李敏
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：上海交通大学附属第一人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“十一五”国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 短发卡RNA稳定沉默FOXM1对肝癌细胞体外生长的影响被引量：1
- 2011年
- 目的探讨短发夹RNA（short hairpinRNA，shRNA）表达载体稳定沉默叉头框M1（forkheadboxM1，FOXMl）基因对人肝癌细胞体外生长的影响。方法构建针对人类FOXMlmRNA的不同干扰靶点的4个shRNA表达载体，选择干扰效果最佳的表达载体和阴性对照质粒转染人肝癌细胞QGY-7703，用新霉素（G418）筛选稳定转染的克隆。用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法和平板克隆形成实验检测FOXMl基因沉默前后肝癌细胞体外生长能力的变化。用AnnexinV—APC／PI双染法检测细胞凋亡。结果不同人肝癌细胞株中普遍表达FOXM1蛋白。4个shRNA表达载体中，shRNA-1026表达载体的干扰效果最佳，对FOXM1mRNA和蛋白表达水平的抑制率分别为38．5％和53．2％。用shRNA-1026稳定沉默FOXM1基因后，QGY-7703细胞增殖受到抑制，培养48、72和96h后，沉默组的吸光值均显著低于对照组（分别t=10．830，3．578，5．734，均P〈0．05）；沉默组的克隆形成能力较对照组显著降低（t：5．336，P〈0．05），而细胞凋亡较对照组显著增加（t=6．827，P〈0．05）。结论shRNA表达载体稳定沉默FOXM1基因抑制肝癌细胞的生长。
- 孙红成李敏陆吉麟金栋严东旺周崇治樊军卫唐华美彭志海
- 关键词：肝肿瘤RNA干扰基因沉默
- 抑制BMI-1表达可增强人肝癌细胞对多柔比星的敏感性被引量：1
- 2015年
- 目的 :研究RNA干扰技术抑制B细胞特异性小鼠白血病病毒插入位点1(B cell-specii c murine leukemia virus integration site-1,BMI-1)基因表达对肝癌细胞多柔比星(doxorubicin,Dox)化疗耐药性的影响及其相关分子机制。方法 :建立Dox耐药的人肝癌细胞系MHCC-97H/Dox(简称97H/Dox),同时以其亲本细胞系MHCC-97H(简称97H)为对照;采用MTT、细胞克隆形成和Transwell侵袭实验分别检测细胞的耐药性、克隆形成能力和侵袭能力;实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测细胞中肿瘤相关分子的m RNA和蛋白表达水平。采用小干扰RNA(small interference RNA,si RNA)瞬时转染的方法抑制2种细胞中BMI-1基因的表达,然后再用MTT法检测耐药细胞97H/Dox和亲本细胞97H对Dox的耐药性变化,以及采用蛋白质印迹法检测亲本细胞97H中肿瘤相关蛋白的表达变化。结果 :肝癌耐药细胞系97H/Dox的耐药性稳定,并呈多药耐药特点,其克隆形成数也明显多于亲本细胞97H(P<0.05);相对于97H亲本细胞,97H/Dox耐药细胞中BMI-1、ATP结合转运蛋白G超家族成员2(ATPbinding cassette superfamily G member 2,ABCG2)和金属基质蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)分子的表达水平上调(P值均<0.05)。si RNA介导的BMI-1基因沉默可以显著提高97H亲本细胞及97H/Dox耐药细胞对化疗药物Dox的敏感性(P值均<0.05)。在97H亲本细胞中,BMI-1基因沉默可显著降低磷酸化Akt(phospho-Akt,p-Akt)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phospho-c-Jun N-terminal kinase,p-JNK)和ABCG2的表达水平(P值均<0.05)。结论 :BMI-1基因表达上调可能参与97H细胞耐药性的获得,抑制BMI-1表达可增强该细胞对化疗药物Dox的敏感性。因此,干预BMI-1表达可能是提高肝癌化疗反应性的一个候选策略。
- 李敏孙红成薛鹏洪艳田聆
- 关键词：肝肿瘤抗药性肿瘤多柔比星BMI-1基因
