刘怡
- 作品数：8 被引量：41H指数：5
- 供职机构：中国科学院天津工业生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程医药卫生生物学更多>>
- 齐墩果酸酵母细胞工厂的合成途径与发酵工艺优化被引量：5
- 2014年
- 目的:通过遗传改造和发酵工艺优化等方法进一步提高齐墩果酸酿酒酵母细胞工厂的生产能力。方法:利用多片段基因同源重组法,增加齐墩果酸酿酒酵母工程菌BY-OA中甘草β-香树脂合酶(GgbAS),蒺藜苜蓿齐墩果酸合成酶(MtOAS)和拟南芥烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸-细胞色素P450还原酶1(AtCPR1)等基因的拷贝数;并通过优化YPD发酵液中初糖浓度的方式提高齐墩果酸的产量。结果:增加工程菌BY-OA中GgbAS,MtOAS和AtCPR1基因的拷贝数能显著提高工程菌中目标产物的产量,获得的工程菌BY-2OA在初始葡萄糖浓度为20 g·L-1的YPD培养基中发酵7 d后β-香树脂和齐墩果酸分别达到136.5 mg·L-1(提高54%)和92.5 mg·L-1(提高30%),当初糖浓度提高到40 g·L-1时,齐墩果酸产量能达到165.7 mg·L-1。结论:新获得的工程菌BY-2OA生产齐墩果酸的能力显著提高,为发酵法生产齐墩果酸奠定了基础。
- 王冬王贝贝刘怡施明雨肖冬光黄璐琦戴住波张学礼
- 关键词：三萜齐墩果酸酿酒酵母合成生物学
- 多个调控元件调控萜类合成途径基因表达提高β-胡萝卜素的生产被引量：12
- 2013年
- 强启动子对于获得目标产物最大代谢流量来说并不一定是最优的；相比之下，使用多个具有不同强度的调控元件对基因表达进行调控更有可能获得最优的表达强度。为了对比使用多个调控元件和使用强启动子调控萜类合成途径基因表达对β-胡萝卜素生产的影响，并通过对关键基因的组合调控提高β-胡萝卜素的生产。丈中使用6个强度差异很大的人工调控元件，对萜类合成途径的8个基因进行调控。对于不同的基因，其最适的调控元件强度各不相同。对8个基因的调控使β-胡萝卜素产量提高1．2～3．5倍。和以前报道不一样的是，文中发现用适当强度的调控元件对dxr、ispG和ispH基因进行调控后，也能提高β-胡萝卜素的生产。对dxs和idi基因的组合调控将β-胡萝卜素产量提高了8倍，最终β-胡萝卜素产量达17．59mg／g干重细胞。结果表明使用多个不同强度的调控元件对基因表达进行调控比仅使用强启动子调控更为有效、为提高目标产品合成能力提供了一种新的基因表达调控方案。
- 赵婧刘怡李清艳朱欣娜张学礼
- 关键词：调控元件基因表达调控Β-胡萝卜素大肠杆菌
- 产人参皂苷元的重组酿酒酵母及其构建方法与应用
- 本发明公开了产人参皂苷元的重组酿酒酵母及其构建方法与应用。本发明所提供的一株能同时产齐墩果酸，原人参二醇和原人参三醇等三种人参皂苷元的重组酿酒酵母是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)GY-1，其...
- 张学礼戴住波王贝贝刘怡施明雨王冬
- 文献传递
- 产人参皂苷元的重组酿酒酵母及其构建方法与应用
- 本发明公开了产人参皂苷元的重组酿酒酵母及其构建方法与应用。本发明所提供的一株能同时产齐墩果酸，原人参二醇和原人参三醇等三种人参皂苷元的重组酿酒酵母是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)GY-1，其...
