徐云升
- 作品数：87 被引量：271H指数：9
- 供职机构：温州医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金温州市科技计划项目浙江省医药卫生科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学语言文字更多>>
- 重组原核表达载体pGEX-4T-1-eIF5A的构建及表达被引量：1
- 2012年
- 目的构建人eIF5A基因的融合表达载体并在大肠杆菌中诱导表达pGEX-4T-1-eIF5A融合蛋白。方法以pCMV6-XL4-eIF5A作为模板,经PCR技术扩增目的片段,将获得的目的片段重组到原核表达载体pGEX-4T-1上,经酶切鉴定、DNA测序检测插入序列的正确性。将测序正确的重组表达质粒pGEX-4T-1-eIF5A转化到E.coliBL21内,经IPTG诱导后,GSTpull-down后SDS-PAGE电泳分析以及Western blot检测人eIF5A的表达。结果成功构建重组表达质粒pGEX-4T-1-eIF5A,经DNA测序证实插入序列与设计完全一致,GSTpull-down后电泳分析以及Westernblot结果说明大肠杆菌BL21诱导后表达出人eIF5A的glutathioneS-transferase(GST)融合蛋白。功能研究初步证明重组eIF5A在细胞增殖过程中发挥重要作用。结论构建成功的重组原核表达载体能在E.coliBL21内表达eIF5A的GST融合蛋白,为进一步研究人eIF5A蛋白的结构和生理功能如促进创伤修复提供帮助。
- 邱伟李向云王晓慧徐祥黄宏徐云升
- 关键词：质粒融合蛋白
- 尖锐湿疣患者HPV型别与血清白介素-2水平相关研究被引量：1
- 2009年
- 为了探讨温州地区尖锐湿疣（CA）的细胞因子表达水平与HPV型别的关系。我们采用双抗体夹心ELISA法对感染HPV不同抗原的CA患者血清进行白介素-2（IL-2）水平检测。现将结果报道如下。
- 林霖霖张学奇李智铭胡燕陈云琴张旭黄好好蔡剑峰吴慧珍徐云升张洪勤
- 关键词：细胞因子表达水平血清白介素-2HPV型别尖锐湿疣双抗体夹心ELISA法
- 皮质类固醇冲击治疗重叠结缔组织病并发腹膜炎和肺炎1例被引量：1
- 2003年
- 徐云升郝飞叶庆佾郝进
- 关键词：皮质类固醇重叠综合征腹膜炎原发性肺炎原发性
- 十肽表位HPV-16E7_(11-20)氨基酸置换修饰的研究被引量：6
- 2006年
- 目的采用氨基酸置换对人乳头状瘤病毒16型E7抗原的人白细胞抗原A2分子限制性细胞毒性T细胞表位HPV-16E7_(11-20)进行修饰和鉴定。方法运用量化模体方案对置换后的多肽与人白细胞抗原A2分子的结合系数进行比较,以分子模拟方法确定合成序列,采用标准Fmoc方案进行合成与纯化多肽以及标准^(51)Cr释放试验检测特异性细胞毒性T细胞诱导活性。结果修饰多肽符合人白细胞抗原A2分子限制性细胞毒性T细胞的表位要求,十肽YLLDLQPEVT具有特异性细胞毒性T细胞诱导活性。结论修饰表位YLLDLQPEVT具有更好的结合力和较强的抗原性,可以代替原有序列E7_(11-20)(YMLDLQPETT)作为人乳头状瘤病毒感染治疗性肽疫苗分子设计的新表位。
- 欧荣英徐云升林治华郝飞倪兵吴玉章
- 关键词：人乳头状瘤病毒E7抗原分子修饰
- HLA-A＊0201／HPV-18E7 7-15五聚体的构建及其初步应用被引量：3
- 2007年
- 目的构建人乳头状瘤病毒18型（HPV-18）特异性HLA-A2肽五聚体，为HPV-18型抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的检测提供直接、有效的方法，并将其初步应用于宫颈癌患者外周血中抗原特异性CTL的检测。方法构建含有HLA-A2-BSP和β2M基因的原核表达载体，并进行表达、复性、鉴定及纯化。再将特异性短肽与HLA-A2-BSP和β2M在体外进行耦合，该复合物经纯化浓缩后进行生物素化。生物素化的产物经纯化浓缩后形成单体，此单体再与藻红蛋白标记的链霉亲和素按一定比例耦合构建成五聚体。