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口蹄疫病毒聚合酶3D基因核酸疫苗质粒的构建与表达: 根据中国口蹄疫流行毒株设计一对包含3D基因完整编码区的特异性引物,扩增出3D基因1410bp的特异带,并将纯化的扩增产物克隆到pMD18-T载体上.再用设计的酶切位点将3D基因连接到真核表达载体pCDNA3.1上,构建了...; 鲁会军韩松郑敏贾雷立王凯李昌金宁一; 关键词：口蹄疫口蹄疫病毒人畜共患传染病; 文献传递

鸡痘病毒PCR检测方法的建立被引量：14: 2004年; 根据已发表的鸡痘病毒 (fowlpox virus,FPV) 4 b核心蛋白基因的核苷酸序列设计合成了 2对引物 ,通过对影响PCR扩增因素的优化 ,2对引物在同一反应条件下 ,以抽提 FPV DNA或直接用其毒液制备的模板均能分别扩增出预期的 5 4 9、136 1bp的片段。特异性检测表明 ,2对引物对 FPV10 2株、FPV2 82 E4 (北京 )、FPV2 82 E4 (吉林 )、v FV2 82重组鸡痘疫苗毒及 FPV临床分离株均能扩增出相应特异性片段 ,而用鸡马立克氏病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、羊痘病毒、鸡胚成纤维细胞 (CEF)制备的模板分别进行 PCR扩增却成阴性。敏感性检测表明 ,2对引物 (p1 ,2 、g1 ,2 )分别能检测到 10 - 2 、10 - 3fmol的 FPV DNA和 10 0 .5、10 - 0 .5TCID50 的病毒。以上结果表明 ,本试验所建立的 FPV PCR检测法具有较高的特异性和敏感性 ,模板制作简单 ,完全可用于; 郭建顺金宁一夏志平金扩世徐敬龙贾雷立王凯; 关键词：鸡痘病毒 PCR检测方法引物设计

重组鸡痘病毒生物安全性评价的PCR方法的建立: 根据已发表的鸡痘病毒(FPV)4b核心蛋白基因的核苷酸序列设计合成了2对引物,通过对影响PCR扩增因素的优化,2对引物在同一反应条件下,以抽提vFV282重组鸡痘疫苗毒DNA或直接用其毒液制备的模板均能分别扩增出预期的5...; 郭建顺金宁一夏志平金扩世徐敬龙贾雷立王凯; 关键词：重组鸡痘病毒生物安全性鸡痘病毒病毒载体; 文献传递

电穿孔导入法在家兔精子基因转移中的应用被引量：11: 2000年; 用假阴道法采集青紫蓝家兔精液 ,经电击缓冲液清洗、适当稀释后 ,加入质粒 DNA,利用BAERON60 0 0型基因转移仪 ,选择 9组不同的电击条件对其进行电击处理 ,电击后的精子经 DNA 酶消化后作地高辛标记探针的原位杂交检测。结果显示 :( 1 )电穿孔导入法确实能使精子细胞携带上外源基因 ;( 2 )最佳的电击条件为 ,脉冲时间 50 0 ms,电压 6k; 黄伟民乔贵林赵君赖良学岳军明安靓王凯付殿国殷震李进; 关键词：基因转移精子家兔外源基因

口蹄疫病毒3AB基因在重组杆状病毒中的表达及检测: 利用杆状病毒表达系统进行了口蹄疫病毒3AB基因在重组杆状病毒中的表达研究。首先克隆了3AB基因片段,将pMD18-3AB质粒及杆状病毒转座载体质粒pFastBacⅠ分别用EcoRⅠ及XbaⅠ酶切后,用T4DNA连接酶连接...; 鲁会军金宁一韩松郑敏贾雷立王凯金扩世; 关键词：口蹄疫病毒 3AB基因杆状病毒; 文献传递

O型口蹄疫病毒VP1蛋白单克隆抗体的制备及其抗原识别位点的初步分析: 制备针对O型口蹄疫病毒VP1蛋白的单克隆抗体,并对其抗原识别位点进行初步分析。应用大肠杆菌表达的O型口蹄疫病毒VP1蛋白免疫。BALB/C小鼠。取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,用间接ELISA筛选阳性克隆...; 鲁会军韩松郑敏王凯贾雷立葛淑敏金扩世金宁一; 关键词：FMDV VP1蛋白单克隆抗体

禽流感病毒H_7亚型血凝素单克隆抗体的制备: 本实验用核酸疫苗免疫BALB/C小鼠。取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经三次克隆和间接ELISA筛选,获得ⅠA3、ⅠB3、ⅠC4和ⅠF7四株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过间接ELISA测定,单抗效...; 王凯金宁一鲁会军韩松徐一鸣胡仲明; 关键词：禽流感核酸疫苗单克隆抗体

口蹄疫感染与免疫动物鉴别诊断方法的建立: 2008年; 目的建立鉴别自然感染口蹄疫动物和口蹄疫灭活疫苗免疫动物的诊断方法。方法构建重组杆状病毒的转座质粒pFastBac-3AB,转化DH10 Bac感受态细菌,在体内进行重组,并经三重抗性与蓝白斑筛选,得到杆状病毒重组质粒Bacmid-3AB;将Bacmid-3AB转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒。以重组杆状病毒表达的3AB蛋白为抗原建立鉴别口蹄疫感染与免疫动物的ELISA诊断方法,并对各种反应条件进行优化,包括抗原包被时间、包被浓度、封闭剂、酶标抗体工作浓度等。结果获得了重组杆状病毒,成功表达了口蹄疫病毒3AB蛋白,并用纯化的3AB蛋白建立了检测口蹄疫病毒抗体的间接ELISA方法。用该方法检测FMDV感染动物和免疫动物血清抗3AB蛋白抗体,猪和牛感染血清检测的阳性率分别为83.3%和91.7%。结论用纯化的口蹄疫病毒3AB蛋白建立了鉴别诊断口蹄疫感染与免疫动物的ELISA诊断方法。; 鲁会军金宁一韩松郑敏王凯贾雷立李昌; 关键词：重组杆状病毒蛋白 ELISA

疲劳小鼠骨骼肌中差异表达基因的筛选和鉴定: 2004年; 选用 30只普通级 BAL B/ c雄性小鼠为试验对象 ,随机分成对照组、浸水组和游泳疲劳组。利用改进后的 m RNA差异显示法筛选疲劳小鼠骨骼肌中的差异表达基因 (DD- ESTs) ,经反向 Northern blot和测序鉴定后 ,获得了 4条阳性目的片段 ,其中有 3条 DD- ESTs只在游泳疲劳组表达 ,另一条呈现下调表达现象 ,登录 Gen Bank数据库获得登录号为 AY5 4 36 4 9、AY5 4 36 5 0、AY5 4 36 5 1和 AY5 4 36 5 2 。; 栾新红王凯柳巨雄李乾学吴永魁胡仲明; 关键词：骨骼肌差异表达基因基因筛选

禽流感病毒H7亚型血凝素单克隆抗体的制备: 本实验用核酸疫苗免疫BALB/C小鼠。取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经三次克隆和间接ELISA筛选,获得ⅠA3、ⅠB3、ⅠC4和ⅠF7四株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过间接ELISA测定,单抗效...; 王凯金宁一鲁会军韩松徐一鸣胡仲明; 关键词：禽流感核酸疫苗单克隆抗体; 文献传递

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王凯