杨卫东
- 作品数：17 被引量：25H指数：3
- 供职机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市青年科技启明星计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CEA微型抗体载体的构建及在大肠杆菌中的高效表达被引量：1
- 2000年
- 目的制备适合放免显像的抗癌胚抗原微型抗体。 方法在已获得的抗癌胚抗原重链可变区 (VH)及轻链可变区 (VL)基因的基础上将重链可变区 (VH)与轻链可变区 (VL)基因直接连接制成微型抗体基因 ,并在大肠杆菌进行表达。 结果大肠杆菌高效表达了微型抗体C端 6×His的融合蛋白 ,表达量达菌体总蛋白的 15 % ,SDS -PAGE和Western印迹显示表达物分子量为 2 6kd与基因编码蛋白的理论推算值相符 ,RIA表明表达物与CEA特异性结合。
- 杨卫东李彪朱承谟廖文韬吴祥甫
- 抗癌胚抗原单链抗体基因与Mn-SOD基因的融合及在昆虫细胞中的表达
- 2002年
- 将抗癌胚抗原单链抗体基因与锰 超氧化物歧化酶基因融合 (ScFv Mn SOD )插入昆虫杆状病毒供体质粒pFastBacHTb中 ,经大肠杆菌DH1 0Bac体内转座 ,产生重组杆状病毒pBacHTb Mn SOD ScFv。将其转染粉纹夜蛾Tn 5B1 4细胞 ,经扩增后在细胞内进行表达。SDS PAGE分析结果表明 ,融合基因得到高效表达 ,其表达产物相对分子质量为 40 0 0 0单体和 1 60 0 0 0左右的四聚体。Western印迹分析结果 ,以 6×His单克隆抗体为一抗进行蛋白印迹在相对分子质量 40 0 0 0单体和 1 60 0 0 0四聚体处可见表达条带 ,放射免疫分析表明重组杆状病毒表达ScFv Mn SOD融合蛋白能与CEA有较高的结合力 ,并且此融合蛋白具有特异SOD酶活性 ,酶比活可达 32 6 5u/mg。
- 杨卫东李彪朱承谟吴祥甫
- 关键词：癌胚抗原单链抗体肿瘤免疫学
- 肿瘤反义显像技术中的若干问题被引量：3
- 1998年
- 反义显像是用放射性核素标记人工合成的反义寡核苷酸，经体内核酸杂交而显示特异基因表达或过度表达的组织。反义显像具有不引起免疫反应、探针分子小、易进入瘤组织等优点。反义显像要求标记的反义核酸易于透过细胞膜、在细胞内稳定、不易分解、并能特异性聚集于靶组织。因此，须对反义寡核苷酸进行化学修饰，增强其细胞通透性和膜内稳定性；利用受体或脂质体介导使反义寡核苷酸定向导入靶细胞；选择合适的放射性核素采用标记简单、标记率高、非特异性结合低且不影响反义寡核苷酸生物活性的标记方法，使其合乎显像要求。成功的反义显像对肿瘤的诊断具有重要意义。
- 杨卫东
- 关键词：反义显像肿瘤放射性核素反义寡核苷酸
- 中枢神经系统靶向性Mn-SOD的克隆和在大肠杆菌中的表达研究被引量：4
- 2001年
- 靶向性超氧化物歧化酶 (SOD)是治疗氧自由基引起神经细胞损伤所致疾病等的有效途径 .将破伤风毒素C部分 (tetanustoxinfragmentC ,TTC)基因与编码Mn SOD的cDNA融合克隆进pET 2 2b(+)载体 ,1mmol/L异丙基 D 硫代半乳糖 (IPTG)诱导在大肠杆菌中表达 .SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)图谱可见约 71ku有表达产物条带 ,与理论计算值相符 ;蛋白质印迹 (Westernblot)分析显示 ,表达产物与抗Mn SOD及破伤风毒素的多抗有免疫反应 ,而且表达产物用邻苯三酚自氧化法测定具有SOD活性 .融合蛋白可作为有效的试剂靶向性输送Mn SOD到神经元细胞 。
- 张艳红贺华君袁勤生杨卫东吴祥甫
- 关键词：锰超氧化物歧化酶中枢神经系统克隆
- 抗癌胚抗原单链抗体与核心链霉亲和素融合蛋白在荷瘤裸鼠体内的预定位显像被引量：3
- 2002年
- 目的 研究1 53Sm 生物素和抗癌胚抗原单链抗体与核心链霉亲和素融合蛋白 (CEAScFv core streptavidin)在荷人结直肠癌裸鼠体内的两步法预定位显像和体内分布。方法 对 2 3只荷人结直肠癌裸鼠腹腔注射CEAScFv core streptavidin进行预定位 ,2 4h后腹腔注射1 53Sm 生物素 ,其中2 0只于 1、4、8和 2 4h进行体内分布研究 ,余 3只于 8和 2 4h进行定位显像。结果 在荷人结直肠癌裸鼠腹腔注射CEAScFv core streptavidin预定位后 2 4h ,注射1 53Sm 生物素后 1h ,肿瘤 血比值为 0 .4 9,4和 8h达 1.2 1和 1.5 6 ,2 4h达最高 ,为 3.0 9。裸鼠定位显像示 ,8h肿瘤部位放射性明显浓聚 ,2 4h本底明显降低 ,肿瘤呈放射性“热”区。结论 1 53Sm 生物素和CEAScFv core streptavidin预定位显像能提高靶 非靶比值 ,缩短显像时间 ,改善图像质量。