运用所构建的五聚体，通过流式细胞仪检测宫颈癌患者外周血中抗原特异性CTL，并与正常对照组进行比较分析。结果所构建的pBV220-HLA-A2-BSP和pBV220-β2M原核表达载体的表达高效而且稳定，纯度达90％以上。HPV-18阳性宫颈癌患者体内抗原特异性CTL计数明显高于对照组（P〈0．05）。结论在五聚体复合物的构建中，高效、稳定的pBV220-HLA-A2-BSP和pBV220-β2M原核表达载体是构建成功的基础。所构建的MHC I类分子五聚体和传统的四聚体相比，作为体内、外HPV-18E7抗原特异性CTL检测的有效工具，具有一定优势。
- 徐云升欧荣英吴玉章林治华倪兵
- 关键词：人白细胞抗原细胞毒性T淋巴细胞
- 宫颈癌细胞GM-CSF与COX-2/iNOS表达的相关性研究被引量：1
- 2014年
- 目的研究宫颈癌细胞中人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的表达对环氧合酶-2(COX-2)和诱导性一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响,探讨GM-CSF在宫颈癌发生发展中的作用。方法收集临床宫颈癌标本52例及正常宫颈15例和宫颈上皮内瘤变(CIN)组织标本21例作为对照进行免疫组织化学染色,分析宫颈癌组织GM-CSF的表达与COX-2和iNOS表达的相关性;为了从细胞水平进一步论证其相关性,本实验使用宫颈癌细胞系Caski细胞,Caski细胞经GM-CSF转染后过表达GM-CSF,并通过RT-qPCR和Western blot检测COX-2和iNOS mRNA及蛋白的表达情况,以空质粒转染的Caski细胞为对照,在细胞模型中探讨GM-CSF强制表达对COX-2和iNOS表达的影响。同时,通过GM-CSF siRNA干扰Caski细胞GM-CSF表达后,用RTqPCR及Western blot方法检测iNOS/COX-2 mRNA及蛋白表达情况。结果免疫组化结果显示,宫颈癌组织GM-CSF表达明显低于正常组和CIN组(P均<0.05),而COX-2及iNOS的表达显著高于正常组(P<0.01),但与CIN组无明显差异;统计学分析发现GM-CSF与COX-2/iNOS的表达呈负相关(r=-0.542/-0.499)。细胞水平结果显示与空质粒转染的细胞相比,转染GM-CSF的Caski细胞COX-2/iNOS在mRNA及蛋白表达水平都有显著下降(P均<0.05);GM-CSF在被干扰后,干扰组与对照组相比COX-2/iNOS在mRNA及蛋白表达水平有明显差异(P均<0.05)。结论在组织和细胞表达水平GM-CSF与COX-2/iNOS的表达均呈负相关,GM-CSF可能通过下调COX-2/iNOS表达而具有抗宫颈癌作用。
- 姜南雁聂刚邱伟袁跃跃倪兵徐云升
- 关键词：GM-CSF宫颈癌环氧合酶-2诱导性一氧化氮合酶
- 外用5%咪喹莫特乳膏治疗湿热蕴结型尖锐湿疣所致创面感染的处理
- 2010年
- 目的:探讨局部外用5%咪喹莫特乳膏治疗尖锐湿疣创面感染的细菌谱特点及其对创面愈合的影响。方法:收集门诊2008年1月-2009年6月局部外用5%咪喹莫特乳膏治疗的112例尖锐湿疣创面分泌物,并进行药敏试验,将感染患者随机分为2组,一组进行局部湿敷治疗,一组同时使用抗生素治疗,比较2组创面恢复情况。结果:112例患者中有104例培养出16种细菌,局部湿敷治疗组和根据药敏试验结果同时使用抗生素治疗组在疗效上无明显差异。结论:局部外用5%咪喹莫特乳膏治疗尖锐湿疣导致的创面感染菌种较多,但全身抗感染治疗对创面愈合无重要意义,局部湿敷处理可以迅速恢复创面。
- 蔡剑峰欧荣英徐云升张学奇李秉煦
- 关键词：尖锐湿疣咪喹莫特感染创面
- 结直肠癌ADAMs表达谱及其ADAM-28的表达及意义
- 2017年
