史晓兰
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金长江学者和创新团队发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种用于上调内源性人SOD1表达多肽筛选的随机文库及细胞系的构建
- 2010年
- 目的以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为示踪物,建立一种简便、经济、有效的随机多肽文库,为进一步筛选出可上调内源性人SOD1表达多肽的药物奠定基础。方法采用点突变技术,在pET-14b-His-Tat-EGFP载体多克隆位点XhoI之后插入12个随机多肽的36个随机碱基序列。用阳离子脂质体LipofectamineTM2000包裹已构建的重组质粒pDsRed1-1-SOD1p后,转染NIH/3T3细胞,荧光显微镜观察SOD1启动子驱动的红色荧光蛋白的表达。用G418筛选稳定表达SOD1启动子驱动的红色荧光蛋白的细胞系,荧光显微镜检测红色荧光蛋白的表达及定位。结果在示踪载体的基础上构建的随机多肽文库理论上至少包含了107个独立克隆,且几乎所有克隆插入的随机片段都是36个碱基。稳定转染3个月后,重组质粒转染的细胞质及细胞膜上均有携带SOD1启动子的红色荧光蛋白的表达。结论成功建立随机多肽表达文库,获得了稳定表达SOD1启动子驱动的红色荧光蛋白的NIH3T3细胞系。
- 宋方丽史晓兰黄劭刘亚伟姜勇
- 关键词：肽库点突变转录启动子
- HMGB1刺激下与RAGE胞内段相互作用蛋白的鉴定
- 高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是高迁移率族(HMG)蛋白家族成员之一,1973年英国科学家Goodwin在牛胸腺细胞中首次发现,因其在聚丙烯酰胺电泳中的高迁移率得名,它是一种含量丰富、分子量小、高度保守的染色质相关非组...
- 史晓兰
- 关键词：高迁移率族蛋白B1免疫共沉淀
- 文献传递
- 小鼠ATP酶β亚单位真核表达载体的构建和细胞内定位研究
- 2011年
- 目的构建小鼠ATP酶β亚单位(ATPaseβ)真核表达载体,并观察其在哺乳动物细胞中的表达定位情况。方法取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,反转录为cDNA,以cDNA为模板PCR扩增得到ATPaseβ编码序列,将其连接到pMD18-T载体上,然后以pMD18-ATPaseβ为模板扩增得到ATPaseβ编码序列,再将其克隆到真核表达载体pcDNA3/HA上。采用脂质体转染法转染NIH 3T3细胞及293细胞,在荧光显微镜下观察结果。结果 PCR、双酶切和测序结果表明,重组质粒pcDNA3/HA-ATPaseβ构建正确;转染实验发现,该质粒能够在NIH 3T3细胞中表达,表达产物主要定位于细胞质,细胞膜上也有表达,而在293细胞中只表达于细胞质。结论成功构建了带有HA标签的小鼠ATPaseβ真核表达载体,该载体能够在哺乳动物NIH 3T3及293细胞中有效表达并正确定位,为进一步研究ATPaseβ的细胞内生物学功能提供了一个重要的工具。
- 史晓兰冯国开刘爱华姜勇
- 关键词：腺苷三磷酸酶Β亚基蛋白定位
