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金黄色葡萄球菌RNaseH Ⅰ、RNaseH Ⅱ和RNaseH Ⅲ突变菌株的构建及功能研究: 2010年; 目的:在金黄色葡萄球菌中分别构建RNaseHⅠ、RNaseHⅡ和RNaseHⅢ的突变菌株,并研究它们在金黄色葡萄球菌中的生物学功能。方法:利用同源重组的方法在金黄色葡萄球菌中分别构建RNaseHⅠ、RNaseHⅡ和RNaseHⅢ的插入突变菌株,检测突变株生长速度、溶血活性及外分泌蛋白表达水平与野生型的差异,进一步通过流式细胞术检测突变株外分泌蛋白细胞毒性的改变,同时在体外检测突变株在全血中的存活能力。结果:构建了金黄色葡萄球菌RNaseHⅠ、RNaseHⅡ和RNaseHⅢ的插入突变菌株;表型检测结果显示,与野生型菌株相比,3种突变株的生长速度减慢,溶血素和外分泌蛋白明显减少;流式细胞术检测结果显示3种突变株毒性比野生型菌株减弱;全血杀伤实验结果显示3种突变株在全血中的存活率低于野生型菌株。结论:RNaseHⅠ、RNaseHⅡ和RNaseHⅢ在金黄色葡萄球菌生长繁殖、毒素产生和侵袭机体的过程中有重要作用,它们可能与金黄色葡萄球菌的致病性相关。; 吴娜刘玉董洁高亚萍张鑫牟春花邵宁生杨光; 关键词：金黄色葡萄球菌突变

金黄色葡萄球菌traP突变菌株的构建和功能研究: 2010年; 目的通过构建traP突变菌株研究RNAⅢ激活蛋白靶蛋白(TRAP)蛋白在金黄色葡萄球菌(SAU)中的功能。方法利用同源重组的方法在金黄色葡萄球菌(SAU)8325-4中构建traP的缺失突变菌株,对其表型和几种压力条件下的生长和生存状况进行检测,揭示其在金黄色葡萄球菌生命活动中的作用。结果在金黄色葡萄球菌8325-4中成功构建了traP的缺失突变菌株,突变株生长缓慢,其他表型如疏水性、表面电荷和生物膜发生了明显的变化;在重金属、过氧化氢,以及全血杀伤等压力条件下的生长和生存状况也发生了明显改变。结论TRAP蛋白在金黄色葡萄球菌侵袭机体的过程中发挥着重要的功能。; 吴娜刘玉董洁高亚萍张鑫邵宁生杨光; 关键词：TRAP TRAP 突变

金黄色葡萄球菌Efb蛋白的表达、纯化及功能抗体的制备被引量：3: 2009年; 目的:利用大肠杆菌重组表达金黄色葡萄球菌外分泌蛋白Efb(extracellular fibrinogen-binding protein,细胞外纤维蛋白原结合蛋白),检测其生物学活性,并制备其功能性抗体,以探讨Efb蛋白在金葡菌感染中的生物学意义。方法:以金黄色葡萄球菌NCTC-8325菌株基因组为模板,PCR扩增efb基因,构建重组表达载体pET28a-Efb,转化大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG诱导表达,通过Ni柱亲和纯化获得Efb;通过补体激活试验及竞争ELISA的方法检测Efb蛋白的生物学活性,免疫动物制备抗体。结果:获得了纯度较高的重组Efb蛋白,重组蛋白能够有效抑制CH50以及AH50,并且制备了Efb的功能性多克隆抗体。结论:Efb蛋白能够抑制补体激活的经典途径及替代途径,其特异性抗体能够阻断对于补体激活经典途径的抑制作用。; 张鑫高亚萍董洁刘玉吴娜邵宁生杨光; 关键词：葡萄球菌金黄色 EFB 抗体

金黄色葡萄球菌Efb蛋白C端抗原表位及其制备方法和用途: 本发明属于蛋白质工程和分子生物学及免疫学领域，涉及金黄色葡萄球菌来源的蛋白Efb抗原表位及其制备方法和用途。通过体外重组表达Efb蛋白结合噬菌体筛选技术，获得一条抗原表位肽EC1。进而，通过CH50试验、C3/Fibri...; 杨光高亚萍张鑫董洁刘玉; 文献传递

金黄色葡萄球菌ltaS突变株的构建与eLtaS蛋白的表达被引量：1: 2012年; 目的通过构建金黄色葡萄球菌(SAU)ltaS突变株以及体外重组表达其胞外形式的eLtaS蛋白,研究LtaS以及eLtaS蛋白在SAU中的生物学功能。方法利用同源重组的方法构建SAU 8325-4来源的ltaS缺失突变菌株,并对其生长以及外毒素水平进行检测;同时,在大肠杆菌中,体外重组表达并纯化eLtaS蛋白,继而观察其对SAU生长的影响。结果在SAU 8325-4中成功构建了ltaS缺失突变菌株,并发现ltaS突变株生长较野生型菌株缓慢;通过表达纯化成功获得高纯度的eLtaS蛋白,其与突变株共培养后对突变株的生长缓慢现象没有回复作用。结论 LtaS蛋白在SAU侵袭机体的过程中发挥着重要的功能,其胞外形式的eLtaS蛋白可能未参与脂磷壁酸(lipotei-choic acid,LTA)的合成。; 芦强牟春花张鑫刘玉董洁高亚萍杨光; 关键词：突变

金葡菌Efb蛋白通过抑制血小板聚集引发感染的机制研究: 金黄色葡萄球菌(Staphylococcal aureus)是一种广泛存在的革兰氏阳性致病菌，能够引起皮肤黏膜、多种组织器官的化脓性炎症，也可由此导致危及生命的败血症、心内膜炎、肺炎、脑膜炎等;此外，尚可引起异物相关感染...; 张鑫; 关键词：金黄色葡萄球菌血小板聚集

金黄色葡萄球菌Efb蛋白C端抗原表位及其制备方法和用途: 本发明属于蛋白质工程和分子生物学及免疫学领域，涉及金黄色葡萄球菌来源的蛋白Efb抗原表位及其制备方法和用途。通过体外重组表达Efb蛋白结合噬菌体筛选技术，获得一条抗原表位肽EC1。进而，通过CH50试验、C3/Fibri...; 杨光高亚萍张鑫董洁刘玉

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张鑫