PCR筛选,再经Western blot检测其菌体蛋白及分泌蛋白的表达情况。结果构建了携带抗原基因盒的重组菌株5株,其重组基因序列PCR验证结果均符合预期,且测序验证成功;重组菌不携带红霉素抗性基因,表型特征符合预期;其中,重组菌Li-Rv0129c、Li-ΔactAplcB-Rv0129c按预期表达了结核杆菌Ag85C抗原蛋白,Li-ΔactAplcBRv3875按预期表达了结核杆菌ESAT-6抗原蛋白,Lm重组菌未表达相应结核抗原蛋白。结论成功构建并筛选得到3株以绵羊李斯特菌为载体的、携带结核杆菌Rv0129c(编码Ag85C)抗原基因盒或Rv3875(编码ESAT-6)抗原基因盒,且表达相应抗原蛋白的新型结核疫苗候选株。
- 任晨艳刘思静蒲启康蒋明娟周梦莹汪川
- 关键词：李斯特菌结核疫苗
- ILO与LLO协助李斯特菌黏附、侵袭细胞及胞内增殖的比较研究被引量：1
- 2019年
- 目的研究李斯特菌溶血素的主要功能,比较两种李斯特菌——绵羊李斯特菌(Listeria ivanovii, LI)和单增李斯特菌(Listeria monocytogenes, LM)的溶血素对细菌黏附细胞等作用的强弱。方法构建含有LI i-hly基因上、下游同源序列和lacZ基因或hly基因的打靶质粒,利用基因重组技术构建LI溶血素(ILO)缺陷的LI重组菌株LIΔi-hly∷lacZ和回补表达LM溶血素(LLO)的重组菌株LIΔi-hly∷hly;比较2株重组菌与野生LI对人肝癌HepG2细胞的黏附、侵袭能力;比较3株菌在巨噬细胞RAW264.7内的增殖能力。结果重组菌株LIΔi-hly∷lacZ和LIΔi-hly∷hly的基因序列与预期相符;LIΔi-hly∷hly、LI和LIΔi-hly∷lacZ对HepG2细胞的黏附率分别为(3.43±0.82)%、(3.43±1.59)%和(3.41±1.12)%,侵袭率分别为(1.74±0.46)%、(1.22±0.75)%和(1.39±0.46)%,差异均无统计学意义;胞内增殖实验结果表明,与野生株相比,ILO缺陷株LIΔi-hly∷lacZ在巨噬细胞内的增殖量降低,LIΔi-hly∷hly的增殖量升高。结论 LI在细胞内的增殖水平与ILO有关,ILO缺失抑制了LI在细胞内的增殖能力,LM溶血素LLO协助细菌逃离吞噬泡进入宿主细胞质的能力强于LI溶血素ILO。
- 刘思静刘婷周玉真郭妮黄欢汪川
- 关键词：单增李斯特菌
- 表达绿色荧光蛋白的重组绵羊李斯特菌的构建及荧光分析
- 2017年
- 目的构建表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组绵羊李斯特菌,为绵羊李斯特菌的研究提供重要工具。方法利用SOEing PCR的方法将单核细胞增生性李斯特菌溶血素的启动子(phly)与GFP基因融合,连接到pCW质粒上,构建重组原核表达质粒pCW-phly-GFP。将重组质粒电转化绵羊李斯特菌,利用荧光显微镜分析荧光表达情况。分别在含红霉素和不含红霉素的BHI肉汤中连续传代培养携带重组质粒的绵羊李斯特菌,通过提取质粒和观察荧光的方法研究重组质粒pCW-phly-GFP及GFP在绵羊李斯特菌中的稳定性。结果重组质粒pCW-phly-GFP酶切验证和测序均正确。在荧光显微镜下可以见到携带重组质粒的绵羊李斯特菌发绿色荧光。在红霉素抗性压力选择下重组质粒pCW-phly-GFP能稳定存在于绵羊李斯特菌中,并高效表达GFP。结论成功构建了GFP基因原核表达质粒pCW-phly-GFP,能在绵羊李斯特菌中高效表达GFP,为进一步研究绵羊李斯特菌作为疫苗载体提供了重要的工具。
- 张祥苏琳刘思静李泳榆蒋明娟黄欢汪川
- 关键词：绿色荧光蛋白原核表达