- 张学礼戴住波王贝贝刘怡施明雨王冬
- 文献传递
- 创建酿酒酵母细胞工厂高效生产人参皂苷前体达玛烯二醇Ⅱ被引量：14
- 2018年
- 人参皂苷是名贵药材西洋参和人参的主要活性成分,其中达玛烯二醇Ⅱ为人参皂苷类成分生物合成途径中的重要中间体。为构建高产人参皂苷前体达玛烯二醇Ⅱ的细胞工厂,本研究在优化过甲羟戊酸途径(MVA途径)工程菌的基础上,通过基因模块组合优化的方法获得能显著提高三萜前体的功能模块C30-M:分别由丹参法尼基焦磷酸合酶(Sm FPS)和拟南芥鲨烯合酶(At SQS2)组成,其鲨烯的含量能达到67.4 mg·g^(-1),约占细胞干重的6.74%;在进一步工作中,发现来源于拟南芥的2,3-环氧鲨烯合酶(At SQE2)能提高下游中间体羊毛甾醇的产量到47.9 mg·g^(-1),为对照菌含量的22倍;然后,通过调控达玛烯二醇Ⅱ合酶基因的表达和采用反义RNA技术对麦角固醇合成途径中的ERG7基因进行调控及发酵工艺优化等策略,首次将三萜合成通量提高到10 g·L^(-1)级别,创建出产量能达到15 g·L^(-1)达玛烯二醇Ⅱ的高效酵母细胞工厂,为达玛烷型人参皂苷的产业化合成奠定了坚实的基础。
- 王冬刘怡刘怡王金鹤戴住波戴住波张学礼
- 关键词：人参皂苷酿酒酵母合成生物学
- 葫芦二烯醇的异源高效合成研究被引量：7
- 2017年
- 葫芦二烯醇具有抑制炎症和抗癌活性,同时为罗汉果甜苷和葫芦素等重要中药有效成分生物合成途径中的基本前体。为获得高效生产葫芦二烯醇的酿酒酵母细胞工厂,该研究首先从罗汉果中克隆到葫芦二烯醇合酶(CBS)基因,通过在三萜化合物底盘菌WD-2091中异源表达和发酵后,产物经过GC-MS鉴定获得产量为27.44 mg·L^(-1)工程菌。再进一步调控工程菌中葫芦二烯醇合酶基因表达,最终成功获得葫芦二烯醇提高202.07%,产量为82.89 mg·L^(-1),高密度发酵达到1 724.10 mg·L^(-1)的酿酒酵母细胞工厂313-SL-CB。该研究为推动葫芦烷型四环三萜生物合成途径解析及高效细胞工厂创建提供了基础。
- 李守连王冬刘怡刘怡唐金磊花尔并花尔并张学礼戴住波
- 关键词：三萜合成生物学酿酒酵母
- 构建酿酒酵母细胞工厂生产番茄红素被引量：8
- 2014年
- 为构建高效生产番茄红素的酿酒酵母细胞工厂,本研究首先在酿酒酵母中引入番茄红素生物合成途径基因Crt B和Crt I,获得能生产0.17 mg·L-1番茄红素的初始工程菌ZD-L-000。在此基础上,在工程菌ZD-L-000中分别过表达MVA途径中的3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶编码基因t HMG1、萜类合成调控的转录因子编码基因upc2.1、二萜生物合成的牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶与法呢基焦磷酸合酶编码基因BTS1-ERG20,以及来自嗜酸热硫化叶菌的牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶编码基因Sa GGPS,考察这些基因过表达对番茄红素合成的影响,结果发现过表达upc2.1基因未能提高番茄红素的产量,但过表达t HMG1、BTS1-EGR20和Sa GGPS基因均能显著提高番茄红素的产量,分别为初始菌株的2.0,16.9和20.5倍。在进一步研究中,t HMG1、BTS1-EGR20和Sa GGPS等有效基因被一同整合入工程菌ZD-L-000,获得的高产菌株ZD-L-201中番茄红素的产量提高77.0倍,达到13.23 mg·L-1;在高密度-两相发酵体系中工程菌ZD-L-201的番茄红素产量能进一步提高到135.21 mg·L-1(提高10.2倍)。本研究获得的工程菌为微生物发酵法生产番茄红素提供了基础。
- 施明雨刘怡王冬路福平黄璐琦戴住波张学礼
- 关键词：番茄红素酿酒酵母合成生物学甲羟戊酸途径
- 代谢工程改造酿酒酵母生产β-胡萝卜素被引量：5
- 2014年
- β-胡萝卜素在食品、药品和化妆品领域有广泛用途。为获得生产β-胡萝卜素的微生物细胞工厂,本研究首先在酿酒酵母BY4742中过表达甲羟戊酸(MVA)途径的限速酶3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)基因及二萜化合物合成的关键酶牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶(GGPS)基因,来提高牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸(GGPP)的供给。在酿酒酵母底盘菌BY4742-T2的基础上整合来源于成团泛菌和红法夫酵母的β-胡萝卜素合成基因,比较酿酒酵母工程菌生产β-胡萝卜素的差别。结果表明提高酿酒酵母中HMGR和GGPS酶基因的表达能将工程菌中β-胡萝卜素的产量提高26.0倍。另外,来源于真核生物红法夫酵母的合成基因相比成团泛菌,更有利于酿酒酵母生产β-胡萝卜素。最终获得的酿酒酵母工程菌BW02能生产1.56 mg/g细胞干重的β-胡萝卜素,为进一步获得高产β-胡萝卜素细胞工厂提供基础。
- 王贝贝施明雨王冬许骄阳刘怡杨洪江戴住波张学礼
- 关键词：Β-胡萝卜素红法夫酵母酿酒酵母
