张凌云
- 作品数：95 被引量：281H指数：9
- 供职机构：北京林业大学林学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学文化科学医药卫生更多>>
- 青杄PsbO基因cDNA序列克隆及生物信息学分析被引量：1
- 2012年
- 利用RACE技术从已有的青杄均一化cDNA文库中克隆得到青杄(Picea wilsonii)PsbO基因cDNA的全长,并用生物信息学的方法对该cDNA的核苷酸序列、氨基酸序列的相似性,及编码蛋白PwPsbO的理化性质、亲水性/疏水性、二级和三级结构,PwPsbO基因进化树等进行了预测和分析.采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术,测定了青杄不同组织中的PsbO基因的相对表达水平.结果发现:青杄PsbO基因编码346个氨基酸,预测相对分子质量为36.6 kD,理论pI值为5.29,属于可溶性蛋白.二级和三级结构预测表明其含有较多的α螺旋、β折叠和随机卷曲结构.RT-qPCR发现该基因在青杄针叶和茎中表达量最高.这些结果为青杄中PsbO基因的初步功能研究奠定了基础.
- 刘亚静李长江孙帆张凌云
- 关键词：RACE生物信息学
- “林业专业英语”课程兴趣教学的探索被引量：2
- 2014年
- "林学专业英语"是林学专业本科生最重要的专业选修课程之一。针对目前学生在专业英语学习中易产生枯燥、乏味和缺乏学习积极性等问题,笔者在实践中探索了一种基于以学生为中心的兴趣教学理念和教学方法,建立了以学生为主体的新型教学模式,全方位激发学生的学习兴趣。首先,以丰富多样的教学方法、授课方式和教学内容激发学生学习的动力和兴趣,变"要我学"为"我要学";其次,用以学生自主学习为主、课堂教学为辅的教学模式提高学生学习的积极性,增强学生自主学习的能力;第三,从学生学习的基础差异性出发,倡导因材施教;第四,从学生撰写毕业论文的实际需求出发,增加科技论文写作的内容;第五,邀请多学科教师交叉授课,全方位展示林业相关领域的科技进展,以拓展学生的视野。实践证明,"林学专业英语"课程的兴趣教学,有效地调动了学生主动学习的能力,提高了学习兴趣和效果,促进了教学水平和教学质量的提高。
- 张凌云
- 关键词：林学专业专业英语兴趣教学教学探索
- 拟南芥转录因子NF-YC的原核表达及多克隆抗体制备被引量：7
- 2012年
- 采用PCR方法扩增NF-YC基因得到其全长cDNA序列,并将其克隆至原核表达载体pET-48b中,在大肠杆菌BL21中用IPTG诱导出分子量约为45 kD的融合蛋白,SDS-PAGE和Western blotting检测鉴定表达产物。利用亲和层析技术对融合蛋白进行纯化,纯化后的目的蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。间接ELISA检测抗体效价大于1 62 500,Western blotting结果显示,该抗体可特异性识别NF-YC蛋白。
- 卫静李长江刘亚静黄桂雪张凌云
- 关键词：拟南芥转录因子原核表达多克隆抗体
- 青杄PwHAP5基因原核表达及多克隆抗体制备被引量：1
- 2022年
- 制备青杄(Picea wilsonii)PwHAP5基因的特异性多克隆抗体,为研究PwHAP5基因功能、分子机制奠定基础。经PCR扩增获得青杄花粉PwHAP5基因片段与载体pET-48b相连构建原核表达载体pET-48b-PwHAP5。经诱导产生重组蛋白PwHAP5,通过His-NTA镍柱纯化蛋白产物。蛋白经SDS-PAGE检测后再免疫兔子制备兔抗血清。血清经ProteinA纯化后,通过SDS-PAGE和Western blot检测抗体纯度和特异性。结果表明,成功构建了原核表达载体pET-48b-PwHAP5,制备了分子质量约为45 kD的重组蛋白PwHAP5。获得的青杄PwHAP5兔抗血清经间接ELISA法检测效价达1∶729000以上;制备的PwHAP5蛋白兔多克隆抗体能特异性识别抗原,效价高,满足后续研究PwHAP5蛋白在青杄生长发育中的功能等需求。
