刘春雷
- 作品数：5 被引量：6H指数：1
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- 卡介苗热休克蛋白70基因修饰的树突状细胞疫苗体内抗瘤作用的研究
- 2023年
- 目的:探讨卡介苗热休克蛋白70 (BCG HSP70)基因修饰的树突状细胞(DCs)疫苗体内抗瘤效应。方法:从急性白血病患儿骨髓中培养未成熟树突状细胞(imDCs),形态学观察及流式细胞术鉴定后,利用脂质体2000将BCG HSP70基因转入imDCs细胞表面,免疫荧光单克隆抗体进行细胞表面修饰鉴定。取健康BALB/C裸鼠,第0天皮下接种HL-60细胞,第7~10天可形成皮下结节的白血病裸鼠模型,将其随机分为6组,移植瘤内分别接种PBS液、不做任何处理的imDC (imDC组);空载体(pDisplay)转染的imDC (imDC-neo组);重组载体(pDisplay-HSP70)转染的imDC (HSP70组);rhTNF-α (20 ng/ml)诱导的imDC (TNF-α组);以及pDisplay-HSP70转染 + rhTNF-α (20 ng/ml)诱导的imDC (HSP70 + TNF-α组)。每周1次,共2次,于给药第14天处死裸鼠。观察各组肿瘤体积变化,绘制肿瘤生长曲线;计算裸鼠体重的变化情况;以及HE染色观察肿瘤组织切片。结果:1) 骨髓培养的细胞形态特点及细胞表面标志均符合imDCs特征。共聚焦显微镜观察检测证实BCG HSP70表达在转染后的imDCs细胞表面。2) HSP70 + TNF-α组HLA-DR、CD80、CD86阳性率分别为(78.42 ± 8.01)%,(83.00 ± 6.75)%和(88.51 ± 4.44)%,明显高于HSP70组((55.13 ± 4.84)%,(59.93 ± 3.88)%和(62.33 ± 5.42)%)、TNF-α组((57.28 ± 5.63)%,(60.31 ± 6.20)%和(63.70 ± 3.78)%);HSP70组与TNF-α组比较无明显差异(p > 0.05)。3) 体内杀瘤效应:HSP70-DC组肿瘤体积变化(40.94)明显小于PBS对照组、imDC组及imDC-neo组(185.72,181.16和180.18),但大于HSP70 + TNF-α组(17.60) (p < 0.05)。HSP70-DC组、TNF-α组及HSP70 + TNF-α组肿瘤切片染色可见不同程度的核固缩、碎裂及溶解、空泡现象,以HSP70 + TNF-α组最明显。结论:BCG HSP70基因修饰的DC疫苗在小鼠体内可诱导出较强的杀瘤效应,且与细胞因子联合作用更强。
- 吴晓娟刘春雷李晓玲
- 关键词：卡介苗热休克蛋白70树突状细胞肿瘤疫苗
- 卡介苗HSP70基因转染HL-60细胞瘤苗制备及抗瘤机制的研究被引量：1
- 2014年
- 目的构建卡介苗(BCG)热休克蛋白70(HSP70)的真核表达载体,通过基因转染表达HL-60细胞表面,研究其抗瘤作用和机制。方法利用多聚酶链反应(PCR)方法扩增HSP70基因,与真核表达载体pDisplay连接,构建重组载体pDisplay-HSP70,并利用脂质体2000将其转染HL-60细胞。HL-60细胞分为未转染的HL60-wt组、转染空载体pDisplay的HL60-pDisplay组、转染重组载体pDisplay-HSP70的HL60-HSP70组,分别与外周血T淋巴细胞培养72 h,羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记和流式细胞术测定淋巴细胞增殖指数,ELISA法检测IFN-γ水平;各组HL-60细胞与T淋巴细胞混合培养6 d后获细胞毒性T淋巴细胞(CTL)效应细胞,加入HL-60靶细胞以不同效靶比共培育12 h,LDH释放改良法检测CTL细胞杀伤活性。结果扩增获得的HSP70基因大小与理论值一致,重组载体pDisplay-HSP70构建正确。HSP70表达在转染后的HL-60细胞表面。