梅文枫
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
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- 基于RD-BmBacmid载体构建表达GFP蛋白的重组杆状病毒的方法
- 2014年
- 研究构建一种快速表达GFP蛋白的重组杆状病毒的方法。在复制缺陷型的家蚕杆状病毒(BmNPV)穿梭载体RD-BmBacmid基础上,利用PCR方法合成两端分别含有50bp左右同源臂的绿色荧光蛋白基因(AcGFP)片段和线性化的RD-BmBacmid共转染BmN细胞或家蚕幼虫,可以一步获得重组病毒,表达绿色荧光蛋白。实验结果表明,含有AcGFP基因的重组杆状病毒构建成功,在BmN细胞和家蚕幼虫中分别表达了绿色荧光蛋白。因而,本研究成功建立了一种快速构建重组杆状病毒并能够表达GFP蛋白的新方法。
- 梅文枫钱月忠史翠萍陈健
- 关键词：杆状病毒共转染绿色荧光蛋白
- 一种红色荧光蛋白基因稳定转化的家蚕细胞株构建及应用
- 2013年
- 构建一种红色荧光蛋白基因稳定转化的家蚕细胞株,用于检测细胞是否被家蚕核型多角体病毒(BmNPV)感染和快速、便捷地测定BmNPV滴度。首先构建BmNPV多角体蛋白基因(polh)启动子驱动的红色荧光蛋白基因(DsRed)表达盒,然后将该表达盒克隆至pIZT/V5-His中构建稳定转化载体pIZT-DsRed并转染家蚕卵巢上皮细胞BmN,经过终浓度为300μg/mL的博莱霉素(zeocin)筛选3个月后,最终获得DsRed稳定转化的家蚕细胞株BmN-RFP。当该细胞株感染BmNPV后,由于病毒晚期表达因子的活化引发polh启动子控制的DsRed表达,在荧光显微镜下可以观察到感染病毒的细胞发出红色荧光,因而BmN-RFP可用来指示BmNPV的感染。利用BmN-RFP细胞株,采用终点稀释法仅用3 d时间即可完成BmNPV滴度的测定。
- 陈和陈琴梅文枫钱月忠聂作明于威陈健张耀洲
- 关键词：红色荧光蛋白家蚕核型多角体病毒病毒滴度
- 复制缺陷型BmNPV载体的构建及初步应用被引量：5
- 2013年
- 家蚕核型多角体病毒(BmNPV)表达载体系统可以利用线性化技术或通过Bac-to-Bac系统构建重组病毒。为了解决采用这些方法构建重组病毒需要多步克隆和筛选,无法满足实验室水平快速和高通量表达目的蛋白质需求的问题,建立了一种快速便捷的重组病毒构建方法。首先以BmNPV基因组为基础构建家蚕杆状病毒穿梭载体BmBacmid,进而利用Red重组技术敲除病毒复制必需基因orf1629的部分序列,构建了一种复制缺陷型BmNPV穿梭载体RD-BmBacmid。利用RD-BmBac-mid单独转染或者与pBacPAK8-AcGFP共转染BmN细胞,证实了该载体的复制缺陷性,即需经同源重组修复orf1629基因后方可产生重组病毒。利用复制缺陷型BmNPV载体正筛选可以快速构建重组病毒表达目的蛋白质。
- 费伟强陈琴陈倩梅文枫边腾飞吕正兵于威陈健张耀洲吴祥甫
- 关键词：RED重组复制缺陷型转染
- PCR产物快速构建重组杆状病毒的方法及相关功能蛋白的研究
- 昆虫杆状病毒载体表达系统是应用最为广泛的真核表达系统之一。对于BmNPV病毒载体系统来说，传统的同源重组构建重组病毒的方法存在重组效率低、技术复杂且耗时费力的问题，即使通过Bac-to-Bac系统构建重组病毒也需要约2周...
- 梅文枫
- 关键词：PCR产物荧光蛋白
- 文献传递