- 覃雪晶王雨涵曹一博张凌云
- 关键词：原核表达蛋白纯化多克隆抗体
- 青杄PwUSP2基因的克隆和表达分析被引量：6
- 2015年
- 广泛逆境胁迫蛋白(USPs)参与碳缺乏、缺氧、干旱和高盐等多种非生物胁迫,但在植物中的研究尚不深入。本文通过RACE-PCR的方法获得青杄PwUSP2基因的c DNA全长,共987bp,其中编码区723 bp,共编码240个氨基酸。利用生物信息学工具对其理化性质、二级结构和三级结构进行分析,结果显示,该蛋白理论分子质量为26.84 kDa,理论等电点为4.61,有丝氨酸和苏氨酸结合位点,为非跨膜的亲水蛋白。PwUSP2具有USP家族典型的Usp A结构域,但无典型的ATP结合位点G-2X-G-9X-G[S/T]。RT-qPCR分析表明,PwUSP2在青杄花粉、果实、种子、成熟叶、幼叶、成茎中均有表达,在果实中表达量较高。同时,PwUSP2在脱落酸(ABA)、茉莉酸甲酯(MeJA)等非生物胁迫下表达量有明显变化,推测PwUSP2可能参与青杄对逆境胁迫的响应。
- 周燕妮李艳芳张通张凌云
- 关键词：胁迫响应
- 青杄FKBP23的克隆与组织特异性分析
- FKBP (FK506 binding protein)家族是一类免疫球蛋白,能特异与免疫抑制剂FK506结合。其家族普遍含有脯氨酸顺反异构酶活性(prolyl-isomerase activity),与亲环素(cycl...
- 李长江孙帆张凌云
- 关键词：克隆RT-PCR组织特异表达
- 青杄转录因子PwNAC30及其启动子序列的克隆与表达分析被引量：3
- 2019年
- 该研究以青杄(Picea wilsonii)为实验材料,通过PCR从青杄的cDNA文库中克隆得到一个NAC转录因子,命名为PwNAC30。生物信息学分析显示,PwNAC30开放阅读框1 179bp,共编码392个氨基酸,在其N端存在保守的NAM(no apical meristem)结构域,可分为A～E等5个亚结构域。多序列对比和系统进化树分析显示,PwNAC30蛋白与同为云杉属的北美云杉(Picea sitchensis)聚为一类。启动子克隆分析显示,PwNAC30基因启动子上存在脱落酸(ABA)、赤霉素(GA)、茉莉酸甲酯(MeJA)、TC-rich repeats等激素和逆境响应元件,在GA、ABA、MeJA、低温、干旱、盐的处理下,其启动子活性均明显增强。荧光定量PCR分析表明,PwNAC30在球果中的表达量最高,而在花粉和种子中的表达量最低。PwNAC30对于盐、干旱、低温、ABA、MeJA、GA处理均有响应,尤其对盐、干旱、MeJA的响应最为显著。亚细胞定位结果显示,PwNAC30蛋白定位于细胞核与细胞质,主要定位于细胞核中。酵母单杂及双杂结果表明,PwNAC30蛋白的全长和N端没有转录激活活性,而C端有转录激活活性,且PwNAC30自身能形成同源二聚体。研究表明,青杄PwNAC30基因可以作为一个转录因子发挥作用,其转录激活活性在C端,且自身能够形成同源二聚体结构;PwNAC30基因广泛参与了ABA、GA、MeJA等激素的信号通路,并对盐、干旱、低温处理有响应。
- 梁珂豪孙永江袁义杭张凌云
- 关键词：NAC转录因子启动子激素逆境响应
- 新农科建设背景下“经济林栽培学”课程实践教学改革的探索——以北京林业大学为例
- 2024年