- 目的探讨金属蛋白酶解离素(ADAMs)家族成员ADAM-8、ADAM-9、ADAM-10、ADAM-12、ADAM-15、ADAM-17、ADAM-19、ADAM-28、ADAM-33在结直肠癌中的表达分布,并分析ADAM-28表达与结直肠癌临床病理特征的关系及其对预后的影响。方法实时荧光定量PCR(QPCR)检测6例新鲜结直肠癌组织和对应癌旁组织中ADAMs mRNA的表达,Western blotting检测ADAM-28蛋白在上述样本中的表达。免疫组化法检测ADAM-28在218例结直肠癌组织中的表达,分析ADAM-28表达与临床病理特征和预后的关系。结果 ADAM-8、ADAM-9、ADAM-17、ADAM-28和ADAM-33 mRNAs在结直肠癌组织中表达升高,ADAM-12表达下调,ADAM-10、ADAM-15和ADAM-19无明显变化。ADAM-28蛋白表达在结直肠癌组织中也升高。免疫组化检测显示,结直肠癌组织中ADAM-28的阳性表达率为68.8%(150/218),其表达与淋巴结转移(P=0.032)、TNM分期(P=0.032)和分化程度(P=0.019)有关。ADAM-28阳性表达者的中位总生存时间(OS)明显劣于ADAM阴性表达者(36.75个月vs.95.10个月),差异有统计学意义(P<0.001)。Cox多因素分析显示,ADAM-28是影响OS的独立因素(P<0.05)。结论 ADAM-28表达与结直肠癌的发生、发展密切相关,是潜在评估结直肠癌预后的预测因子。
- 王金蒙朱莉王晶莹李文峰徐云升
- 关键词：结直肠癌
- 氟芬那酸丁酯软膏治疗儿童特应性皮炎的临床疗效观察被引量：11
- 2014年
- 目的评价氟芬那酸丁酯软膏联合肤舒止痒膏外用治疗儿童特应性皮炎的临床疗效和安全性。方法将皮肤科门诊自2010年7月q012年6月的儿童特应性皮炎患者122例，皮疹无明显糜烂、渗出和结痂。符合Williams所制定的AD诊断标准。随机分为治疗组和对照组，每组61例。治疗组患者联合应用氟芬那酸丁酯软膏和肤舒止痒膏，对照组外采用糠酸莫米松软膏涂抹皮损处，临床观察疗程为2周。所有病例在治疗结束后均进行SCORAD评分和有效率的评价。结果男性患者74例，女性患者48例，年龄2～7周岁，病程1月～7年；治疗前，治疗组及对照组皮疹积分无显著性差异，分别为12．44±2．31和11．98±3．12；治疗后，治疗组皮疹积分（5．13±3．47）显著低于对照组（7．72±4．08），两者相比差异有统计学意义（P〈0．01）。治疗组患者症状的SCO—RAD评分总积分为8．10±3．35，显著低于对照组患者的11．20±3．97，（P〈0．01）；治疗前，治疗组及对照组瘙痒积分无显著性差异，分别为6．59±1．74和6．26±1．86；治疗后，治疗组瘙痒积分（2．97±1．01）略低于对照组（3．48±1．27），但两者相比差异无统计学意义（P〉0．05）；治疗组患者的有效率为49．18％，明显高于对照组患者的24．59％，（P〈0．01）。2组患者均未出现各种药物相关的临床不良反应。结论运用氟芬那酸丁酯软膏联合肤舒止痒膏治疗儿童特应性皮炎，安全性较高，治疗效果较为明确，适合在临床上广泛运用。
- 蔡剑峰张学奇邵笑红吕明芬李智铭李秉煦徐云升
- 关键词：氟芬那酸丁酯特应性皮炎有效率
- HPV18E7抗原HLA-A2限制性CTL表位的初步筛选被引量：9
- 2007年
- 目的:初步筛选人乳头瘤病毒18型E7抗原的HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞(CytotoxicTlymphocyte,CTL)表位,为表位免疫原性鉴定提供靶肽。方法:采用超基序、多项式和量化基序方案相结合的方法,对靶抗原HPV18E7的HLA-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞表位进行预测,并应用固相合成法合成多肽,经RP-HPLC纯化及纯度分析,用质谱进行定性鉴定。结果:分别预测出5条、1条和6条九肽表位,综合三种预测方案确定其中1条为候选合成表位,合成肽的纯度大于95%,经质谱分析合成肽的分子量测定值与理论值相符。结论:超基序、多项式和量化基序方案联合应用提高预测效率,避免了在研究HPV18E7抗原表位时盲目合成多肽;所合成的多肽为高纯度靶肽,为后继的抗原表位的免疫原性的鉴定奠定了实验基础。
- 张乾郑飞云徐云升欧荣英余剑琴
- 关键词：乳头瘤病毒表位E7抗原基序
