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孙志: 作品数：42 被引量：62H指数：4; 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划上海市科技兴农重点攻关项目更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>

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PRRSV-PCV2重组病毒的构建及PRRSV转录调控机制研究被引量：4: 2008年; 目的本研究旨在探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性cDNA克隆作为猪圆环病毒(PCV2)的主要免疫原开放阅读框架2(ORF2)表达载体的可行性,以及利用重组病毒对PRRSV复制转录过程进行解剖。方法以北美株PRRSV感染性克隆pAPRRS为平台进行反向遗传操作,分别在pAPRRS的ORF1和ORF2间,ORF5和ORF6间,ORF6和ORF7间插入PCV2ORF2,且对拯救病毒vPCV进行了病毒学及分子生物学鉴定。结果vPCV的sg mRNA2.1利用了PRRSV mRNA2的转录调控序列(TRS),形成由PRRSVGP2和PCV2衣壳蛋白组成的sgm RNA2.1。外源基因的插入同时也导致重组病毒启用新的TRS而产生3条新亚基因组,其中sgm RNA2.2和sgm RNA2.3采用PCV2上的序列来取代PRRSVRNA2本身的TRS;另一条sgm RNA2.4则为非经典型亚基因组,其TRS在PRRSV相应的AUG下游。结论2株PRRSV-PCV2重组病毒可以稳定传代,为进一步研发PRRSV遗传标疫苗奠定了基础;插入片段上一些类似TRS序列的引入及插入片段(718bp)过长导致PRRSV ORF2TRS本身和其两翼序列的RNA结构变化是引起重组病毒遗传不稳定性的最主要原因;PRRSV可以利用TRS样外源序列作为转录启动子,这为进一步解剖PRRSV复制转录过程奠定了基础。; 郑海红孙志朱兴全袁世山; 关键词：猪繁殖与呼吸道综合征病毒

高致病性猪蓝耳病病毒重组质粒和遗传工程疫苗: 本发明提供了一种高致病性猪蓝耳病病毒重组质粒的构建方法，以及根据该重组质粒构建的遗传工程疫苗及构建方法。根据蓝耳病病毒基因相对保守区的序列设计多对引物，分段扩增蓝耳病病毒基因序列，并依次连接到合适的载体中，获得猪蓝耳病病...; 袁世山吕健李祥健张建武余丹丹孙志高飞韦祖樟庄金山谭涛郑海红谭菲菲刘长龙陆嘉琦丛雁芳王小敏郑浩; 文献传递

猪繁殖与呼吸综合征病毒JX0612株全长感染性克隆的构建: 近年来在全国范围广泛流行的“猪无名高热”的主要病原之一为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。本研究根据PRRSV基因组序列设计特异性引物，分五段扩增了高致病性猪蓝耳病病毒JX0612株的全长cDNA，将各cDNA片段克...; 吕健孙志张建武刘维全袁世山; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性克隆猪蓝耳病发病机理; 文献传递

猪繁殖与呼吸综合征病毒基因表达调控序列的初步解析: 2011年; 猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是世界养猪业的一个巨大的威胁。近年来,此病给各国养猪业造成了巨大的经济损失。本文立足于反向遗传操作技术,介绍了调控PRRS病毒粒子的感染性、基因组RNA复制、亚基因组mRNA转录以及翻译等重要过程的顺式调控元件的一级序列和高级结构的最新研究进展。; 高飞孙志郑海红袁海峰刘长龙陆嘉琦刘萍尹扬袁世山童光志; 关键词：非翻译区茎环结构

正链RNA病毒反向遗传操作系统的建立及应用: 猪繁殖与呼吸障碍综合症(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS),俗称“蓝耳病”,首先发现于八十年代末(Keffaaber,1989)。其致病病原,猪繁殖与呼...; 袁世山高飞孙志姚火春秦爱健; 文献传递

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒转录调控序列TRS鉴定及其功能解析: 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)mRNA的合成采用独特的非连续性转录方式进行，对其发生及调控机制尚不清楚。本文利用RT-PCR技术确定了北美弱毒株PRRSV各个亚基因组mRNA的转录调控因子(TRS-B)的核心序...; 郑海红孙志朱兴全袁世山; 关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒; 文献传递

猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组3′末端保守序列对病毒复制影响的研究: ＜正＞猪繁殖与呼吸障碍综合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS）,俗称"蓝耳病",1987年首次发现。其致病病原为猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSV...; 刘长龙孙志高飞陆嘉琦袁世山; 关键词：反向遗传操作; 文献传递

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒转录调控序列TRS鉴定及其功能解析: 殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)mRNA的合成采用独特的非连续性转录方式进行,对其发生及调控机制尚不清楚.本文利用RT-PCR技术确定了北美弱毒株PRRSV各个亚基因组mRNA的转录调控因子(TRS-B)的核心序列(...; 郑海红孙志朱兴全袁世山; 文献传递

PRRSV-PCV重组病毒的构建及PRRSV转录调控机制研究: 本研究旨在探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性 cDNA 克隆作为外源基因表达载体的可行性,以及利用重组病毒对 PRRSV 复制转录过程进行解剖。以北美株 PRRSV 感染性克隆 pAPRRS 为平台进行反向遗...; 郑海红孙志朱兴全袁世山; 文献传递

猪蓝耳病病毒反向遗传操作及应用: 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)是套式(或巢状)病毒目(Nidovirales)动脉炎病毒科(Arteriviridae)的成员，目前对该类病毒复制的调控机制知之甚少。我国06年以来所暴发的所谓“猪高热综合症”对...; 袁世山余丹丹谭菲菲刘长龙袁海峰丛雁芳韦祖樟孙志高飞吕键王小敏庄金山李祥健张建武郑海红; 关键词：猪蓝耳病猪蓝耳病病毒反向遗传操作分子生物学; 文献传递