- 北京林业大学开设的“经济林栽培学”课程涉及植物生理与病理、土壤、生态等多学科的内容,包括理论教学和实践教学两部分,目前是经济林本科专业和林学本科专业的核心专业课程。该课程的实践教学是培养具有创新思维的高质量人才的重要环节,但目前存在以下问题。一是实践教学未与教学对象各自的专业背景和专业特色紧密结合,未充分考虑不同专业学生未来职业需求的差异,缺乏个性化教学环节。二是实践教学仍以栽培环节为重点,对产学研融合重视不够,未密切跟踪产业发展的需求,缺乏对前沿技术的引入以及与大数据和信息技术的结合。三是实践教学内容侧重于栽培技术,主要针对特定区域的树种和栽培模式,缺乏系统性和全面性;实践时长较短,集中安排在冬季休眠期,实践教学内容与理论教学内容缺乏呼应。四是实践教学基地建设存在人力资源和经费投入不足、对合作企业的管理水平对实践教学效果的影响认识不足等问题,未建立高校与科研院所和相关企业共建实践基地的模式和运行机制。五是实践教学效果不佳,学生对经济林产业缺乏全面认知,学习兴趣不高,上课和选课的积极性大幅下降。因此,针对上述问题,采取以下措施进行了基于学生兴趣和不同专业各自特色的“经济林栽培学”课程实践教学改革探索。一是将思想政治教育元素和哲学思考融入实践教学,引导学生树立正确的专业思想和学习观念。二是结合经济林专业以及林学专业不同专业方向的各自特色,开展内容各有侧重的差异化实践教学。三是根据经济林的特性以及面向不同专业教学内容侧重有所不同的情况,设置包括基础性实践模块和拓展性实践模块的灵活多样的教学模块,并采取与之相适应的教学方式。四是根据不同专业背景学生已具备的专业理论知识基础和实践经
- 张凌云曹一博
- 关键词：经济林栽培学实践教学差异化教学个性化教学
- 青杄PwRhomboid基因表达特性及其抗旱作用
- 2024年
- 通过对青杄转录组测序分析,筛选出干旱响应基因PwRhomboid,分析该基因在耐旱方面的功能特性,为揭示青杄的耐旱机理提供理论基础。采用生物信息学对PwRhomboid的氨基酸序列和同源基因进行比对;利用RT-qPCR技术分析PwRhomboid对不同非生物胁迫和激素的响应情况;通过瞬时转化烟草叶片检测PwRhomboid蛋白的亚细胞定位;获得拟南芥和马铃薯的PwRhomboid转基因株系并进行干旱表型验证。研究结果显示,PwRhomboid的氨基酸序列在N端与其同源物种的氨基酸序列具有较大差异,在C端相似度较高,保守性较好;其蛋白主要定位于细胞膜。PwRhomboid的表达量经干旱、低温和脱落酸诱导后发生有显著变化,在成熟叶中表达量最高,其能够提高转基因拟南芥和马铃薯的耐旱性。经干旱处理后,与对照组拟南芥野生型和pCM1205株系相比,PwRhomboid过表达株系PwRhomboid-L1和PwRhomboid-L2的存活率更高,叶绿素荧光最大光化学效率和实际光化学效率更高;在经聚乙二醇模拟干旱处理后,与野生型相比,过表达株系PwRhomboid-L3、PwRhomboid-L4的马铃薯苗高更高。结果表明PwRhomboid的表达量会受到干旱等逆境和激素的影响,过表达PwRhomboid能够提高拟南芥和马铃薯的耐旱性。
- 杨沛欣刘奎李兴芬汪晴晴曹一博张凌云
- 关键词：耐旱性基因表达
- 青杄PwVQ1基因的克隆与表达被引量：1
- 2018年
- 以青杄cDNA为模板克隆得到青杄VQ基因,命名为PwVQ1。序列分析表明,PwVQ1基因的开放阅读框为819 bp,编码272个氨基酸。生物信息学分析发现,PwVQ1编码的蛋白理论分子量为69.05 k Da,PI值为5.03,为非跨膜的亲水性蛋白。PwVQ1具有VQ家族典型的Fxxx VQx LTG结构域。实时荧光定量PCR分析结果表明,PwVQ1在青杄的根、茎、叶、花粉、果实、种子中都有表达,在根和叶中表达量十分显著;PwVQ1在不同逆境处理下均有响应。4℃冷胁迫下,PwVQ1的表达量在3 h时先下调,在6 h时明显上调,达到8倍左右,在12 h时表达量再次下调。42℃高温胁迫下,PwVQ1的表达量下调。在盐胁迫下,干旱胁迫和ABA处理下,PwVQ1的表达量均上调。推测PwVQ1参与干旱、ABA、高温、低温、盐胁迫等非生物胁迫的响应。
- 胡安妮张凌云
- 关键词：组织特异性表达逆境响应生物信息学分析
