徐建敏
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 供职机构：东南大学附属中大医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- RNAi下调hENT1可增强5-氟尿嘧啶对胰腺癌细胞G0／G1期的阻滞作用
- 2009年
- 目的:运用RNAi技术下调平衡型核苷转运蛋白1(hENT1)的表达,观察hENT1下调后5-氟尿嘧啶(5-FU)对胰腺癌Panc-1细胞周期阻滞作用的改变情况。方法:设计并构建能表达特异性针对hENT1的shRNA的重组质粒pSilence-hENT1 4.1-CMV neo,用脂质体Lipofectamin 2000将重组质粒转染胰腺癌Panc-1细胞,并以含G418(600μg/ml)的培养液筛选阳性转染细胞(pSilence-hENT1 Panc-1)。RT-PCR检测下调hENT1 mRNA表达的效果及稳定性。用流式细胞仪检测hENT1下调前后Panc-1细胞在相同浓度5-FU(20μmol/L)中24h后的细胞周期。结果:测序显示重组质粒pSilence-hENT1 4.1-CMVneo中插入片段序列正确。RT-PCR结果显示pSilence-hENT1 Panc-1细胞hENT1mRNA表达水平下调,并在2个月内(共传代15次)保持相对稳定。细胞周期检测结果显示在相同浓度5-FU的作用下,hENT1下调组胰腺癌细胞的G0/G1期百分比为未下调组的1.20倍(P<0.01),S期百分比则是未下调组的66.76%(P<0.01)。结论:抑制hENT1的表达可以增强5-FU对胰腺癌细胞的G0/G1期阻滞作用,从而可提高其抗癌效果。
- 陈武强刘胜利徐建敏
- 关键词：胰腺癌RNA干扰5-氟尿嘧啶细胞周期
- 干扰hENT1表达增加5-FU在胰腺癌SW1990细胞内浓度被引量：6
- 2008年
- 目的明确hENT1在5-FU跨膜转运和返流中的作用,以及返流对5-FU在细胞内浓度的影响。方法将能特异性下调hENT1的重组及对照质粒用脂质体法转染到SW1990细胞内,RT-PCR检测hENT1 mRNA表达情况。分别培养SW1990、pSilence-hENT1Si SW1990、pSilence-Control SW1990细胞,3组细胞均置于含5-FU100mg·L-1的DMEM中温浴。各组取等量细胞刮取液两份,一份用毛细管区带电泳测定5-FU含量、另一份作平行样本测定蛋白含量,最后计算细胞内5-FU浓度。结果pSilence-hENT1Si SW1990细胞hENT1 mRNA表达水平下调0.5。SW1990组用5-FU温浴后,细胞内5-FU浓度在早期迅速升高,120min后处于平台期。pSilence-hENT1Control-SW1990组与SW1990组相比无差异(P>0.05)。而pSilence-hENT1SiSW1990细胞内5-FU浓度早期上升较慢,但随着时间延长,浓度逐渐升高,120min后细胞内浓度稳定,高于对照组中浓度(P<0.05)。结论干扰hENT1表达可以提高5-FU在SW1990细胞内浓度。hENT1是SW1990细胞向外返流5-FU的主要通道。
- 徐建敏张红刚费晓庆鞠熀先郑杰刘胜利
- 关键词：5-氟尿嘧啶胰腺癌细胞株毛细管区带电泳
- 下调hENT1可抑制胰腺癌细胞株Sw1990对吉西他滨的跨膜转运被引量：2
- 2008年
- 目的:明确下调hENT1后对胰腺癌细胞株Sw1990跨膜转运吉西他滨的影响。方法:将能特异性下调hENT1的pSilence-hENT14.1-CMV neo的重组质粒以及对照质粒转染至胰腺癌Sw1990细胞内。采用G418筛选阳性克隆细胞,RT-PCR检测hENT1mRNA表达情况。培养Sw1990细胞、pSilence-hENT1Si-Sw1990、pSilence-Control-Sw1990细胞,3组细胞培养基中吉西他滨质量浓度均为100μg/mL,温育0,15,30min,1,2,4h后收集细胞。取等量细胞悬液两份各100μL,一份作为检测样本用毛细管区带电泳测定吉西他滨总量,另一份用作平行样本测定总蛋白含量。根据蛋白-细胞数量标准曲线来确定平行样本中细胞数,再用血细胞分析仪确定细胞体积,最后,计算单细胞内药物总量及浓度。结果:pSilence-hENT1Si-Sw1990细胞的hENT1mRNA表达水平下调50。Sw1990组用含吉西他滨(100μg/mL)的DMEM培养基温育后,细胞内药物质量浓度在30min达(55.1±10.4)μg/mL,60min达(70.2±7.8)μg/mL,120min后处于平台期(90.1±6.0)μg/mL。相比之下,pSilence-hENT1Si-Sw1990组细胞内质量药物浓度30min达(41.3±4.9)μg/mL,60min达平台期(51.3±11.8)μg/mL,与对照组相比,细胞内浓度处于较低水平(P<0.05)。pSilence-hENT1control-Sw1990组与Sw1990组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:下调hENT1可以抑制胰腺癌细胞株Sw1990对吉西他滨的摄取,hENT1是吉西他滨跨膜转运的重要通道。
- 张红刚徐建敏费晓庆鞠煌先刘胜利
- 关键词：RNA干扰吉西他滨毛细管区带电泳胰腺癌细胞株
