宋妮 作品数:6 被引量:17 H指数:2 供职机构: 中国农业科学院特产研究所 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 更多>>
PRRSV非结构蛋白2:病毒致病性、免疫和诊断中的一个关键蛋白 PRRS引起猪繁殖与呼吸系统疾病,是给养猪业带来重要经济损失的猪病.猪繁殖与呼吸系统综合征病毒(PRRSV)的复制酶非结构蛋白2(Nsp2)被认为是PRRSV基因组中最易变区域.本综述讨论了PRRSV Nsp2的分子生物... 王凤雪 宋妮 陈立志 程世鹏 武华 温永俊猪O型口蹄疫病毒重组结构蛋白的纯化及间接ELISA方法的建立 被引量:2 2013年 将猪O型口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)的VP0、VP1、VP3基因,通过SUMO融合表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,获得大小为55、48和40ku的融合蛋白,Western blotting检测结果表明,表达的蛋白质具有良好的生物学活性。采用亲和层析法纯化表达产物,分别以纯化的SUMO-VP0、SUMO-VP1、SUMO-VP3蛋白为抗原建立了FMDV的间接ELISA检测方法。200份田间血清样品的检测结果表明建立的SUMO-VP0-ELISA、SUMO-VP1-ELISA、SUMO-VP3-ELISA检测方法均具有良好的特异性和敏感性。 宋妮 王凤雪 孙娜 师新川 温永俊 武华关键词:SUMO 纯化 间接ELISA 利用SUMO表达系统高效表达猪O型口蹄疫病毒VP0、VP1、VP3基因 被引量:3 2013年 根据GenBank中公布的猪O型口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)全基因合成了FMDV结构蛋白前体蛋白P1基因,同时设计了扩增FMDV结构蛋白VP0、VP1和VP3基因的引物。以P1基因为模板,分别经PCR扩增获得FMDV VP0、VP1和VP3基因。扩增产物克隆于Blunt载体中,酶切后将目的片段连接到原核表达载体SUMO中,构建重组表达质粒SUMO-VP0、SUMO-VP1和SUMO-VP3,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS进行诱导表达。经SDS-PAGE电泳可见融合蛋白均获得高效表达,融合蛋白表观分子质量分别约为55、48和40 ku。在IPTG浓度为1.0 mmol/L,温度为37℃,诱导5 h时融合蛋白表达量最大。Western blotting结果表明,融合蛋白均可被FMDV阳性血清识别,反应原性良好。 宋妮 温永俊 王凤雪 武华关键词:SUMO 非结构蛋白2在猪繁殖与呼吸综合征病毒复制调控中的作用:基因沉默和过量表达的效果 猪繁殖与呼吸综合征是养猪业面临的重要的一个传染病,已经发展了很多控制疾病的疫苗策略,但还未完全成功.建立一个细胞系来获得高产量的PRRSV疫苗是必需的.为了确定高致病性PRRSV(HP-PRRSV)在MARC-145细胞... 王凤雪 温永俊 杨博超 刘准 师新川 冷雪 宋妮 武华 陈立志 程世鹏吉林地区高致病性PRRSV JL-04/12株的分离鉴定与全基因组测序 被引量:1 2013年 【目的】确定吉林省某疑似高致病性PRRS猪场的病原,研究其基因特性。【方法】采集疑似感染高致病性PRRSV病猪的脏器组织,处理后接种MARC-145细胞,观察细胞病变,分离PRRSV;应用RT-PCR方法检测和确定分离毒株的基因型,采用间接免疫荧光、电镜观察和全基因组测序检测分离的病毒。【结果】分离毒株为北美洲型PRRSV,命名为JL-04/12,其基因组全长为15 320bp(不包括PolyA),可使MARC-145细胞产生典型的细胞病变。序列比对结果表明:JL-04/12株与经典毒株VR-2332和CH-1a的核苷酸同源性分别为89.5%和94.9%;与高致病性毒株JXA1、HUN4的核苷酸同源性为99.1%。分离毒株JL-04/12编码的2个非结构蛋白和GP2~GP4的氨基酸序列与HUN4株同源性较高,在97.2%~99.3%,而JL-04/12编码的GP5的氨基酸序列与JXA1株同源性较高,为98.5%;JL-04/12编码的GP6和N蛋白的氨基酸序列与高致病性PRRSV毒株JXA1和HUN4的同源性均为100%。PRRSV JL-04/12株的Nsp2不连续缺失30个氨基酸,与高致病性PRRSV毒株JXA1和HUN4的同源性最高,均为97.8%,判定该分离株为变异的高致病性PRRSV。【结论】从吉林省分离到1株高致病性PRRSV,说明高致病性PRRS变异病毒在吉林省仍然存在。 王凤雪 郭利 温永俊 宋妮 杨艳玲 张淑琴 谭斌 武华关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒 全基因组测序 牛副流感病毒3型RT-LAMP检测方法的建立及应用 被引量:11 2012年 本试验根据GenBank中登录的牛副流感病毒3型(BPIV-3)基因序列,利用在线软件Primer Explorer V4Software和Primer Premier 5.0,针对BPIV-3 NP基因序列的保守区设计并筛选了一套环介导逆转录等温核酸扩增(RT-LAMP)引物,建立BPIV-3特异性检测的RT-LAMP方法。在Bst DNA聚合酶作用下,63℃恒温反应1h即可完成扩增过程,扩增产物通过浑浊度比较、凝胶电泳和肉眼可视化进行判定。结果表明,该方法比RT-PCR敏感度更高,最低检出量可达0.069fg/μL。该方法可用于牛副流感病毒3型的实验室检测和临床初步诊断。 师新川 温永俊 王凤雪 胡嘉欣 杨博超 王炜 宋妮 程世鹏 武华关键词:N基因