- 杨卫东李彪朱承谟江旭峰冯国伟吴祥甫
- 关键词：结肠直肠肿瘤放射免疫检测动物实验
- 抗癌胚抗原嵌合重链抗体与核心链霉亲和素融合基因在昆虫细胞中的表达
- 2001年
- 将抗癌胚抗原嵌合重链抗体与核心链霉亲和素融合基因插入昆虫杆状病毒供体质粒pFastBacHTa中 ,经大肠杆菌DH10Bac体内转座 ,产生重组杆状病毒pBacHTa VH Cr3 CS。将其转染粉纹夜蛾Tn 5B1 4细胞 ,经扩增后在细胞内进行表达。SDS PAGE分析结果表明 ,在粉纹夜蛾Tn 5B1 4细胞中都表达产生一条特异性蛋白质 ,其相对分子质量约为 75 0 0 0左右 ,以Westernblot分析表明 ,该特异条带即为VH Cr3 CS蛋白。SDS PAGE和Westernblot分析结果表明 ,以HRP标记的生物素作为抗体进行蛋白质印迹在相对分子质量 75 0 0 0处可见表达条带 ,表明融合蛋白能特异性的与生物素结合 ,RIA表明重组杆状病毒表达产生的VH Cr3 CS蛋白能与CEA有较高的结合力。
- 杨卫东李彪朱承谟杨冠珍吴祥甫
- 关键词：癌胚抗原昆虫杆状病毒
- 抗癌胚抗原单链抗体与核心链霉亲和素基因的融合及在大肠杆菌的表达被引量：1
- 2000年
- 制备抗癌胚抗原 (CEA )单克隆抗体的单链抗体 ,在保留抗原抗体结合位点的同时有效降低抗体的分子量不仅可减少人抗鼠抗体反应 (HAMA ) ,而且适合放射免疫显像。为纯化及核素标记抗体 ,将单链抗体基因与核心链霉亲和素基因融合并在大肠杆菌得到高效表达 ,表达量占菌体总蛋白的 2 4%。SDS PAGE和蛋白质印迹图谱显示表达产物分子量为 41kD ,与其基因编码蛋白质的理论推算值相符。表明融合蛋白能特异性地与生物素结合 ,RIA表明表达产物具有结合其特异性抗原CEA的能力 ,以HRP标记的生物素作为抗体进行蛋白质印迹在 41kD处可见表达条带。说明表达物不仅能与生物素结合且能特异性地与CEA结合。
- 杨卫东李彪朱承谟杨冠珍吴祥甫
- 关键词：癌胚抗原单链抗体基因表达
- 分泌癌胚抗原肿瘤靶向性Cu,Zn-SOD的基因克隆及表达被引量：2
- 2001年
- 将 Cu,Zn- SOD与抗癌胚抗原 ( CEA)单链抗体基因 ( Sc Fv gene)融合 ,重组到含 T7启动子的表达载体 p ET- 2 2 b( + )中 ,构建表达质粒 p ETSOD- Sc Fv,并转化大肠杆菌 BL2 1 ( DE3) ,进行高效表达 ,表达物占菌体可溶性总蛋白的 1 8%。SDS- PAGE和蛋白质印迹图谱显示表达物相对分子质量为 41 k D,与融合基因编码蛋白质的理论值相符。该蛋白质在大肠杆菌中为分泌型表达 ,有利于纯化。RIA测定表明表达产物能特异性地与抗原 CEA结合 ,邻苯三酚法测定也表明表达产物具有 SOD酶的活性 ,该融合蛋白为分泌 CEA肿瘤的靶向性治疗及放疗。
- 贺华君杨卫东施惠娟吴祥甫袁勤生
- 关键词：癌胚抗原单链抗体克隆
- Mn-SOD与抗癌胚抗原单链抗体基因的融合及高效表达被引量：2
- 2000年
- 将Mn SOD与抗癌胚抗原 (CEA)单链抗体基因 (ScFvgene)融合 ,重组到含T7启动子的表达载体 pET 2 2b(+)中 ,构建表达质粒pETMn SOD ScFv ,并转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,进行高效表达 ,表达物占菌体可溶性总蛋白的 2 4%。SDS PAGE和蛋白质印迹图谱显示表达物分子量为 45kD与融合基因编码蛋白质的理论值相符。该蛋白质在大肠杆菌中为分泌型表达有利于纯化。RIA测定表明表达产物能特异性的与抗原CEA结合 ,同时邻苯三酚法测定也表明表达产物具有SOD酶的活性 ,该融合蛋白为分泌CEA肿瘤的靶向性治疗提供新的途径。
- 贺华君杨卫东常雅宁施惠娟杨冠珍吴祥甫袁勤生
- 关键词：癌胚抗原单链抗体MN-SOD肿瘤治疗
- 抗癌胚抗原微型抗体基因在昆虫细胞中的表达
- 2001年
- 目的获得生物活性更高的癌胚抗原 (CEA)微型抗体用于放免显像。 方法将抗癌胚抗原微型抗体基因插入昆虫杆状病毒供体质粒pFastBacHTb中 ,经大肠杆菌DH10Bac体内转座 ,产生重组杆状病毒BacHT -VH-L ,将其转染粉纹夜蛾 (Tn - 5B1- 4)细胞 ,经扩增后在细胞内进行表达。 结果SDS -PAGE分析结果表明 ,在Tn- 5B1- 4细胞中表达产生一条特异性蛋白质 ,其分子量为 2 6kd左右 ;以Westernblot分析表明 ,该特异条带即为VH-L蛋白。RIA表明重组杆状病毒表达产生的VH -L蛋白能特异性的结合CEA ,较大肠杆菌表达物活性更高。结论昆虫细胞表达可制备生物活性更高的癌胚抗原微型抗体。
- 杨卫东李彪朱承谟贺华君杨冠珍吴祥甫
- 关键词：癌胚抗原昆虫杆状病毒基因表达肿瘤