转染后的HL-60细胞,即HL60-HSP70组能明显促进异体T细胞扩增,该组CFSE阳性率、IFN-γ含量、CTL杀伤率均高于HL60-wt和HL60-pDisplay组,差异均有统计学意义(P<0.05);后两组间差异则无统计学意义(P>0.05);随效靶比增大,HL60-HSP70组CTL细胞杀伤活性逐渐增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建真核表达载体pDisplay-HSP70,并制备膜表面表达BCG HSP70的HL-60细胞瘤苗,HSP70基因转染后能明显增强HL-60细胞的免疫原性。
- 李晓玲刘春雷孙立荣
- 关键词：卡介苗基因转染HL-60肿瘤疫苗
- 卡介苗热休克蛋白70基因转染人原代白血病细胞瘤苗的制备及其抗瘤机制被引量：3
- 2015年
- 目的通过体外培养白血病细胞，制备膜表面表达卡介苗（BCG）热休克蛋白70（HSP70）瘤苗，研究其抗瘤作用和机制。方法含重组人干细胞因子（SCF）、重组人flt-3配体（FL）、白细胞介素（IL）-3和IL-6的无血清培养液Stemspan体外培养急性髓系白血病（AML）细胞，含SCF、FL、IL-3和IL-7的无血清的改良Iscove培养基（IMDM）体外培养B系急性淋巴细胞白血病（B—ALL）细胞，通过观察细胞生长形态和免疫表型测定验证培养的白血病细胞。利用脂质体2000将重组载体pDisplay—HSP70转染到已被鉴定的白血病细胞，免疫荧光单克隆抗体进行细胞表面修饰鉴定。对转染后的白血病细胞免疫原性进行检测：实验组分为未进行转染的白血病细胞组（wt-LC组），转染空载体pDisplay的白血病细胞组（pDisplay-LC组）及转染重组载体pDisplay-HSP70的白血病细胞组（HSP70-LC组）。收获各组细胞，与自体外周血T淋巴细胞混合培养72h，羟基荧光素双乙酸盐琥珀酰亚胺酯（CFSE）标记，流式细胞术测定淋巴细胞增殖指数，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测干扰素（IFN）-γ水平；各组白血病细胞与T淋巴细胞混合培养6d后，加入新鲜白血病细胞（效：靶分别为10：1、20：1、40：1、80：1）共培育12h，乳酸脱氢酶（LDH）释放改良法检测细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的杀伤活性。结果短期培养的白血病细胞呈集落样悬浮生长，并保持增殖特性；1-10d细胞增殖较快，以后逐渐变慢。对培养10d的细胞进行免疫表型测定，AML细胞的CD13、CD33表达与培养前比较差异无统计学意义（P〉0．05）；B-ALL细胞的CD19、CD10、CD22表达与培养前比较差异无统计学意义（P〉0．05）。共聚焦显微镜观察证实BCG HSP70表达在转染后的白血病细胞表面。转染后的白血病细胞免疫原性检测结果：（1）自体淋巴细胞增殖：HSP70-LC组CFSE阳性�
- 李晓玲刘春雷孙立荣
- 关键词：卡介苗热休克蛋白70白血病细胞肿瘤疫苗
- 医院网络产品漏洞全生命周期管理方案探析被引量：1
- 2022年
- 漏洞管理是信息安全管理中的重要一环。随着医疗行业信息化建设的高速发展,新系统数量的增加,信息安全问题也日益突出。网络不法分子正是利用了网络产品的漏洞,对系统进行攻击。本文论述了医院网络产品漏洞管理中存在的一些问题并提出了全生命周期管理网络漏洞的方案。
- 刘春雷
- 关键词：医院网络网络漏洞漏洞管理网络产品行业信息化信息安全问题
- 堡垒机跨数据中心双活部署的原理与实现被引量：1
- 2022年
- 为保证数据安全,保障业务的高可用,两个或多个数据中心协同作战,共同保障的方式成为大家共认的解决方案。堡垒机作为数据中心重要的运维安全设备,其双活部署可以很好的解决一个数据中心瘫痪的情况下,运维人员可以几乎无感知的继续运维,保障运维的连续性和高效性。本文研究了堡垒机跨数据中心双活部署的原理与实现,以供参考。
- 刘春雷马云飞
- 关键词：数据中心数据安全协同作战连续性
